動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體課件(用)

選修3：專題2細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

選修3：專題2細(xì)胞工程1生物種間雜交想像圖

已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—雞、鼠—兔、雞—鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成功完成了酵母菌—雞、人—胡蘿卜等細(xì)胞的融合。想了解更多信息，可通過(guò)網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。有夢(mèng)想，才會(huì)有創(chuàng)造！生物種間雜交想像圖已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，2一、動(dòng)物細(xì)胞融合請(qǐng)同學(xué)們閱讀課本P52動(dòng)物融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合請(qǐng)同學(xué)們閱讀課本P52動(dòng)物融合31.概念：

動(dòng)物細(xì)胞融合（cellfusion）也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。

融合和形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合（cellfusion43、動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程

為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性保留融合活性3、動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？滅5

二.動(dòng)物細(xì)胞融合二.動(dòng)物細(xì)胞融合6誘導(dǎo)融合的方法物理法：化學(xué)法：生物法：電激、離心、振動(dòng)聚乙二醇（PEG)滅活的病毒4.意義：

突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體誘導(dǎo)融合的方法物理法：電激、離心、振動(dòng)聚乙二醇（PEG)滅活7總結(jié)：比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體總結(jié)：比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交8二、單克隆抗體什么是單克隆抗體單：克?。嚎贵w：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞？無(wú)性繁殖抗原————抗體特異性結(jié)合二、單克隆抗體什么是單克隆抗體單：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞？無(wú)性繁殖抗原9抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2.抗體是如何產(chǎn)生的？？單克隆抗體抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？？單克隆抗體10抗原

動(dòng)物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞

抗體抗體不純篩選單一漿細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體產(chǎn)量少、純度低、特異性差單克隆抗體4、傳統(tǒng)制備抗體的缺點(diǎn)是？3、傳統(tǒng)制備抗體的方法是？抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞抗體抗體不純篩11如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？單克隆抗體問(wèn)題討論提示：1.什么樣的細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體？2.什么樣的細(xì)胞可以無(wú)限增殖？如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？單克隆抗體問(wèn)題討論提示12

設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞:只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞:能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體既能無(wú)限增值又能產(chǎn)生特異性抗體特點(diǎn)設(shè)計(jì)方案：雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體既能無(wú)限增值又能13雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小14BBBB瘤瘤瘤瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選雜種細(xì)胞已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加PEG促融，獲得雜種細(xì)胞。單克隆抗體思考：BBBB瘤瘤瘤瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液15單克隆抗體思考：1.小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？2.制備過(guò)程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體思考：1.小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？細(xì)胞的16單克隆抗體①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義②在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)越性。③生物導(dǎo)彈（作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤）

單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義單克隆抗體的17動(dòng)物特異性免疫分離B淋巴細(xì)胞（B）；找到骨髓瘤細(xì)胞（G）。注意B淋巴細(xì)胞是一個(gè)系列。（B1,B2,B3,---Bn）細(xì)胞融合——三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)”上培養(yǎng)篩選雜交瘤細(xì)胞（只有BG雜交瘤細(xì)胞存活。但BG雜交瘤細(xì)胞也是一個(gè)系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培養(yǎng)基上不能存活。）第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系列

，每孔只放一個(gè)雜交瘤細(xì)胞?！翱寺』囵B(yǎng)”每個(gè)雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行“單一抗體檢測(cè)”，“檢測(cè)陽(yáng)性”的孔內(nèi)即是所需要的雜交瘤細(xì)胞。選擇所需要的雜交瘤克隆細(xì)胞群，體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。提取單克隆抗體。單抗的制備過(guò)程要點(diǎn)：動(dòng)物特異性免疫單抗的制備過(guò)程要點(diǎn)：18

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案3、圖中B為_(kāi)_______過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________2、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______

4、C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段。