任務(wù)六-家畜精液稀釋課件

復(fù)習(xí)上節(jié)課上新課任務(wù)六精液稀釋復(fù)習(xí)上節(jié)課任務(wù)六精液稀釋精液稀釋的目的

精液稀釋是采精及精液品質(zhì)檢查后，向精液中添加的適合精于體外存活并保持受精能力的液體。精液稀釋的目的是：

①擴(kuò)大精液量，增加一次采精量的可配母畜數(shù)。

②通過(guò)向精液中添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和保護(hù)劑，可延長(zhǎng)精子在體外的存活時(shí)間。③便于精液保存和運(yùn)輸。任務(wù)六精液稀釋一、精液稀釋液的成分及作用

（一）稀釋劑：稀釋劑主要用以擴(kuò)大精液容量，要求所選用的藥液必須與精液具有相同的滲透壓。嚴(yán)格地講，凡向精液中添加的稀釋液都具有擴(kuò)大精液容量的作用，均屬稀釋劑的范疇，但各種物質(zhì)添加各有其主要作用，一般用來(lái)單純擴(kuò)大精液量的物質(zhì)有等滲的氯化鈉、葡萄糖、蔗糖溶液等。

（二）營(yíng)養(yǎng)劑：主要為精子體外代謝提供養(yǎng)分，補(bǔ)充精子消耗的能量。如糖類、奶類、卵黃等。

一、精液稀釋液的成分及作用（一）稀釋劑：稀釋劑主要用以

（三）保護(hù)劑1、緩沖物質(zhì)：精子在體外不斷進(jìn)行代謝，隨著代謝產(chǎn)物(乳酸和CO2等)的累積，精液的pH逐漸下降，甚至?xí)l(fā)生酸中毒，使精子不可逆地失去活力。因此，有必要向精液中添加一定量的緩沖物質(zhì)，以平衡酸堿度。常用的緩沖劑有檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、磷酸二氫鉀等。近些年，生產(chǎn)單位采用三羥甲基氨基甲烷(Tris)作為緩沖劑，效果較理想。

2、防冷休克物質(zhì)在精液保存過(guò)程中，常進(jìn)行降溫處理，如溫度發(fā)生急劇變化，會(huì)使精子遭受冷休克而失去活力。發(fā)生冷休克的原因使精子內(nèi)部的縮醛磷脂在低溫下凍結(jié)凝固，影響精子正常代謝，出現(xiàn)不可逆的變性死亡。因此，在保存的稀釋液中加入抗冷物質(zhì)，使精子免受傷害。常用的抗冷休克物質(zhì)有卵黃、奶類等。3、防凍保護(hù)物質(zhì)在精液冷凍保存過(guò)程中，精液由液態(tài)向固態(tài)轉(zhuǎn)化，對(duì)精子的危害較大，不使用抗凍劑，冷凍精液就不能成功。一般常用甘油和二甲基亞礬(DMSO)作為抗凍劑。

（三）保護(hù)劑

4、抗菌物質(zhì)在采精和精液處理過(guò)程中，雖嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，也難免使精液受到細(xì)菌的污染，況且稀釋液中含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)較豐富，給細(xì)菌繁殖提供了較好條件。細(xì)菌過(guò)度繁殖不但影響精液品質(zhì)，輸精后也會(huì)使母畜生殖道感染，造成不孕。常用的抗菌物質(zhì)有青霉素、鏈霉素、氨基苯磺胺等。5、非電解質(zhì)或弱電解質(zhì)物質(zhì)：

副性腺中Ca2+、Mg2+

等強(qiáng)電解質(zhì)含量較高，刺激精子代謝和運(yùn)動(dòng)加快，在自然繁殖中無(wú)疑有助于受精，但這些強(qiáng)屯解質(zhì)又能促進(jìn)精于早衰、精液保存時(shí)間縮短。為此，需向精液中加入非電解質(zhì)或弱電解質(zhì)，以降低精液電解質(zhì)的濃度。常用的非電解質(zhì)和弱電解質(zhì)有各種糖類、氨基乙酸等。

4、抗菌物質(zhì)在采精和精液處理過(guò)程中，雖嚴(yán)格遵守操作規(guī)（四）、其他添加劑

除上述三種成分以外，另向精液中添加的、起某種特殊作用的微量成分都屬其他添加劑的范疇。1、酶類

過(guò)氧化氫酶能分解精液中的過(guò)氧化氫，提高精子活力；β—淀粉酶能促進(jìn)精子獲能等。

2、激素類向精液中添加催產(chǎn)素、前列腺E型等，能促進(jìn)母畜子宮和輸卵管的蠕動(dòng)，有利于精子運(yùn)行，提高受胎率。3、維生素類某些維生素如B1、B2、B12、C、E等具有改進(jìn)精子活力，提高受胎率的作用。（四）、其他添加劑二、稀釋液的種類1、現(xiàn)用稀釋液。等滲液：生理鹽水、蔗糖2、常溫保存稀釋液。以糖類和弱酸鹽為主，pH偏低3、低溫保存稀釋液。加入卵黃抗休克4、冷凍保存稀釋液。以卵黃、甘油為主體，具有抗凍的特點(diǎn)。二、稀釋液的種類三、稀釋液的配制★

A、稀釋液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，如配制后確需保存，經(jīng)消毒、密封后放入冰箱中最多能保存2—3d?！顱、配制稀釋液的器具，用前必須洗凈并嚴(yán)格消毒，用稀釋液沖洗后才能使用?！?/p>

C、配制稀釋液的蒸餾水要新鮮，最好現(xiàn)用現(xiàn)制?！?/p>

D、所用藥品要純凈，一般使用化學(xué)純制劑。藥品稱量要準(zhǔn)確，經(jīng)溶解、過(guò)濾、消毒后方能使用。

★E、卵黃要取自新鮮雞蛋，抽取時(shí)盡量不要混入蛋清，待稀釋液消毒冷卻后加入?！颋、奶粉的顆粒比較大，溶解時(shí)先用等量蒸餾水調(diào)成漿糊狀，然后加蒸餾水至需要量，用脫脂棉過(guò)濾后放人90—95'C的水浴中消毒lOmin。三、稀釋液的配制四、稀釋倍數(shù)與稀釋方法（一）稀釋倍數(shù)的表示方法（二）精液的稀釋倍數(shù)的確定★

A、精液稀釋倍數(shù)，應(yīng)依據(jù)母畜每次受精所需的有效精子數(shù)、稀釋液的種類、受配母畜數(shù)量等確定?！顱、公牛的精液一般進(jìn)行10—40倍稀釋，公豬的精液一般做2－4倍稀釋。四、稀釋倍數(shù)與稀釋方法（一）稀釋倍數(shù)的表示方法（三）稀釋倍數(shù)的計(jì)算首先要考慮以下幾個(gè)因素：豬1、該份精液總量250ml2、精子密度2億/ml3、有效精子數(shù)（保存后使用前精子活率）0.64、每次輸入有效精子數(shù)10億5、每次輸精量20ml該份精液的有效精子數(shù)：250ml×2×0.6=300億則分成的份數(shù)：300億/10億=30份則稀釋后總量：30×20=600ml則稀釋倍數(shù)：600-250/250=1.4（三）稀釋倍數(shù)的計(jì)算★

C、案例：有一頭黑白花種公牛一次采得鮮精11ml，經(jīng)檢查，精子活力為O．7，密度是12億／ml。如為母牛輸精時(shí)要求有效精子數(shù)不少于3000萬(wàn)，輸精量為0.25ml，本次采得的精液處理后，能為多少頭母牛輸精？

解：lml原精液中的有效精子數(shù)＝12億／ml×0.7＝8.4億／ml。

稀釋后的lml精液中的有效精子數(shù)＝0.3億÷0.25ml＝1.2億／ml

稀釋倍數(shù)＝8.4億／ml÷1.2億／ml＝7(倍)。

輸精母牛頭數(shù)＝11ml×7(倍)÷0.25ml＝308(頭)

答：本次采得的精液能為300余頭母牛輸精?，F(xiàn)以公牛精液稀釋倍數(shù)的計(jì)算方法舉例如下：★C、案例：有一頭黑白花種公牛一次采得鮮精11ml，經(jīng)檢（四）精液的稀釋方法及注意事項(xiàng)1、精液稀釋應(yīng)在采精后立即進(jìn)行?！顱、采精后把精液迅速置于30℃的保溫瓶中，以防溫度的變化?！顲、稀釋時(shí)把精液和稀釋液同時(shí)放在30℃的水浴鍋中?！顳、稀釋時(shí)把稀釋液沿著精液容器的壁慢慢加入精液中，邊加入邊攪拌?！顴、如需高倍稀釋，應(yīng)先做3—5倍的低倍稀釋，然后再高倍，以防稀釋打擊。（四）精液的稀釋方法及注意事項(xiàng)

精液稀釋后即可進(jìn)行保存。通過(guò)保存，可延長(zhǎng)精子在體外的存活時(shí)間，便于使用和運(yùn)輸。

現(xiàn)行的精液保存方式有3種，即

★1、常溫(15—25℃)保存

★2、低溫(0－5℃)保存

★3、冷凍(—79—196℃)保存。液態(tài)保存固態(tài)保存

任務(wù)七精液的液態(tài)保存精液稀釋后即可進(jìn)行保存。通過(guò)保存，可延長(zhǎng)精子在體外的存活時(shí)

1、精液常溫保存常溫保存的溫度在15－25℃之間，溫度允許有一定變動(dòng)，所以又稱為變溫保存或室溫保存。常溫保存所需設(shè)備簡(jiǎn)單，特別適合豬的精液?！?/p>

（1）原理

常溫保存是通過(guò)增加酸度，降低精液的pH來(lái)抑制精子的代謝活動(dòng)，以減少其能量消耗。酸性在一定范圍內(nèi)是可逆抑制，通常把pH調(diào)整到6.35左右。

1、精液常溫保存★

（2）方法

（1）向稀釋液中充入二氧化碳，如伊利尼變溫稀釋(1VT)。（2）利用精子本身在代謝中產(chǎn)酸，自行調(diào)節(jié)pH，如康奈爾大學(xué)稀釋液(CUE)。（3）向稀釋液中加入有機(jī)酸，如己酸稀釋液(CME)。（4）常溫保存的稀釋液除降低pH使精于代謝減慢外，還依靠給精子補(bǔ)充足夠的養(yǎng)分，同時(shí)加入抗菌物質(zhì)以抑制細(xì)菌的孳生。（5）有的還在稀釋液中加入緩沖物質(zhì)；有的加入明膠以阻止精子運(yùn)動(dòng)。

★（2）方法★

（3）稀釋液稀釋液除能降低PH，使精子代謝減慢外，還能給精子補(bǔ)充足夠的養(yǎng)分，同時(shí)加入抗菌物質(zhì)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖。另外加入明膠緩沖物質(zhì)，阻礙精子運(yùn)動(dòng)?！铮?）稀釋液

2、精液低溫保存★

（1）原理

低溫保存主要是向稀釋液中添加抗冷物質(zhì)，防止精子發(fā)生冷休克。在體溫狀態(tài)下，精子的代謝正常，當(dāng)溫度降低時(shí)，精子的代謝活動(dòng)減慢，當(dāng)溫度降至0—5℃，精于的代謝較弱，幾乎處于休眠狀態(tài)。此時(shí)精子的物質(zhì)代謝和能量代謝均降到較低水平，廢物累積減少，且此溫下不利微生物的繁殖，故可達(dá)到保存目的?！?/p>

（2）稀釋液

在馬、綿羊的精液保存中應(yīng)用，參見P186表5—5。2、精液低溫保存★（2）稀釋液在馬、綿羊的精液保存★

（3）方法

精液進(jìn)行低溫保存時(shí)，應(yīng)采取逐步降溫的方法，并使用含卵黃的稀釋液，以防冷休克。A、首先把稀釋后的精液，按著一個(gè)輸精量(羊10—20個(gè)輸精量)，分裝到一個(gè)試管中，封口，再包以數(shù)層棉花或紗布，最外層用塑料袋扎緊，防止水分滲入。B、把包裝好的精液放到0－5℃的低溫環(huán)境中，經(jīng)1—2h，精液即降至0—5℃。泡沫盒保存精液★（3）方法精液進(jìn)行低溫保存時(shí)，應(yīng)采取逐步降溫的方法，

注意事項(xiàng)：

A、在保存過(guò)程中，要維持溫度的恒定，防止升溫。

B、如特殊情況或運(yùn)輸可用廣口保溫瓶進(jìn)行，在保溫瓶中加7—8成滿的冰塊，把包裝好的精液放在冰塊上蓋好，注意定期添加冰塊。

C、如無(wú)冰源，可采用化學(xué)制冷法，在冷水中加入一定量的氯化銨或尿素，可使水溫達(dá)2－4℃。注意事項(xiàng)：

3、精液冷凍保存精液冷凍保存是利用液氮(－196℃)或干冰(－79℃)作冷源，將精液處理后冷凍起來(lái)，達(dá)到長(zhǎng)期保存的目的。精液冷凍保存是人工授精工作的一大進(jìn)步，由于保存時(shí)間的延長(zhǎng)，使精液的使用不受地區(qū)的限制，從而加快了家畜品種的育成和改良速度?！?/p>

（1）精液冷凍保存的原理：利用超低溫使精液和精子快速冷凍，快速越過(guò)形成冰晶的溫度范圍（0-60℃）、精液或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。同時(shí)在抗凍劑的存在下使精子免受凍傷，在溫度上升至體溫精液解凍后精子能夠保持完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能和受精能力。3、精液冷凍保存精液冷凍保存是利用液氮(－196℃)或干液態(tài)→固態(tài)結(jié)晶態(tài)：緩慢降溫形成。水分子有序形成冰晶對(duì)精子有害：機(jī)械和滲透壓損傷。玻璃態(tài)：快速降溫形成。水分子無(wú)序形成玻璃樣的超微粒結(jié)晶，對(duì)精子無(wú)害。（0～-60℃）（

-15～-25℃）（-60～-250℃）

玻璃化是可逆的，不穩(wěn)定的，當(dāng)緩慢升溫時(shí)又可能形成冰晶化。結(jié)晶態(tài)：緩慢降溫形成。水分子有（0～-60℃）（-15～

冷凍時(shí)細(xì)胞的損傷冰晶：在0～-60℃低溫區(qū)，緩慢降溫條件下形成的，降溫越慢，冰晶越大，-15～-25℃對(duì)精子危害最大。冰晶的形成對(duì)精子造成的機(jī)械損傷和滲透壓損傷是引起精子死亡的主要物理因素

。玻璃化：在-60～-250℃超低溫區(qū)，從冰晶化區(qū)域內(nèi)開始，就快速降溫，迅速越過(guò)冰晶化進(jìn)入玻璃化階段，此階段對(duì)精子無(wú)害。

添加冷凍保護(hù)劑（甘油，二甲基亞砜等）

作用：增強(qiáng)精子抗凍能力，并對(duì)防止冰晶發(fā)生起到重要作用。冷凍時(shí)細(xì)胞的損傷★

（2）精液冷凍技術(shù)

牛的精液冷凍已普及，現(xiàn)以牛精液冷凍為例，將精液冷凍制作技術(shù)敘述如下：◆采精及精液品質(zhì)檢查

：精液冷凍效果與精液品質(zhì)密切相關(guān)。做好采精的準(zhǔn)備和操作，爭(zhēng)取獲得優(yōu)質(zhì)的精液?！艟合♂?/p>

：根據(jù)凍精的種類、分裝劑型和稀釋倍數(shù)的不同，精液的稀釋方法也不盡一致，現(xiàn)生產(chǎn)中多采用一次或兩次稀釋法：★（2）精液冷凍技術(shù)A、一次稀釋法：將含有甘油、卵黃等的稀釋液按一定比例加入精液中，適合于低倍稀釋。B、兩次稀釋法：為避免甘油與精子接觸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而造成的危害，采用兩次稀釋法較為合理。首先用不含甘油的稀釋液(第一液)對(duì)精液進(jìn)行最后稀釋倍數(shù)的半倍稀釋，然后把該精液連同第二液一起降溫至0-5℃(全程1h左右)，并在此溫下作第二次稀釋?！艚禍仄胶饨禍睾螅严♂尯蟮木悍胖迷?-5℃的環(huán)境中停留2—4h，平衡的目的是使精子有一段適應(yīng)低溫的過(guò)程，同時(shí)使甘油充分滲入精子內(nèi)部，達(dá)到抗冷凍保護(hù)作用。A、一次稀釋法：將含有甘油、卵黃等的稀釋液按一定比例加入精液任務(wù)六-家畜精液稀釋ppt課件◆精液分裝A、顆粒凍精B、細(xì)管凍精◆

凍結(jié)A、顆粒凍精冷凍：在廣口液氮桶上安裝銅紗網(wǎng)，調(diào)至距液氮面1—3cm，預(yù)冷幾分鐘后，使紗網(wǎng)附近溫度達(dá)-80—-1000C，將精液均勻地滴壓在銅紗網(wǎng)上，2-4min后，待精液顆粒充分凍結(jié)、顏色變淺發(fā)亮?xí)r，用小鏟輕輕鏟下顆粒凍精，每50-100粒裝入紗布袋中，沉入液氮保存?！艟悍盅bA、顆粒凍精◆凍結(jié)B、細(xì)管凍精：除按上述方法對(duì)細(xì)管進(jìn)行熏蒸冷凍外，也可采用液氮浸泡法。把分裝好的精液細(xì)管平鋪于特制的細(xì)管架上，放人盛裝液氮液氮柜中浸泡，蓋好，5min后取出保存。這種方法啟動(dòng)溫度低，冷凍效果好。◆

凍精解凍A、低溫水解凍（0—5℃）B、溫水解凍（30—40℃）：效果最好C、高溫解凍（50—70℃）B、細(xì)管凍精：除按上述方法對(duì)細(xì)管進(jìn)行熏蒸冷凍外，也可采用液氮牛細(xì)管精液牛細(xì)管精液解凍解凍★

（3）凍精的保存與運(yùn)輸

目前，凍精保存普遍采用液氮做冷源，以液氮罐為容器貯存和分發(fā)凍精。

◆

液氮及其特性

液氮是空氣中的氮?dú)饨?jīng)分離、壓縮形成的一種無(wú)色、無(wú)味、無(wú)毒的液體，沸點(diǎn)溫度為—195．8℃。在常溫下，液氮沸騰，吸收空氣中的水氣形成白色煙霧。液氮具有很強(qiáng)的揮發(fā)性，當(dāng)溫度升至18℃時(shí)，其體積可膨脹680倍。此外，液氮又是不活潑的液體，滲透性差，無(wú)殺菌能力?；谝旱纳鲜鎏匦?，使用時(shí)要注意防止凍傷、噴濺、窒息等，用氮量大時(shí)要保持空氣通暢，注意保護(hù)?！铮?）凍精的保存與運(yùn)輸◆

液氮容器

包括液氮貯運(yùn)容器和凍精貯存容器，前者為貯藏和運(yùn)輸液氮用，后者為專門保存凍精用(圖5—9)。當(dāng)前冷凍精液專門使用的液氮罐型號(hào)較多，但其結(jié)構(gòu)基本相同。A、罐壁

由內(nèi)外兩層構(gòu)成，一般由堅(jiān)硬的合金制成。B、夾層

指內(nèi)外殼之間的空隙。為增加罐的保溫性，抽成真空。真空度為1．33X10-4pa，在夾層中裝有活性碳、硅膠及鍍鋁絳