臨床微生物標(biāo)本的正確采集與運(yùn)送課件

臨床微生物標(biāo)本的

正確采集與運(yùn)送

臨床微生物標(biāo)本的

正確采集與運(yùn)送

1前言

“準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷”

“針對性病原學(xué)治療”

正確的微生物標(biāo)本采集和運(yùn)送，是準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的前提！前言

“準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷”

“針對性病原學(xué)治療”

2標(biāo)本采集的重要性1、病原微生物能否成功檢出，有一半的因素取決于標(biāo)本采集與運(yùn)送是否滿意；2、細(xì)致采集標(biāo)本和有效的運(yùn)送可有效降低分離微生物的難度。標(biāo)本采集的重要性1、病原微生物能否成功檢出，有一半的因素取決3標(biāo)本采集的原則1、盡早采集，應(yīng)在應(yīng)用抗生素前或停藥一周后采集標(biāo)本，如不能停藥，應(yīng)于下次抗生素應(yīng)用前采集；2、掌握標(biāo)本的送檢指征；3、選擇正確的采集容器；4、采取正確的采集方法，無菌采集：無菌部位的標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格無菌技術(shù)操作，其他標(biāo)本應(yīng)盡可能避免標(biāo)本外細(xì)菌污染；5、收集足夠的標(biāo)本量；選擇不同的采集時(shí)機(jī)和標(biāo)本種類；6、正確保存和運(yùn)送：標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。標(biāo)本采集的原則1、盡早采集，應(yīng)在應(yīng)用抗生素前或停藥一周后采集4

1、血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送2、尿液標(biāo)本的采集與運(yùn)送3、糞便標(biāo)本的采集與運(yùn)送4、呼吸道標(biāo)本的采集與運(yùn)送5、皮膚、軟組織感染的標(biāo)本采集與運(yùn)送常見標(biāo)本采集與運(yùn)送方法

1、血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送常見標(biāo)本采集與運(yùn)送方法5血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送6一、血液標(biāo)本的采集指征1.一般患者出現(xiàn)以下一種體征時(shí)可作為采血的重要指征（《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)操作規(guī)范》）發(fā)熱（Ｔ≥38℃）或低溫（Ｔ≤36℃）；寒戰(zhàn)；WBC增多（計(jì)數(shù)≥10×109/L，特別有核左移時(shí)）；皮膚粘膜出血；昏迷；多器官衰竭；BP降低；C反應(yīng)蛋白升高及呼吸困難；血液病患者出現(xiàn)粒細(xì)胞減少（成熟的多形核白細(xì)胞＜1×109/L）；或同時(shí)具備上述幾種體征時(shí)而臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血液培養(yǎng)。一、血液標(biāo)本的采集指征1.一般患者出現(xiàn)以下一種體征時(shí)可作為采72、幾種特殊情況：①新生兒可疑敗血癥時(shí)，除發(fā)熱或低溫外，很少培養(yǎng)出細(xì)菌，應(yīng)同時(shí)做尿液和腦脊液培養(yǎng)。②老年菌血癥患者可能不發(fā)熱或不低溫，如伴有身體不適、肌痛或中風(fēng)，可能是感染性心內(nèi)膜炎，也應(yīng)采取血培養(yǎng)③骨髓培養(yǎng)與血液培養(yǎng)的送檢指征基本一致，臨床常規(guī)血液感染有指征時(shí)以抽血培養(yǎng)為主。但當(dāng)骨髓炎時(shí)或長期使用抗生素患者，抽取骨髓培養(yǎng)陽性率遠(yuǎn)高于血培養(yǎng)。2、幾種特殊情況：8二、血液標(biāo)本的采集方法標(biāo)本容器：血培養(yǎng)瓶，注意：提前從冰箱內(nèi)取出復(fù)溫。1、皮膚消毒程序：嚴(yán)格執(zhí)行以下三步法:①穿刺處皮膚首先用75%的酒精擦拭并待干30秒②用1-2%碘酊作用30秒或碘伏作用60秒，從穿刺點(diǎn)向外畫圈消毒，消毒直徑≥5cm；③75%的酒精脫碘待干。對碘過敏者用酒精消毒60秒，待干后采血。二、血液標(biāo)本的采集方法標(biāo)本容器：血培養(yǎng)瓶，注意：提前從冰箱內(nèi)92、培養(yǎng)瓶消毒程序：①75%的酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞或蓋子60秒，并待干；②用無菌棉簽清除橡皮塞表面殘余酒精后注入血液。2、培養(yǎng)瓶消毒程序：10三、血液標(biāo)本的采集方法3、抽取血液后，不要換針頭，直接注入血培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻，以防血液凝固。若同時(shí)作需氧和厭氧培養(yǎng)，應(yīng)先將標(biāo)本接種到厭氧瓶中，然后再注入需氧瓶中，嚴(yán)防空氣注入?yún)捬跗恐小Ｈ?、血液?biāo)本的采集方法3、抽取血液后，不要換針頭，直接注入血11四、采血套數(shù)及血量：一般情況：建議不同部位2套4瓶每套包括一個(gè)需氧培養(yǎng)瓶和一個(gè)厭氧瓶；采血量與培養(yǎng)基量：1:5～1:10為宜；成人：8～10ml/瓶；兒童：1～5ml/瓶；血液量太多或太少不利于細(xì)菌檢出，陽性率增加3～5%/ml，人體血液內(nèi)包含各種抑菌因子或抗生素，血量太多可能會抑制細(xì)菌生長。四、采血套數(shù)及血量：一般情況：建議不同部位2套4瓶121.盡可能在抗菌素使用前，在24小時(shí)采2～3套，因?yàn)檠芯孔C實(shí)該量足以檢測所有的菌血癥和真菌血癥；2.入院前2周內(nèi)接受抗生素藥物治療的患者，連續(xù)3天，每天采2套，可選用能中和或吸附抗生素的培養(yǎng)基；3.對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰來到之前0.5～1小時(shí)采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)熱后1小時(shí)采血。因?yàn)榘l(fā)熱時(shí)血液中可能沒有細(xì)菌。五、血液標(biāo)本的采血時(shí)間1.盡可能在抗菌素使用前，在24小時(shí)采2～3套，因?yàn)檠芯孔C實(shí)13五、血液標(biāo)本的采血時(shí)間4.特殊的全身或局部感染采血培養(yǎng)的建議：①可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎的患者應(yīng)在不同部位采2～3套血標(biāo)本；②不明原因發(fā)熱，如：隱性膿腫、傷寒熱、稽留熱等應(yīng)先采集2～3套標(biāo)本，24～36小時(shí)后估計(jì)體溫升高前，再采集2套以上；③可疑菌血癥或真菌血癥，但血培養(yǎng)持續(xù)陰性，應(yīng)改變血培養(yǎng)方法，選擇其他種類的培養(yǎng)瓶，如：高滲培養(yǎng)瓶、吸附抗生素的培養(yǎng)瓶、結(jié)核菌培養(yǎng)瓶，以獲得罕見或茍養(yǎng)的微生物；④可疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，在1～2小時(shí)內(nèi)采集3套血標(biāo)本，若24小時(shí)后陰性，再采集3套以上。五、血液標(biāo)本的采血時(shí)間4.特殊的全身或局部感染采血培養(yǎng)的建議14

血液標(biāo)本的采集方法5、采血點(diǎn)：靜脈采血，一個(gè)靜脈點(diǎn)只能采一套血培養(yǎng)標(biāo)本，采集第2套是應(yīng)更換靜脈穿刺點(diǎn)；除非懷疑CR－BSLs否則不可從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置處取血。6、血培養(yǎng)瓶保存：及時(shí)送檢，若不能則常溫保存、切勿冷藏，因?yàn)槟承┛琉B(yǎng)菌會在冰箱溫度中死亡。如天氣寒冷，應(yīng)注意保溫措施。

血液標(biāo)本的采集方法5、采血點(diǎn)：靜脈采血，一個(gè)靜脈點(diǎn)只能采一15

血液標(biāo)本的采集方法7、標(biāo)識：多套、多點(diǎn)采集時(shí)培養(yǎng)瓶上應(yīng)注明采集時(shí)間、部位，但不能將標(biāo)簽貼在條形碼上，否則儀器無法識別。

血液標(biāo)本的采集方法7、標(biāo)識：多套、多點(diǎn)采集時(shí)培養(yǎng)瓶上應(yīng)注明16血液標(biāo)本的病原菌血液標(biāo)本中常見的病原菌：血液標(biāo)本中致病菌以細(xì)菌為主（需氧菌為主。厭氧菌、真菌也占相當(dāng)比例），偶為支原體；醫(yī)院內(nèi)感染的菌血癥常見的病原菌：金葡、表葡、腸球菌、大腸埃希菌、肺克、其他腸桿菌、銅綠假單胞菌、不動(dòng)桿菌、厭氧菌、真菌等。血液標(biāo)本的病原菌血液標(biāo)本中常見的病原菌：血液標(biāo)本中致病菌以細(xì)17血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送社區(qū)感染的菌血癥常見的病原菌：肺炎鏈球菌、金葡、表葡、腸球菌、草綠色鏈球菌、大腸埃希菌、沙門菌屬、流感嗜血桿菌，厭氧菌、真菌明顯少見。血液標(biāo)本的采集與運(yùn)送社區(qū)感染的菌血癥常見的病原菌：18尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)?zāi)蛞簶?biāo)本微生物檢驗(yàn)19尿液微生物標(biāo)本送檢指征有典型的尿路感染癥狀；肉眼血尿或膿尿；尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為WBC增高和/或亞硝酸鹽陽性；不明顯的發(fā)熱，無其他局部癥狀；留置導(dǎo)尿管病人出現(xiàn)發(fā)熱；膀胱排空功能受損；泌尿系疾病手術(shù)前。尿液微生物標(biāo)本送檢指征有典型的尿路感染癥狀；20尿液微生物標(biāo)本采集時(shí)間①未使用抗生素前；或停藥后一周，如不能停用抗菌藥物，應(yīng)在下次使用前。②一般取晨起第一次尿液送檢（或尿液在膀胱內(nèi)停留數(shù)小時(shí)）③在臨床癥狀明顯時(shí)收集。尿液微生物標(biāo)本采集時(shí)間①未使用抗生素前；或停藥后一周，如不能21采集方法①清潔中段尿采集法：晨尿5～10ml，最常用，易污染；醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)：囑患者睡前少喝水，清晨起來用肥皂水清洗外陰部，從前到后擦干外陰部。開始排尿，握杯子外面，但不要觸及杯子邊緣。舍棄前小段尿液和后段，取中間段的尿液，充滿試管的一半，小心旋緊杯子的蓋子立即送檢，1小時(shí)內(nèi)接種。②恥骨上膀胱穿刺法：金標(biāo)準(zhǔn)，痛苦，主要用于厭氧菌培養(yǎng)或標(biāo)本留取困難的嬰幼兒。采集方法①清潔中段尿采集法：晨尿5～10ml，最常用，易污染22采集方法③導(dǎo)尿法：未留置導(dǎo)尿者可能導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡為留取微生物標(biāo)本而導(dǎo)尿；留置導(dǎo)尿者：應(yīng)當(dāng)使用75%酒精或碘伏等消毒導(dǎo)尿管2遍（連接處上方，消毒長度至少5cm）后，使用無菌注射器抽取標(biāo)本送檢。不可以從集尿袋中采集，或是打開導(dǎo)尿管和集尿袋的接口進(jìn)行采集。注意：消毒劑要待干，盡量不混入消毒劑；長期留置導(dǎo)尿管者應(yīng)更換導(dǎo)尿管后再采集標(biāo)本。定期夾閉尿管者應(yīng)開放棄去前段尿，留取中段尿采集方法③導(dǎo)尿法：23尿液微生物標(biāo)本保存：①用無菌容器盛標(biāo)本，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，及時(shí)接種，運(yùn)送過程安全，防溢出及污染；②若不能立即接種可將標(biāo)本置于4～8℃的冰箱內(nèi)保存，但不得超過8小時(shí)；③尿液中不得加入防腐劑或消毒劑。尿液微生物標(biāo)本保存：①用無菌容器盛標(biāo)本，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，及時(shí)24尿液培養(yǎng)結(jié)果說明①正常參考值：無細(xì)菌生長；②細(xì)菌學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)：A膀胱穿刺尿：細(xì)菌均有意義；B清潔尿中段：菌落計(jì)數(shù)：革蘭陰性菌≥105/ml,革蘭陽性菌濃度≥104/ml；但如為非留置導(dǎo)尿管病人臨床上無尿路感染表現(xiàn)，則要求2次尿培養(yǎng)的細(xì)菌數(shù)均≥105/ml,并為同一細(xì)菌時(shí)為病原菌；C用導(dǎo)尿法采集尿標(biāo)本細(xì)菌定量培養(yǎng)計(jì)數(shù)≥103/ml時(shí)有意義。尿液培養(yǎng)結(jié)果說明①正常參考值：無細(xì)菌生長；25尿培養(yǎng)最常見的病原菌：大腸埃希菌約占60～80%。其他：腸球菌、非發(fā)酵菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌、葡萄球菌、結(jié)核桿菌、支原體、衣原體等。尿培養(yǎng)最常見的病原菌：大腸埃希菌約占60～80%。26不合格尿標(biāo)本①同一種標(biāo)本培養(yǎng)出4種以上的細(xì)菌，應(yīng)認(rèn)為收集或處理標(biāo)本不當(dāng)被污染；②送檢容器不合格；③送檢時(shí)間超過2小時(shí)。不合格尿標(biāo)本①同一種標(biāo)本培養(yǎng)出4種以上的細(xì)菌，應(yīng)認(rèn)為收集或27糞便微生物標(biāo)本的采集與運(yùn)送糞便微生物標(biāo)本的采集與運(yùn)送28糞便標(biāo)本送檢指征急慢性腹瀉；伴或不伴有發(fā)熱\全身乏力者無痛性大量水樣便或米泔樣稀便先吐后瀉，可疑為食源性疾病者；長期抗菌藥物治療后腹瀉患者；嬰幼兒高熱驚厥者?？梢蔀橹卸拘跃』?。糞便標(biāo)本送檢指征急慢性腹瀉；伴或不伴有發(fā)熱\全身乏力者29標(biāo)本采集的方法：①采集容器：一次性無菌盒②采集時(shí)間：盡可能在急性期或發(fā)病早期和應(yīng)用抗菌藥物之前，在不同的時(shí)間采集2～3份標(biāo)本可以提高致病菌分離率；標(biāo)本采集的方法：①采集容器：一次性無菌盒30采集方法自然排便法：采標(biāo)本時(shí)取有膿血、粘液、組織碎片的糞便2～3克，液體糞便則取絮狀物，1～3ml直接裝入容器或保存液或運(yùn)送培養(yǎng)基中。采集方法自然排便法：采標(biāo)本時(shí)取有膿血、粘液、組織碎片的糞便231糞便標(biāo)本的采集與運(yùn)送：直腸拭子法：一般用于排便困難的患者或兒童。方法：用肥皂水將肛門周圍洗凈，用NS棉拭子插入肛門，成人約4～5cm，兒童2～3cm與直腸粘膜直接接觸，輕旋轉(zhuǎn)，必須將拭子置于滅菌容器內(nèi)送檢。食物中毒患者也可以取食物、嘔吐物、胃液培養(yǎng)。糞便標(biāo)本的采集與運(yùn)送：直腸拭子法：一般用于排便困難的患者或兒32糞便標(biāo)本的采集與運(yùn)送：標(biāo)本運(yùn)送：糞便標(biāo)本應(yīng)立即送檢，運(yùn)送過程安全，防溢出及污染，溫室條件下不能超2h。不合格標(biāo)本：①糞便標(biāo)本放置時(shí)間超過2h；②直腸拭子未置于運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢；③運(yùn)送的標(biāo)本中混有尿液；④標(biāo)本已干燥。糞便標(biāo)本的采集與運(yùn)送：標(biāo)本運(yùn)送：糞便標(biāo)本應(yīng)立即送檢，運(yùn)送過程33呼吸道標(biāo)本的采集與運(yùn)送呼吸道標(biāo)本的采集與運(yùn)送341、部位：①上呼吸道：喉以上部位；②下呼吸道：氣管、支氣管、肺泡2、檢查項(xiàng)目：痰液的細(xì)菌、真菌、結(jié)核菌培養(yǎng)；真菌、結(jié)核菌涂片1、部位：35上呼吸道標(biāo)本微生物檢驗(yàn)送檢指征感冒伴咽痛細(xì)菌性咽扁桃腺炎上感伴有鼻竇炎等上呼吸道標(biāo)本微生物檢驗(yàn)送檢指征感冒伴咽痛36上呼吸道標(biāo)本采集方法咽拭子：患者漱口，將舌外拉，用無菌棉拭子通過舌根到咽后壁或腭垂的后側(cè)，涂抹數(shù)次。注意拭子避免接觸口腔和舌粘膜。鼻咽拭子：由鼻腔穿入鼻咽部，輕輕旋轉(zhuǎn)擦拭，然后取出，再從另一鼻腔收集標(biāo)本。采集過程中避免唾液污染，標(biāo)本迅速送檢。注：以晨起后采集為佳。上呼吸道標(biāo)本采集方法咽拭子：患者漱口，將舌外拉，用無菌棉拭子37痰標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)送檢指征：

咳嗽、咳痰、咯血、呼吸困難、發(fā)熱伴白細(xì)胞增高、胸痛。注：肺部感染患者有25～50%可能發(fā)生菌血癥，應(yīng)同時(shí)作血培養(yǎng)。痰標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)送檢指征：38采集方法：用一次性無菌留痰盒①自然咳痰法：以晨痰為佳先用清水或漱口液反復(fù)漱口或牙刷（不蘸牙膏）清潔口腔和牙齒用力咳出深部的第一口痰于無菌容器中；咳痰困難者可用4.5%NS霧化吸入，使痰易咳出。對咳痰少的幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部的氣管，使其咳嗽。采集方法：用一次性無菌留痰盒①自然咳痰法：以晨痰為佳39支氣管鏡采集法:氣管吸引法:環(huán)甲膜穿刺\經(jīng)胸壁穿刺注小兒吸痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將試子伸入咽部，刺激咳嗽時(shí)可將噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。支氣管鏡采集法:40痰標(biāo)本采集注意事項(xiàng)晨痰為佳立即送檢，以防細(xì)菌死亡如不能及時(shí)送檢者應(yīng)置冰箱保存4℃痰標(biāo)本采集注意事項(xiàng)晨痰為佳41痰標(biāo)本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)①經(jīng)篩選的痰液(涂片鏡檢鱗狀上皮細(xì)胞<10個(gè)/低倍視野,白細(xì)胞>25個(gè)/低倍視野,或二者比例<1:2.5)連續(xù)兩次分離出相同病原體。②痰定量培養(yǎng)分離到病原菌濃度≥106cfu/ml。③痰或下呼吸道采樣標(biāo)本中分離到通常非呼吸道定植的細(xì)菌或其它特殊病原體。痰標(biāo)本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)①經(jīng)篩選的痰液42呼吸道不合格標(biāo)本①咽拭子、咳痰、吸出的分泌物進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)無意義，應(yīng)采用氣管穿刺法留取標(biāo)本；②痰標(biāo)本呈水樣、唾液樣；③送檢時(shí)間超過2h；④同時(shí)同部位或同一天兩份相同的檢測標(biāo)本。呼吸道不合格標(biāo)本①咽拭子、咳痰、吸出的分泌物進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)無43化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)441、指征：局部有感染的典型特征，紅腫熱痛伴或不伴有全身癥狀疑有皮膚軟組織急性化膿性感染，包括癤、癰、蜂窩織炎、丹毒、褥瘡感染、乳房膿腫等創(chuàng)傷感染，如術(shù)后切口感染、燒傷感染、臍炎1、指征：局部有感染的典型特征，紅腫熱痛伴或不伴有全身癥狀452、采集方法：①組織塊：嚴(yán)格消毒皮膚和手術(shù)區(qū)域，經(jīng)手術(shù)或侵入性技術(shù)獲得的標(biāo)本最好；盡量多采集組織；置于無菌容器或厭氧運(yùn)送系統(tǒng)送檢，標(biāo)本量少要加入少量無菌NS送檢。2、采集方法：①組織塊：嚴(yán)格消毒皮膚和手術(shù)區(qū)域，經(jīng)手術(shù)或侵入46②膿腫；a開放性傷口：開放性傷口抽吸前用無菌NS擦去表面分泌物，以免污染，盡量抽吸深部膿液送檢。b閉合性膿腫：抽吸前用2～3％碘