大腸菌群計數(shù)檢驗

大腸菌群計數(shù)檢驗第1頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月舊國家標(biāo)準(zhǔn)第2頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第一法大腸菌群MPN計數(shù)法第3頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第二法大腸菌群平板計數(shù)法第4頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第一天

第1、3、5、7小組：使用第一法（附帶做第二法中，兩個平板接種），以自來水為樣品。第2、4、6小組：使用第二法（附帶做第一法中，3個試管初發(fā)酵試驗），以污水為樣品。第5頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第一法：檢樣稀釋與初發(fā)酵試驗MPN：表示食品中大腸菌群數(shù)是以每100ML或克檢樣內(nèi)大腸菌群最大可能數(shù)。一般采用9管法.一般樣品25ML（克）+225ML生理鹽水=1：10，從10-1取樣1ML，接種到3管LST（月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯）中。從10-1取樣1ML+9ML生理鹽水=1：100，從10-2取樣1ML，接種到3管LST中。從10-2取樣1ML+9ML生理鹽水=1：1000，從10-3取樣1ML，接種到3管LST中。第6頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第二法：檢樣稀釋與平板計數(shù)檢樣稀釋：同上。平板計數(shù)：1、每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1mL稀釋樣品，另外一個平皿加1mL生理鹽水作空白對照。2、及時將15—20mLVRBA（結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂）傾注每個平皿中。3、待瓊脂凝固后，再加3—4mLVRBA覆蓋表層。翻轉(zhuǎn)平板培養(yǎng)。第7頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第二天第一法復(fù)發(fā)酵試驗

用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。第8頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第二法平板菌落數(shù)的選擇與證實試驗平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在15CFU～150CFU之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大。證實試驗從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB肉湯管內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)24h～48h，觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性。第9頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）原理溴甲酚紫，中性時呈藍(lán)紫色，酸性時呈黃色，如果顏色不變（呈藍(lán)紫色），說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群。膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長繁殖。分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群，看小倒管中的氣體。第10頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月1產(chǎn)氣2不產(chǎn)氣杜氏發(fā)酵管產(chǎn)氣情況第11頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第12頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第四天：大腸菌群計數(shù)報告第一法： 確證大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。第13頁，課件共14頁，創(chuàng)作于2023年2月第二法： 經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）中計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數(shù)。例：10-4樣品稀釋液1mL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽