銀杏葉凍干粉可行性報告

銀杏葉凍干粉可行性報告項目提出的背景、投資的必要性及意義山東仁和制藥有限公司是于2001年5月在成功收購原郯城華銀制藥廠的基礎上組建而成的綜合性制藥企業(yè)。前身為山東郯城華銀制藥廠，始建于1995年，生產(chǎn)的劑型為中成藥片劑和中藥提取物。2002年4月又成功收購了破產(chǎn)企業(yè)煙臺康泰制藥有限公司，增加了15個化學藥品的片劑。。目前公司已形成了包括中藥、西藥、抗生素、中藥提取物、保健食品口服液、生化藥、食品七大系列共計40多個品種的綜合性制藥企業(yè)，同時正在研發(fā)的18個新藥和保健食品正在國家局的審批中。年實現(xiàn)工業(yè)總產(chǎn)值10500萬元，銷售收入8500多萬元，利稅1600多萬元。山東仁和制藥有限公司位于中國銀杏之鄉(xiāng)——山東省郯城縣境內(nèi)，西鄰205國道和京滬高速，交通便利。郯城銀杏資源占整個中國銀杏資源的三分之一以上，公司具有巨大的資源優(yōu)勢。公司注冊資本3832.44萬元，總資產(chǎn)8000多萬元。公司全廠職工322人。其中在職職工273人，從事生產(chǎn)人員208人，管理技術(shù)人員92人。技術(shù)人員占職工總數(shù)的32%，其中高級職稱6人，中級職稱26人，初級職稱44人。為適應企業(yè)發(fā)展需要，2003年1月開始投資3000多萬元，對公司進行了全面的GMP改造,包括新建了1600平米的包括片劑、膠囊劑、顆粒劑的新建固體制劑車間，嚴格按照GMP要求對辦公區(qū)、綜合倉庫、質(zhì)檢樓、前處理車間及提取車間精干包的改造、中藥材庫、凈藥材庫、空調(diào)主控室、配電室組成、鍋爐及廠區(qū)地面進行了硬化等改造工作。形成年產(chǎn)片劑20億片，膠囊劑1億粒，顆粒劑1000萬袋，中藥提取物100噸，中藥飲片500噸的生產(chǎn)能力。同時嚴格按保健食品GMP和藥品GMP正在改建的能生產(chǎn)10ml口服液3600萬支和100ml口服液300萬瓶的口服液生產(chǎn)車間正在建設。目前，本公司形成了能夠生產(chǎn)包括中藥、西藥、抗生素、保健食品口服液、食品、中藥提取物等的綜合性制藥企業(yè)。公司占地面積50980m2，其中預留面積為8020m2，綠化面積為9670m2，約占總面積31.2%，建筑面積為24000m2。其中質(zhì)量保證部為510m2，生產(chǎn)車間總計6200m2，倉庫面積為2000m2。2001至2003年連續(xù)被評為臨沂市醫(yī)藥系統(tǒng)先進單位，2004年5月一次性通過了國家局的GMP認證，2004年年底被認定為高新技術(shù)企業(yè)，2005年被評為臨沂市農(nóng)業(yè)重點龍頭企業(yè)。公司堅持以市場為中心，以新產(chǎn)品研發(fā)為突破口，堅持四個創(chuàng)新和科學發(fā)展觀，積極創(chuàng)建先進的企業(yè)文化，打造優(yōu)秀的公司品牌和良好的企業(yè)形象，為建成現(xiàn)代化的企業(yè)管理制度并力爭在5年內(nèi)把公司建成魯南地區(qū)產(chǎn)值、利稅、效益、知名度高第二位的大型企業(yè)集團制藥企業(yè)。把公司建成一個集“產(chǎn)、學、研、銷”于一體的“科、工、貿(mào)”聯(lián)合體，形成年產(chǎn)值10億元，利稅過億元的規(guī)模，使之成為全市醫(yī)藥行業(yè)的第二大知名品牌。1銀杏葉功效成分簡述銀杏葉具有豐富的活性成分和巨大的藥用功效：概括的說：銀杏樹是目前發(fā)現(xiàn)的當今世界上最奇特、對人類貢獻最大的植物，特別是銀杏葉具有五大成分五大功效，銀杏葉將是世界上最有發(fā)展前景的中藥材，能夠治療世界上很多的疑難雜癥：（1）.黃酮苷類：對心腦血管疾病，高血脂，高血壓，清除氧自由基具有顯著的療效，是目前世界上治療該類疾病最顯著的藥物。（2）.銀杏內(nèi)酯A、B、C、M類：是血小板活化因子（PAF）拮抗劑，是銀杏葉中最重要的活性成分，是治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的特效藥物。（3）.白果內(nèi)酯類：白果內(nèi)酯有很強的生物活性，為神經(jīng)精神病藥物，對因年老的呆傻癥有奇異的療效，它能抗神經(jīng)末梢的衰老，被譽為真正抗衰老化學物質(zhì)。（4）.銀杏酚酸類：可促進胃液和膽汗的分泌；具有抗細菌和消炎的作用；制成無殘留農(nóng)藥；含有抗真菌物質(zhì)，能夠真正刺激神經(jīng)中樞系統(tǒng)的作用。（5）.聚異戊烯醇類：促進造血功能，改善肝臟機能，對再生障礙性貧血（白血?。?，對各種肝病、糖尿病具有最顯著的療效，是治療這類疾病最具有開發(fā)前景的藥物。1.1銀杏葉主要成分研究情況：自20世紀60年代開始，許多國家采用現(xiàn)代分離技術(shù)對銀杏葉的化學成分進行研究，經(jīng)藥理實驗和臨床驗證，發(fā)現(xiàn)銀杏葉的多方面生物活性與其所含特定化學成分有關。德國WillamarSchwabe首次注冊了銀杏葉的一種簡單提取物，并于1972年申請了專利（WSchwabeDE176708和DE2117429），定名為EGb761，將其用于治療心腦血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，具有顯著療效，且無毒副作用；銀杏內(nèi)酯類化合物（ginkgolides）具有顯著療效，且無毒副作用；銀杏內(nèi)酯類化合物具有增強血小板活化因子（PAF） 拮抗的作用。將銀杏制劑列為治療藥物的國家有德國、法國和中國，其他國家均只將其用為保健食品或非處方用藥。美國開發(fā)出的銀杏保健食品已經(jīng)獲得FDA的批準，使人們對銀杏葉的保健藥用價值更加重視，對銀杏葉化學成分研究也越來越深入。最近不斷從銀杏葉中發(fā)現(xiàn)一些新的生物活性成分。迄今為止，從銀杏葉中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了100多種化學成分。這些化學成分主要有黃酮苷類（flavonoidglycosides）、萜內(nèi)酯類(terpenoids)、聚異戊烯醇類(polyprenols)、6-羥基犬尿喹啉酸(6-hydroxykynurenicacid,6HKA)、有機酸、銀杏酚酸類(phenolicacids)及烷基酚、烷基酚酸（又稱銀杏酸，ginkgolicacids）、4ˊ-甲氧基吡哆醇(4ˊ-O-methypyridoxine)等?！S酮類化合物：（1）組成及結(jié)構(gòu)銀杏葉中黃酮類化合物(flavonoids)可分為黃酮、又黃酮和兒茶素等三類化合物，共有36種，主要以苷的形式存在，是銀杏葉的主要藥理成分之一，含量較高，在銀杏葉中含量變化較大。據(jù)作者對貴州等地330份樣品及銀杏葉生產(chǎn)發(fā)育期間黃酮苷含量的檢測分析表明：不同地區(qū)、各單株之間變化幅度在0.2%～2.74%；葉中黃酮苷含量＞0.8%者占測定數(shù)的48.0%；不同生育期間葉中黃酮苷含量相差2倍左右，4月份含量最高，4～6月份呈下降趨勢，6至10月含量變化不明顯。（2）銀杏黃酮：銀杏黃酮的苷元有7種，即槲皮素（quercetin）、山奈素（kaempferol）、異鼠李素（isorhamnetin）、楊梅素（myricetin）、芹菜素（apigenin）、木犀草素（luteolin）、三粒小麥黃酮（tricetin）等，前三種是其主要成分。銀杏葉及其提取物（GBE）的質(zhì)量控制中主要檢測這三種黃酮苷元的含量。銀杏黃酮又稱單黃酮，銀杏葉中3種主要單黃酮類的結(jié)構(gòu)銀杏黃酮中，槲皮素類的化合物有9個，其糖基主要是葡萄糖和鼠李糖基，有些糖基上還連接有肉桂酰基。山奈素比槲皮素在3ˊ位少一個酚羥基，極性較小，銀杏葉中山奈素類化合物有8個。異鼠李素是槲皮素的3ˊ上羥基被甲基化的衍生物，銀杏葉中異鼠李素化合物有4個。（3）雙黃酮：銀杏葉中的雙黃酮是由兩分子黃酮母核通過C—C鍵聚合而成的一類化合物，一共有6種，即銀杏素（ginkgetin），異銀杏素（isogenkgetin）、穗花杉雙黃酮（amentoflavone）、金錢松雙黃酮（sciadoputydin）、去甲銀杏雙黃酮（bilobetin）、5ˊ-甲氧基去甲銀杏雙黃酮（5ˊ-methoxybilo-betin）等。（4）兒茶素類：兒茶素類化合物具有治療肝中毒的作用和抗腫瘤活性。銀杏葉中的兒茶素類化合物有6種，即兒茶素（catechin）、表兒茶素（epicatechin）、沒食子酸兒茶素（gallocat-echin）、表沒食子兒茶素（epigallocatechin）、4，8″-兒茶素沒食子兒茶素（4，8″-catechingallocatechin）和4，8″-沒食子兒茶素沒食子兒茶素（4，8″-gallocatechingallocatechin）。（5）銀杏黃酮類化合物的理化性質(zhì)黃酮類為酚性成分，屬多環(huán)多元酚類，由于含有苯并γ-吡酮而形成β-烯醇酮（β-enolone）結(jié)構(gòu)，這種烯醇酮結(jié)構(gòu)所表現(xiàn)的特性是黃酮分子中的酚羥基的弱酸性與鐵鹽的顯色反應；還能與鋁形成配合物，使光吸收長移，顯較深的顏色，可用于鑒定黃酮類化合物（即鋁鹽比色法）；同時酚羥基具有還原性，表現(xiàn)在提取加工過程中的氧化變色，在撮份離時可加入還原劑進行保護。銀杏黃酮類化合物的苷元多為結(jié)晶體、苷多為無定性粉末。黃酮苷類由于在結(jié)構(gòu)中引入糖基，故均有旋光性，且多為左旋。銀杏黃酮、黃酮醇及其苷類子含有7，4ˊ-位助色團，顏色為深黃色；在紫外光下產(chǎn)生熒光，可用于銀杏黃酮類化合物的定性檢驗。銀杏黃酮類化合物的苷元一般難溶于或不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚等有機溶劑及稀堿溶液中。銀杏黃酮苷與糖結(jié)合成苷后，水溶性相應增大，一般可溶于熱水、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯中，難溶于乙醚、石油醚、苯、氯仿等有機溶劑。銀杏黃酮類化合物因分子中具有酚羥基而顯弱酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺等?！y杏萜內(nèi)酯：（1）組成和結(jié)構(gòu)銀杏內(nèi)酯化合物屬于萜類化合物，又稱為銀杏萜內(nèi)酯，由倍半萜內(nèi)酯和二萜內(nèi)酯組成，是銀杏葉中一類重要的活性成分。白果內(nèi)酯（bilobalide）屬倍半萜內(nèi)酯，是R.T.Major于1967年和K.Weinges1969年分離得到的，是目前從銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的唯一的一個倍半萜內(nèi)酯化合物。銀杏內(nèi)酯A（GA）、銀杏內(nèi)酯B（GB）、銀杏內(nèi)酯C（GC）、銀杏內(nèi)酯M（GM）、銀杏內(nèi)酯J（GJ）（ginkgolideA、ginkgolideB、ginkgolideC、ginkgolideM、ginkgolideJ）為二萜內(nèi)酯化合物，于1932年由S.Furukawa首次從銀杏葉中分離出來，1967年才由K.Nakanish、M.Maruyama和K.Okabe等人進一步分離和確定其化學結(jié)構(gòu)。白果內(nèi)酯類分子骨架由15個碳原子組成，具有互相稠合在一起的4個五元環(huán)，其中有1個五元碳環(huán)，3個五元內(nèi)酯碳環(huán)，五元環(huán)上連有1個天然產(chǎn)物中罕見的叔丁基。白果內(nèi)酯有很強的生物活性，為神經(jīng)精神病藥物，對因年老的呆傻癥有奇異的療效，它能抗神經(jīng)末梢的衰老，被譽為真正抗衰老化學物質(zhì)。而銀杏內(nèi)酯類化合物的分子骨架由20個碳原子組成，具有6個五元環(huán)，其中有2個五元碳環(huán)，3個五元內(nèi)酯環(huán)，1個四氫呋喃環(huán)，2個五元碳環(huán)以螺環(huán)的形式連接在一起，其余的環(huán)以稠合的方式連接，形成一個剛性籠狀的特殊立體化學結(jié)構(gòu)。銀杏內(nèi)酯分子中均具有天然產(chǎn)物中罕見的叔丁基。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯M、銀杏內(nèi)酯J結(jié)構(gòu)差別在于含有羥基數(shù)目和羥基連接的位置不同。銀杏內(nèi)酯均為強血小板活化因子拮抗劑，是銀杏葉中特殊生理活性的關鍵成分。國內(nèi)外對這類成分做了大量化學、藥理和臨床研究。作者1989年以來對貴州等地及不同生育期生長的銀杏葉進行了分析測定，在327多份樣品檢測結(jié)果中發(fā)現(xiàn)銀杏葉中萜內(nèi)酯含量差異很大，變幅為0.04%～1.17%。0.3%以上者占樣本數(shù)的35.2%；萜內(nèi)酯組分中銀杏內(nèi)酯（GA+GB+GC）含量大于白果內(nèi)酯（BB）含量。不同生育期間葉中萜內(nèi)酯含量相差5～10倍，秋季（9～10月）含量最高。（2）銀杏內(nèi)酯類化合物的理化性質(zhì)銀杏內(nèi)酯類化合物為白色結(jié)晶，味苦，熔點為300℃左右。其中銀杏內(nèi)酯M加熱至280℃分解，無明顯熔點。因分子中含有羥基和多個含氧酯基，比一般的倍半萜和二萜類化合物的極性大，易溶于乙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、二甲基亞砜等有機溶劑中。銀杏內(nèi)酯類化合物對濃酸和強氧化劑很穩(wěn)定，用濃硝酸溶解銀杏內(nèi)酯類化合物后蒸發(fā)至干，其內(nèi)酯仍不破壞。銀杏內(nèi)酯類化合物分子中含有多個內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。與堿作用生成鹽，可溶于水。將生成的鹽用酸酸化，則生成原來的內(nèi)酯而不溶于水，卻溶解于有機溶劑，這一特性可用于銀杏內(nèi)酯的提取分離。銀杏內(nèi)酯類化合物分子中有C1、C2、C3、C7、C8、C10、和C14等7個手性碳原子，這些手性碳原子的構(gòu)型決定了銀杏內(nèi)酯類化合物的剛性籠狀構(gòu)型及其特殊的生物活性?！郛愇煜┐迹壕郛愇煜┐紝儆诙嘞┐碱悾ɑ蚨噍拼碱悾?，是銀杏葉中存在的一種類酯化合物。由一系列異戊烯基單元首尾相連構(gòu)成的長鏈化合物，有順式和反式兩種。1982年日本田中康之等從銀杏葉中分離出聚異戊烯醇類化合物，其分子中異戊烯基單元數(shù)為14～22。王成章（1992）等證明我國銀杏葉也含有樺木聚異戊烯醇型聚異戊烯醇，其分子中異戊烯基單元數(shù)為15～21。這類化合物廣泛存在于哺乳動物的肝臟、胰臟和腎臟等器官中，對維持肝功能，促進造血功能能起到重要作用，是一類值得引起重視的，具有廣闊開發(fā)前景的生物活性成分。近年來對銀杏葉中聚異戊烯醇類化合物進行了系統(tǒng)分離、純化及組分鑒定，采用石油醚浸提、硅膠柱吸附、以石油醚-氯仿乙酸乙酯梯度洗脫，獲得聚異戊烯醇產(chǎn)物純度為79.0%，得率為0.4%～0.49%。聚異戊烯醇類化合物的異戊烯基結(jié)構(gòu)單元數(shù)為15～22。研究結(jié)果表明，銀杏葉中聚異戊烯醇類化合物含量隨產(chǎn)地和樹齡不同相差甚大，其中以貴州省正安縣銀杏基地樹葉（2～5年生）中含量最高（12.1mg/g），是貴州省務川縣老樹葉（15年以上）的8倍左右?！袡C酸類銀杏葉中含有脂肪酸、羥基酸、莽草酸、氨基酸及6-羥基犬尿喹啉酸（6-HKA）等。6-HKA是廣譜中樞神經(jīng)氨基酸拮抗劑，它作用于N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA），能降低腦缺氧，是銀杏葉提取物中一種重要的生物活性成分，近年來已引起了國內(nèi)外學者的重視，其全面的藥理作用有待進一步研究。氨基酸也是銀杏葉中重要的有機酸。對銀杏葉中氨基酸測試結(jié)果表明：銀杏葉中氨基酸含量極其豐富，總氨基酸量為10.7%～15.4%（干基計），均含有9種必需氨基酸，氨基酸組成合理，必須氨基酸含量占總氨基酸的比值達39.1%～41.5%，必需氨基酸占非必需氨基酸比值為66.5%～70.9%?！铀帷⑼榛蛹巴榛铀犷愩y杏葉中酚酸類（phenolicacids）據(jù)波蘭MariaEllnain-Woj-taszek（1997）報道主要有7種，即原兒茶酸（protocatechuicacid）、p-羥基苯酸（p-hydroxybenzoicacid）、香草酸（vanillicacid），咖啡酸（caffeicacid）、p-香豆酸（p-coumaricacid）、隊員魏酸（ferulicacid）、綠原酸（chlorogenicacid）。近年來，酚酸及其酯的生物活性引起了廣泛的關注。其中阿魏酸、香豆酸、咖啡酸及綠原酸可促進胃液和膽汗的分泌。香豆酸、香草酸和咖啡酸有抗細菌和消炎的作用，原兒茶酸是一種抗真菌物質(zhì)，綠原酸還有刺激神經(jīng)中樞系統(tǒng)的作用。經(jīng)HPLC法分析了銀杏葉，根和種皮中的7種游離酚酸，其含量分別為19.9μg/g鮮葉；345μg/g根和2.71μg/g種皮中。經(jīng)水解后，原兒茶酸是主要組分，含量最高達272μg/g（鮮），主要存在于葉和根中。烷基酚及烷基酚酸屬于長鏈苯酚類化合物，目前所說的銀杏酸主要指這類化合物，其中有白果酸（ginkgolicacid）、氫化白果酸（hydroginkgolicacid）、銀杏酚（bilobol）、白果酚（ginkgol），這些成分可能與致過敏、致突變有關，是銀杏葉提取物中毒副作用成分，銀杏葉提取物（GBE）中要控制其含量在5μg/g以下。據(jù)作者研究，我國銀杏葉銀杏酸含量為500～2000μg/g，并采用現(xiàn)代分離手段，控制GBE產(chǎn)品銀杏酸含量在2～3μg/g。另外，4ˊ-甲氧基吡哆醇（4ˊ-O-methmylpyridoxine，MPN）是白果的主要毒性成分（毒害神經(jīng)），也存在于銀杏葉中，據(jù)德國波恩大學AnsgarArenz等（1996）報道，在銀杏葉中4ˊ-甲氧基吡哆醇含量2～4mg/kg。這種毒素不僅為維生素B6的拮抗劑，并能在大腦中抑制谷氨酸轉(zhuǎn)化為4-氨基丁酸（GABA），其毒性反應主要引起陣發(fā)性痙攣、神經(jīng)麻痹等。※一般營養(yǎng)成分銀杏葉中含有多種營養(yǎng)成分，據(jù)作者對貴州不同地區(qū)銀杏葉測定結(jié)果表明：其蛋白質(zhì)、糖、維生素C、胡蘿卜素、維生素E及礦質(zhì)元素鈣、磷、鐵、氟、銅、錳、鋅、鉻、鈷、硼、硒等含量極豐富，是食品資源的重要原料。1.2.國外對銀杏葉開發(fā)研究情況在距今1.7億年前的中生代，銀杏類植物遍布全世界，成為地球上分布最廣泛地植物群落。直到目前，除了南極洲和赤道兩側(cè)外，在地球上中生代沉積的巖石中，均已發(fā)現(xiàn)了葉形和脈序與現(xiàn)代銀杏非常相似的銀杏類植物葉化石。大約到了距今一百萬年前的第三紀末和第四紀初，整個地球氣候變冷，北半球發(fā)生了強大的冰川運動，隨之植物群落也發(fā)生了根本性的變化。銀杏類植物抗不住這一嚴寒的侵襲，大部分地區(qū)的銀杏類植物全部滅絕，在亞洲大陸也頻于絕種。只在東亞——中國、朝鮮、韓國和日本的局部地區(qū)被保留下來，成為當今具有重大科學價值的“活化石”。隨著人類社會的不斷向前發(fā)展，這一孑遺植物又在世界各地繁衍起來。銀杏在日本分布于北到本州青森縣，南達九州鹿兒島的廣大地區(qū)。在日本：研制出了十余種銀杏系列化妝品投放國內(nèi)外市場，開辟了銀杏加工利用增值的新途徑。銀杏列為中藥，最早見于十四世紀吳瑞的《日用本草》、李時珍的《本草綱目》。日本學者山下太藏、左藤文比生（1930）和中尺浩（1941）分析出銀杏葉片中含有黃酮。70年代初，我國北京制藥廠及日本藥物學家分別用銀杏葉提取物——黃酮甙類，制造出用于治療心血管和腦血管疾病的片劑、針劑。法國學者從銀杏葉片中分離出銀杏精B，它可抑制血小板活化因子的活性，同時還可防止過敏反應。銀杏外種皮的腐蝕作用，多年來已引起銀杏產(chǎn)區(qū)人們的關注。葉秀蓮等（1987）從銀杏外種皮中提取出銀杏酸和銀杏酚，成為治療小兒腦膜炎藥物的主要原料。盡管如此，銀杏種仁中卻含有有毒物質(zhì)，食用過量會引起中毒。本世紀40年代，在波蘭的拉卡夫，專門建立了銀杏種植園。另外，在法國巴黎、保加利亞、匈牙利、前蘇聯(lián)的克里米亞半島南岸及高加索一帶也栽植著銀杏，并能安全越冬。在意大利帕杜阿植物園，也栽植著自中國引種的銀杏。隨著藥物科學研究事業(yè)的向前發(fā)展和銀杏廣泛引種于世界各地，近三百年來，國外植物學家逐漸開始對銀杏作深入細致地植物學研究，其中凱普費（kaempfer）是歐洲第一個研究銀杏的植物學家。1690年他觀察了栽植在日本的銀杏，隨后對銀杏作了植物學描述和記載，但他比我國有關銀杏的記載卻晚了430多年。凱普費率先提出“Ginkgo”這個名字。1771年林奈（Linnaeus）采納了這個名稱，并根據(jù)許多標本上葉片具有深裂的特征，用“biloba”作為種名。1896年，在植物科學史上，記載著一項轟動世界的重要發(fā)現(xiàn)，日本東京帝國大學小石川植物園的助教平瀨作五郎發(fā)現(xiàn)了具有運動機能的銀杏精子，并繪制出了銀杏精子外形圖。他的發(fā)現(xiàn)得到了當?shù)貜氖轮参镄螒B(tài)解剖學研究的井健次郎博士、德國植物形態(tài)學家哥貝爾和英國植物化石學家斯科物等人的承認。平瀨作五郎成為世界上最早發(fā)現(xiàn)銀杏具有精子的科學家。他在植物科學史上的偉大貢獻，將會永遠載入史冊。Arnott詳細研究了1000多枚銀杏葉片后，第一次揭示出銀杏葉片大約有10%具有葉脈聯(lián)合的現(xiàn)象。Favre—Duchartre(1956)在法國巴黎地區(qū)，對銀杏生殖周期作了詳細觀察和研究，獲得了銀杏達到種子成熟大約需要14個月的結(jié)論。Tuleck等（1960）報道了起源于班葉銀杏愈傷組織的一個精氨酸型突變細胞系，對此引起了許多植物學家的關注。在銀杏雌雄性的鑒別上，在原來形態(tài)鑒別的基礎上，巖崎文雄（1980）首先提出了同功酶鑒別法，隨后他又提出化學鑒別法。這兩種方法在生產(chǎn)實踐上都可推廣應用，70年代日本從我國進口大量銀杏樹葉，從中提煉出治療心血管疾病和腦血管疾病的黃酮甙藥物，首次用于臨床，療效很好，這在當時轟動了整個醫(yī)藥界。直到1989年秋季新加坡廣播電視臺還繼續(xù)播送這一消息。日本對白果多次作了食品成分分析，提出了各組成的含量。日本是非常講究食品結(jié)構(gòu)的國家，日本人民每餐必吃5～6個白果。目前白果已成為日本人民必不可少的食品。白果在職貯藏期間易發(fā)生硬化和變質(zhì)，是果品貯藏亟待解決的問題。巖崎滿里子（1984）作了這方面的試驗研究，他設計了五種試驗貯藏條件，結(jié)果表明，以低溫低濕密閉貯藏和低溫密閉貯藏為最好。齋藤明（1979）首先進行了從花粉發(fā)生愈傷組織，再從愈傷組織誘導器官分化的嘗試，獲得了完整的銀杏單倍植株，成為銀杏科研的世界創(chuàng)舉。美國的伊利諾斯州是美國著名的“銀杏之鄉(xiāng)”，1978年6月該州的銀杏愛好者們組建了一個“金色化石樹”協(xié)會，以促進該州102個縣銀杏的研究和發(fā)展。該協(xié)會成員雖然喜歡銀杏，但不喜歡中國古代起的“鴨掌”這個不雅致的名字，也不喜歡園藝家起的恰如其分的名字“白果樹”。因此，該協(xié)會發(fā)起人Ronsiss建議改為“金色化石樹”，一是因為銀杏是“活化石”；二是因為秋季飄揚著金色的樹葉，二者連在一起組成“金色化石樹”。1984年，該協(xié)會又改組成“國際金色化石樹協(xié)會”，除南非以外，會員分布于世界各地，1984年有會員800多名，到1992年已發(fā)展至1000多名，這個組織的建立不僅促進了美國銀杏事業(yè)的發(fā)展，也促進了世界銀杏事業(yè)的發(fā)展。目前世界各國都在積極引種和栽植銀杏，有的作為科研試材，有的作為用材和采收白果。在植物學研究迅速發(fā)展的情況下，銀杏的科學稠密將逐漸被揭開。銀杏的食用、藥用和保健價值，在國外已受到重視，并積極進行開發(fā)利用。國際市場上銀杏非常走俏，供貨不足，特別是日本、香港、德國對我國要求供貨最為迫切，積極與我國洽淡擴大銀杏進口業(yè)務。國外以日本、韓國和德國對銀杏綜合開發(fā)利用最有成效，主要用于食品、醫(yī)藥、保健品和化妝品。據(jù)最近幾年的統(tǒng)計，年銷售額達40億美元，每公斤銀杏黃酮甙國際市場的銷售價為400美元。日本的果農(nóng)、加工廠家和商業(yè)企業(yè)，對銀杏形成了產(chǎn)、供、銷一條的服務體系。目前東京白果市場的銷售量日益增長，價格一直呈上漲趨勢。目前，日本市場上銀杏的零售價每公斤為1500～2500日元。名古屋市還建立了白果專營市場。日本市場上銷售的白果都是小包裝，每包200克、300克、400克、500克。白果已成為日本國民每餐必備的佳膳。他們除把銀杏做成雞蛋糕、亍酷等外，還加工成罐頭、冷凍食品等在市場上進行常年供應。優(yōu)良品種金兵衛(wèi)7月中旬即可上市，為應市場急需，可賣出高價錢。常溫下白果保鮮期僅為2～3個月，為提高商品價格，延長供貨時間，日本采取了低溫（2℃）、高濕（相對濕度：85～90%）的保鮮措施，貯藏期可達6個月。日本對銀杏種核也劃分了分級標準。日本國內(nèi)的銀杏年產(chǎn)量不能保證市場的常年供應，因此僅福岡一縣每年還需從中國和韓國進口約100噸銀杏。銀杏在日本被廣泛用于保健食品和醫(yī)藥，這對日本發(fā)展銀杏生產(chǎn)，起到了積極地促進作用。自70年代以來，銀杏葉的開發(fā)利用在國外已引起人們的極大興趣，國外對銀杏葉的開發(fā)利用已十分重視。1966年，德國醫(yī)藥科學有首先發(fā)現(xiàn)了銀杏葉中含有通血脈和降低膽固醇的藥用成分，隨后科學家們先后在銀杏葉中發(fā)現(xiàn)了幾百種藥用成分。從此，銀杏葉的綜合開發(fā)利用便開始了。德國Schwabe制藥業(yè)公司出口的銀杏葉制劑專用名稱為Tcbonjn，有針劑、液劑、靜脈注射用針劑、糖衣片及長效緩稀片等五種制劑。從銀杏葉中提煉出來的黃酮甙，具有改善腦血管循環(huán)及控制周圍血管失調(diào)的作用，是治療高血壓、腦動脈硬化、糖尿病和心血管疾病的良藥，且長期使用無毒副作用。西歐市場上有大量的銀杏葉制劑出售，頗受用戶歡迎。從70年代中期起，德國每年從韓國進口達1000萬美元的銀杏葉片提取物（銀杏葉每噸價格為2500美元），用于生產(chǎn)降低膽固醇藥物。前述五種制劑，在德國年銷售額達600萬美元。法國天然及合成制藥業(yè)公司出口的銀杏葉制劑專用名稱為Tanakan，是一種液劑。法國天然及合成制藥業(yè)公司自1975年開發(fā)此產(chǎn)品以來，僅此一種制劑，年銷售金額高達6000萬美元。銀杏葉制劑，近幾年在德國和法國被作為降血壓的特效藥。自1968年韓國成立銀杏研究院以來，即對銀杏葉的藥用成分進行了深入的研究，特別是近幾年，韓國注意對銀杏葉的綜合加工利用和研究。韓國企業(yè)界把銀杏葉作為除高麗參以外的又一大保健品資源，銀杏研究院和制藥、食品、化妝品企業(yè)的研究所，都在積極研究將銀杏葉藥用成分用于藥品、食品、化妝品的途徑，在此方面也取得了不少成果。韓國制藥業(yè)公司已從銀杏葉中提煉出解毒劑、抗真菌劑、抗生素癌劑豐治療哮喘、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物以及食品、化妝品添加劑。從銀杏葉中提煉的食品和化妝品添加劑已進入商品化階段。韓國各制藥業(yè)企業(yè)每年在國內(nèi)收購銀杏樹葉3000～4000噸用于制造藥品。據(jù)韓國有關企業(yè)調(diào)查，與銀杏葉有關的產(chǎn)品在韓國和國際上擁有廣闊的市場。在韓國境內(nèi)，這些產(chǎn)品的高層規(guī)模每年為1000億元（約740韓國元合1美元）。在美國，這些產(chǎn)品的年銷售額可達20億美元。韓國各企業(yè)在擴大銀杏葉綜合加工設施的同時，還派遣人員到海外進行市場調(diào)查，以便使有產(chǎn)在產(chǎn)品占領國際市場。目前韓國制藥業(yè)廠家要求完全禁止出口銀杏樹葉，而要用它制成藥劑以后再出口，德國和法國的制藥業(yè)廠家每年從韓國進口1200噸銀杏樹葉，價值約350萬美元。韓國東方制藥業(yè)公司認為，如果不出口銀杏樹葉而用它制成成藥再出口，每年可以獲得1億美元的利潤。該公司用銀杏樹葉作原料成功的生產(chǎn)出“靜克敏”，可預防和醫(yī)治高血壓、糖尿病和心臟病，還可兼作解毒劑。在美國銀杏葉機構(gòu)化采收后，通過氣干處理，使含水量達到12%，把干燥后的銀杏葉打成180公斤一捆，然后再運到歐洲的加工廠去加工。每100公斤銀杏葉可制得1公斤提取物（黃酮類、萜類、苦內(nèi)酯等8種化合物）。每公斤提取物售價為3萬美元。這些提取物除醫(yī)藥應用外，還可做成保健食品、保健飲料、巧克力糖、口香糖和其他食品。近幾年，日本兒玉株式會社每年向西歐市場出口銀杏樹葉達數(shù)百噸。瑞典每年從中國進口大量用于治療心絞痛、心肌梗塞、動脈硬化和腦血管痙攣等疾病的銀杏葉干浸膏藥。80年代以來，世界上許多國家對銀杏葉藥物藥理化學成分及臨床效果進行了廣泛地研究。銀杏葉提取物在亞洲和歐洲國家中年銷售額在5億美元以上。二、項目市場前景分析：銀杏為目前世界上較為成熟的植物提取物，以銀杏提取物為原料制成的各種制劑，科學家的應用于藥物、保健食品、功能性飲料等產(chǎn)品。銀杏制劑是近年暢銷的中成藥品種，在心腦血管用藥中處于比較重要的地位。在全球的天然藥物中，銀杏制劑是用量最大的品種之一。中國的銀杏制劑市場在1997—2000年曾經(jīng)快速增長，各地大量種植銀杏樹、開辟種植園。2000—2002年，銀杏制劑藥物的各種劑型均受市場歡迎，片劑、注射劑成為制劑市場的主導劑型。膠囊、滴劑也展示了良好的發(fā)展?jié)摿?。在中國生產(chǎn)銷售銀杏制劑的企業(yè)30余家，有銀杏制劑的原研企業(yè)——德國威瑪舒培博士大藥廠（金納多）、法國博福——益普生國際制藥公司（達納康）、北京雙鶴制區(qū)股份有限公司（舒血寧注射液）、浙江康恩貝制藥股份有限公司（天保寧）、三九制藥股份有限公司（999銀杏葉片）、山西傅山制藥股份有限公司（絡欣通）等。但具備國藥準字的產(chǎn)品占少數(shù)。從銀杏葉制劑醫(yī)院市場集中度看，德國威瑪舒培大藥廠、浙江康恩貝制藥公司、上海中藥制藥一廠、廣東深圳海王藥業(yè)有限公司等5家企業(yè)的市場占有率達到81.6%。其中德國威瑪舒培大藥廠金納多占有最大用藥份額為26.9%。法國博福——益普生制藥集團2002年全球銷售收入7.04億歐元。從黏土中提取有效成份而制成的治療兒童腹瀉藥思密達和從銀杏葉中提取有效成分而制成的藥物達納康，在去年其全部產(chǎn)品銷售額中占據(jù)著34.8%的份額。韓國第三大跨國公司SK研發(fā)的治療高血壓的銀杏葉提取藥物，2002年銷售額達到1300萬美元，超過中國同類最好企業(yè)。貴州益佰制藥的“銀杏達莫”注射液在處方藥市場的進攻咄咄逼人，營銷手段豐富多彩，10萬大獎滿天飛，臨床推廣手冊、單面更是精心策劃，益佰制藥作為民營制藥的生力軍，勇猛有余，如能實施良好的客戶關系策略，將成為中國制藥領土完整域的一匹黑馬。中國的銀杏制劑市場目前仍然處于嬰兒時期，未來的空間巨大。國產(chǎn)品種和進口品種可以說仍然處于同一起跑線上，各自具備成為領跑者的機會。銀杏葉制劑產(chǎn)品已被世界所公認.目前主要的市場情況如下:目前的我國市場現(xiàn)狀僅處在一個剛認識、剛開發(fā)的階段，銀杏葉的綜合開發(fā)剛剛開始，中國的市場空間是巨大的，是不可限量的。目前，銀杏葉制劑產(chǎn)品已達120億元，并每年80%的速率遞增，這是其他任何中藥材所沒有的。國內(nèi)開發(fā)的產(chǎn)品以片劑為主，包括膠囊，口服液，茶類等，國人對銀杏葉制劑產(chǎn)品的認識處在一個剛剛萌芽的階段。如凍干粉針等至今是一片空白，還沒有國家新藥，處在研究階段，主要靠進口。國內(nèi)的銀杏葉粗提物80%以上出口到國外。國外市場：從70年代中期起，德國每年從韓國進口達1000萬美元的銀杏葉片提取物（銀杏葉每噸價格為2500美元），用于生產(chǎn)降低膽固醇藥物。80年代從中國進口銀杏葉。據(jù)80年代初統(tǒng)計，世界年銷售額達40億美元。90年代初，韓國各制藥業(yè)企業(yè)每年在國內(nèi)收購銀杏樹葉3000～4000噸用于制造藥品。據(jù)韓國有關企業(yè)調(diào)查，與銀杏葉有關的產(chǎn)品在韓國和國際上擁有廣闊的市場。在韓國境內(nèi)，這些產(chǎn)品的銷售額每年為1000億韓元。在美國，這些產(chǎn)品的年銷售額可達20億美元。韓國各企業(yè)在擴大銀杏葉綜合加工設施的同時，還派遣人員到海外進行市場調(diào)查，以便使有產(chǎn)在產(chǎn)品占領國際市場。目前韓國制藥業(yè)廠家要求完全禁止出口銀杏樹葉，而要用它制成藥劑以后再出口，德國和法國的制藥業(yè)廠家每年從韓國進口1200噸銀杏樹葉，價值約350萬美元。韓國東方制藥業(yè)公司認為，如果不出口銀杏樹葉而用它制成成藥再出口，每年可以獲得1億美元的利潤。國外市場如歐美市場、日韓市場已經(jīng)是越來越成熟，消費群體對銀杏葉制劑及銀杏的認識越來越深刻，越來越龐大。外國從80年代中期對中國的銀杏葉進行掠奪式的搶購。銀杏葉原料和提取物市場穩(wěn)步上升。銀杏葉制劑市場一直是新藥開發(fā)的熱門，由于產(chǎn)品的前景好，市場廣闊，利潤空間大。但真正開發(fā)轉(zhuǎn)化為大生產(chǎn)而投放于市場的產(chǎn)品僅僅是銀杏葉片、膠囊等低附加值產(chǎn)品，真正的高附加值產(chǎn)品至今是空白，隨著心腦血管疾病的患病率正在逐年不斷的增大，因此，銀杏葉制劑產(chǎn)品的市場前景是不容置疑的。從03年開始進行應來了銀杏葉開發(fā)的第二個高峰期，有專家預測說銀杏葉產(chǎn)品的開發(fā)的將持續(xù)走熱，將推動中國人對銀杏系列產(chǎn)品的高度消費觀念的進一步提高，帶動中國銀杏產(chǎn)業(yè)的更大發(fā)展。本產(chǎn)品銀杏葉凍干粉產(chǎn)品將填補世界空白，正常投產(chǎn)后將實現(xiàn)年銷售收入10億元，利稅3.5億元。三、項目研究工作概況（一）功能主治及命名依據(jù)本品具活血化瘀通經(jīng)活絡之功效，用于缺血性腦中風。中醫(yī)辯證屬中經(jīng)絡氣虛血瘀證，癥見半身不遂，口知歪斜，言語匯謇澀或不語，感覺減或消失，面色恍白，氣短乏力，口流涎，自汗出，心悸便溏，手足腫脹，舌質(zhì)暗淡，舌苔薄白或白膩，脈沉細、細緩或細弦者。本品由銀杏葉一味藥制成，劑型為凍干粉劑。根據(jù)新藥審批辦法《有關中藥新藥部分的修訂和補充規(guī)定·命名原則》中主要藥物加劑型的方法，命名為注射用銀杏葉凍干粉。（二）處方來源，選題目的、選題依據(jù)注射用銀杏葉凍干粉的處方為科研方。銀杏在我國有漫長的藥用、食用史，素有活化石之稱。據(jù)《食療本草》記載，其可用于心悸怔中，肺虛咳喘等癥。特別是近十年來，國內(nèi)外對銀杏葉提取物（GEB）進行了較深入的研究。鑒于西藥在治療中風病時尚不能避免嚴懲的副作用，故我公司科研人員把傳統(tǒng)醫(yī)學理論與現(xiàn)代藥理研究成果相結(jié)合，運用現(xiàn)代制藥工藝技術(shù)研制而成具有臨床療效確切、使用安全，起效迅速的中藥二類新藥——注射用銀杏葉凍干粉。中風又名卒中。本病起病急驟，證見多端，變化迅速，與風性善行數(shù)變的特征相似，故以中風名之。是以卒然昏仆，不省人事，伴口眼歪斜，半身不遂，語言不利，或不經(jīng)錯仆而僅以僻不遂為主的一種疾病。中醫(yī)學認為：其發(fā)生的主要因素在于患者平素氣血虧虛，與心、肝、腎三臟陰陽失調(diào)，加之憂思惱怒，或飲酒飽食，或外邪侵襲等誘因，以致氣血運行受阻，肌膚筋脈失于濡養(yǎng)：或陰虧于下，肝陽暴張，陽化風動，血隨氣逆，挾痰挾火，橫竄經(jīng)隧，蒙蔽清竅，而形成上實下虛，陰陽互不維系的危急證候。西醫(yī)學認為腦卒中是指“發(fā)展迅速，具有血管源性腦功能局灶性障礙，并且持續(xù)時間超過24小時或引起死亡的臨床癥候群”。因為它泛指所有腦血管病的突然發(fā)作，故又稱：“腦血管意外”。將腦血管病分為蛛網(wǎng)膜下腔出血，腦出血、腦梗塞、腦血管痙攣等。引起腦座中的危險因素主要有高血壓、心臟病、糖尿病、高脂血癥，血液高粘滯綜合癥等疾病。因此中風病是中老年人最常見的疾病之一，具有發(fā)病率高，致死率高，致殘率高的特點。我國近年統(tǒng)計表明腦卒中發(fā)病率為120～180/10萬人，患病人數(shù)約500～600萬人。每年死于腦卒中者約100萬人，幸存者約3/4不同程度喪失勞動能力，重度致殘者占40%以上，每年新發(fā)病約130～150萬人，其中60萬以上的病例為腦梗塞患者。因此，如何提高腦血管病在恢復期的治愈率，改善患者的生存質(zhì)量，已成為國內(nèi)外醫(yī)學研究的重要課題。西醫(yī)學治療缺血性腦卒中的方法主要有以下：增加腦血流量，包括顱內(nèi)外動脈旁路搭橋術(shù)，能使座中的死亡率和再發(fā)率減少20%；由于缺血性腦卒中80%以上是由血栓或栓塞造成的，因此，鏈激酶和尿激酶等溶栓劑常作為腦栓塞的常規(guī)治療，能改善病人的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀促進神經(jīng)功能擴張半球周圍的正常血管床，但往往不能增加缺血區(qū)血的流量；抗血小板和抗凝治療經(jīng)證明是有臨床療效的方法，抗血小板藥物臨床主要有ASP、潘生丁、噻氯吡啶等，此類藥物可顯著降低腦卒中的復發(fā)率。甘露醇、速尿、腎上腺糖皮質(zhì)激素是腦卒中胖子水療法的主要措施之一，迅速使用脫水劑能減輕癥狀或拯救生命。鈣離子拮抗劑，阿片受體拮抗劑，血小板激活因子拮抗劑對缺血性腦傷有保護治療作用。上述治療對于急性期挽救病人的生命起到了積極的作用。但西醫(yī)往往重治療，輕康復，忽略了病人恢復期功能的治療，且從西醫(yī)角度來看，目前對恢復期尚無積極有效的治療方法，中醫(yī)治療本病強調(diào)標本兼治，結(jié)合中醫(yī)的針炙、推拿、藥浴等方法，對于降低腦卒中后的致死率，致殘率、復發(fā)率起到了顯著作用。中醫(yī)學認為中風恢復期的基礎為本虛標實，本虛主要為氣虛，陰虛，兼夾標實主要為血瘀。本虛者，因年老體虛，腎精虧虛，而“肝腎同源”，故腎精虧虛可致肝血不足，肝腎陰虛，陰虛無以制陽，則風陽亢張，上擾清竊，或操持過度，形神失養(yǎng)，致陰血暗耗，虛陽化風，擾動為患；或房室不節(jié)，縱欲傷精，致水虧于下，火旺于上，發(fā)為本病。瘀血者多因正氣虛衰，氣虛運血無力，血腦瘀滯；或暴怒傷肝，肝陽暴亢，血隨氣逆，上壅清竊，瘀結(jié)于腦脈；或肝氣郁結(jié)，氣滯血瘀，發(fā)為本病，因此治療上強調(diào)標本兼治，祛邪與扶正并舉。再結(jié)合中醫(yī)的針灸、推拿、藥浴等方法，更與西醫(yī)相配合，從整體上調(diào)調(diào)機體的失衡狀態(tài)，可改善大腦局部的神經(jīng)及血管功能，對于降低腦卒中后的致死率、致殘率、復發(fā)率起到了顯著的作用。目前，用于治療腦卒中恢復期的中草藥近百種，現(xiàn)代藥學研究和臨床研究均證實對該病有確切的療效，且新藥不斷出現(xiàn)，但是隨著我國人口老齡化問題的日趨嚴重，腦中風病人急劇上升，治療腦中風恢復期的藥物遠遠不能滿足病人的需求?，F(xiàn)代醫(yī)學研究證明銀杏葉中含有黃酮類化合物，萜類化合物等生物活性成份，這些成份具有相當強烈的抗氧化作用，能清除生物體內(nèi)過剩的自由基，阻止體內(nèi)脂質(zhì)過氧化，提高機體的免疫力等。其黃酮類成份，能擴冠；改善心、腦血液循環(huán)，降低血清膽固醇，還有高層這敏，抗休克、抗器官移植排斥反應等作用，是首選的治療心腦血管疾病的天然藥物。因此，開發(fā)和利用銀杏葉治療心、腦血管疾病有著廣闊的前景。（三）制備工藝及其研究資料制備工藝工藝研究用正交試驗法確定最佳提取工藝。（四）與質(zhì)量有前的理化性質(zhì)研究資料及文獻資料銀杏葉為現(xiàn)行版藥典收載藥材，有據(jù)可查。（五）臨床試驗用藥品的原料（藥材）和成品的質(zhì)量標準草案及臣草說明我們對該藥組方擬定了質(zhì)量標準草案及起草說明。1、鑒別對本品銀杏葉采用薄層色譜法鑒別，斑點清晰，故列入標準中。2、含量測定本品每瓶含總黃酮醇苷不得少五25.0mg、每瓶含銀杏總內(nèi)酯不得少于12.0mg。并經(jīng)中試，連續(xù)生產(chǎn)三批產(chǎn)品質(zhì)量基本穩(wěn)定，初步制定了臨床試驗用藥品的原料（藥材）和成品質(zhì)量標準草案及起草說明。（六）臨床試驗用藥品的初步穩(wěn)定性試驗資料及文獻資料經(jīng)過三個月的正常室溫下放置考核，本品在臨床研究用藥品包裝，在常溫下質(zhì)量是穩(wěn)定的，直接與藥物接觸的包裝材料對藥品的質(zhì)量穩(wěn)定性無影響。（七）臨床試驗用樣品及其質(zhì)量檢驗和衛(wèi)生標準檢驗報告書（樣品數(shù)量至少應為全檢需要量的3倍）產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生學指標符合標準。（八）與功能主治有關的主要藥效學試驗資料及文獻資料銀杏葉凍干粉iv7.416、2.472、0.824g生藥/kg能顯著降低局灶性腦缺血再灌注后大鼠腦組織的梗塞范圍和含水量，改善其神經(jīng)行為。腦組織勻漿生化指標檢測發(fā)現(xiàn)該藥能顯著降低腦組織中MDA含量，升高SOD含量。腦組織病理切片顯示該藥對神經(jīng)細胞保護作用明顯。表明該藥對大鼠實驗性局灶性腦缺血有顯著的保護作用。銀杏葉凍干粉iv能明顯縮短實驗性彌散性全腦缺血大鼠的翻正反射恢復時間，還能顯著降低腦缺血再灌注后腦組織中伊文思藍的含量。即降低腦血管通透性，表明該藥對大鼠實驗性彌散性全腦缺血有保護作用。銀杏葉凍干粉iv能明顯增加小鼠急性不完全性腦缺血后2h內(nèi)的存活數(shù)，表明該藥對小鼠急性不完全性腦缺血有保護作用，iv的ED50為3.25g/kg（95%可信限為2.68—51.7g/kg）。Iv后10min即開始起效，達峰時間20min左右，持續(xù)時間可達120min以上。同一劑量組iv的效應強于ig。還能明顯延長小鼠在缺氧狀態(tài)下的存活時間，表明該能提高小鼠耐缺氧的能力。銀杏圳凍干粉iv給藥對麻醉犬的腦血浪量，腦血管阻力，血壓，心率和心電均無明顯影響。銀杏葉凍干粉對PAF誘導家兔體外血小板聚集有明顯抑制作用。對ADP誘導家兔體外血小板聚集抑制作用較弱。該藥iv和PAF誘導兔體內(nèi)血小板聚集也有明顯抑制作用；該藥對血小板無明顯影響。Iv時可降低兔紅細胞壓積和全血粘度，尤其是對高切變速率的全血粘度改善作用更明顯，高劑量組對低、高切變速率時全血粘度均可有改善作用。Iv可明顯抑制大鼠和家兔動——靜脈旁路血栓形成。Iv可明顯延長小鼠凝血時間。（九）一般藥理研究的試驗資料及文獻資料家犬麻醉（戊巴比妥鋼i.v30mg/kg）狀態(tài)下，靜脈滴注銀杏葉凍干粉大、中、小三個劑量（2.7、0.9、0.3g/kg生藥三劑量），總體積10ml/kg，對給藥5、10、15、30、60、90、120分鐘測定的血壓（SBP、DBP、BP）、呼吸頻率、振幅、體溫、心率、心電圖（P、QRS、ST、T波間期、振幅）參數(shù)，均無明顯變化。銀杏葉凍干粉大、中、小三個劑量組（9.0、4.5、1.5g/kg生藥三劑量），按0.1ml/10g體重小鼠腹腔注射，藥后30分鐘，對小鼠腹腔注射45mg/kg戊巴比妥鈉，動物的睡眠時間與生理鹽水對照組比較均無統(tǒng)計學差異（p>0.05）；對小鼠腹腔注射25mg/kg戊巴比妥納動物入睡個數(shù)大劑量組與對照組比較有統(tǒng)計學差異（p<0.05）；對小鼠10分鐘內(nèi)自發(fā)活動次數(shù)，大、中劑量組與對照組比較p<0.05。綜上所述：銀杏葉凍干粉上述劑量對犬血壓、呼吸、體溫、心電圖無影響；高劑量與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用，能增加小鼠入睡個數(shù)；對小鼠自主活動有一定抑制作用。（十）動物急性毒性試驗資料及文獻資料銀杏葉凍干粉小鼠靜脈注射的，最大給藥量小鼠死亡率為30%，iv急性毒性試驗無法測出LD50，小鼠iv最大耐受量為21.3g生藥/kg，相當于的臨床用藥的128倍（臨床擬用量為10g生藥/60kg/日，即0.167g生藥/kg）。銀杏葉凍干粉小鼠腹腔注射最大給藥量小鼠死亡率為15%，ip給藥無法LD50,經(jīng)試驗結(jié)果表明銀杏葉凍干粉小鼠腹腔注射LD50大于53.4g生藥/kg，相當于臨床擬量的320倍。（十一）動物長期毒性試驗資料及文獻資料1、大白鼠長期毒性實驗取Sprague-Dawley大鼠80只，試驗分高（600mg提取物/kg）\k(190mg提取物/kg)、低（60mg提取物/kg）劑量組及5%葡萄糖注射液對照組，每組動物20只，雌雄各半。腹腔注射，每天一次，每周給藥6天，試驗周期為13周。各試驗組留1/2動物以觀察4周恢復期變化。結(jié)果表明，大鼠的行為活動、皮毛色澤及糞便均屬正常。攝食量未發(fā)現(xiàn)明顯的與藥物作用的有關的異常變化。高、中、低劑量組動物的體重增長與對照組相比無顯著差異。主要的臟器生量及其九與對照組比較未見顯著性差異。血液學和血液生化學實驗表明，高、中、低劑量組大鼠血液所檢測的各項指標與對照組比較未見明顯由于藥物所所的異常變化。病理切片結(jié)果顯示，個別主要臟器均有不同程度輕度改變，通過Ridit分析，非藥物本身所引起的病理改變，肺臟的改變可能系病毒或細菌感染所致，在臨床試驗中應注意肝臟指標的變化。據(jù)此推測，高中低劑量邊疆腹腔注射給予該藥13周，大志未表現(xiàn)出明顯的毒性反就。在本試驗條件下，諞藥ip給藥13周，對大鼠的無毒劑量為600mg提取物/kg。若人以60kg計，銀杏注射液對大鼠的無毒劑量（600mg提取物/kg）約相當于人用劑量的120倍（人用劑量為300mg提取物/天/60kg人）。2、狗長期毒性實驗本試驗觀察該藥邊疆靜脈注射（iv）給藥13周Beagle犬所發(fā)生的各種反應，以評估該藥的安全性。Beagle犬24只，試驗分藥物高（300mg提取物/kg）、中（95mg提取物/kg）、低（30mg提取物/kg）組及空白對照組（5%葡萄糖注射液）。每組動物6只，雌雄各半。靜脈注射，每日一次，每周6次，試驗周期為13周。各試驗組準備2只動物觀察4周恢復期變化。結(jié)果表明，靜脈注射該藥13周后對犬的血常規(guī)、血清生化、尿常規(guī)和攝食量等均未發(fā)現(xiàn)明顯的與藥物作用有關的異常變化。動物的活動狀況在給藥后一切正常。與對照組相比，各給藥組的犬體重及體重增長正常且在同周內(nèi)無顯著差異。犬心電圖各項指標正常。組織切片檢查表明，在所有受檢臟器中均未見明顯的病理改變。犬心電圖各項指標正常。組織切片檢查表明，在所有受檢臟器中均未見明顯的病理改變。在本試驗條件下，銀杏葉凍干粉iv給藥13周對犬的無毒劑量為300mg提取物/kg，約相當于人用劑量的60倍（人用劑量為300mg提取物/天/60kg人）。（十二）處方組成及功能主治。用中醫(yī)藥理論闡述適應病癥的病因、病機、治法與方解略（十三）臨床試驗的設計方案及供臨床醫(yī)師參閱的藥理、毒理研究結(jié)論綜述。由我公司臨床藥理專家設計完成。（十四）補充資料——安全性試驗注射用銀杏葉凍干粉對Beagle犬肢靜脈血無溶血及紅細胞凝集，對健康豚鼠和Beagle犬無過敏反應，對家兔肌肉注射未見注射部位肌肉組織有異常改變。對家兔耳靜脈滴注無明顯血管刺激反應，對家兔無致熱原反應。經(jīng)以上試驗，結(jié)果表明該制劑是安全的。四、藥材指紋圖譜（一）銀杏葉藥材HPLC指導紋圖譜檢測標準1、名稱、漢語拼音【名稱】銀杏葉【漢語拼音】Yinxingye2、來源【基源】本品為銀杏科植物銀杏GinkgobilobaL.的干燥葉?！井a(chǎn)地】江蘇泰州。【采收期】9-10月?！井a(chǎn)地加工】秋季葉尚綠時采收，及時干燥。3、供試品溶液的的制備（略）4、對照品溶液的制備（略）5、測定方法（略）照高效液相色譜法（《中國藥典》）2000年版一部附錄（ⅥD）測定。色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗（略）測定法（略）6、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)（1）指紋圖譜（略）（2）共有指紋峰的標定：（略）（3）共有指紋峰面積的比值；（略）（4）非共有峰面積；（略）（2）銀杏葉藥材HPLC指紋圖譜檢測標準起草說明1、名稱、漢語拼音（略）2、來源；（略）3、供試品溶液的制備；（略）4、對照品溶液的制備；（略）5、測定方法；（略）照高效液相色譜法（《中國藥典》）2000年版一部附錄（ⅥD）測定。儀器和試劑Waters600E泵；Waters996PAD檢測器；Millennium32工作站；717自動進樣器。色譜條件：（略）測定方法的選擇；（略）流動相的確定；（略）檢測波長的選擇：（略）穩(wěn)定性試驗取批次為3的樣品。按供試品溶液制備方法制備供試品，分別在0，1，22，24，30小時檢測指紋圖，結(jié)果見表1，2。結(jié)果表明各色譜峰的相對保留時間和峰面積的比值基本沒有明顯的變化，符合指紋圖的要求。精密度試驗取批次為3的樣品，按供試品溶液制備方法制備供試品，邊疆進樣5次，檢測指紋圖，結(jié)果見表3，4。結(jié)果表明各共有峰的相對保留時間和單峰面積大于或等于10%總峰面積的色譜峰面積的比值基本一致，符合指紋圖的要求。重現(xiàn)性試驗取批次為3的樣品5份，按供試品溶液制備方法制備供試品，檢測指紋圖，結(jié)果見表5，6。結(jié)果表明各共有峰的相對保留時間和單峰面積大于或等于10%總峰面積的鈀譜峰面積的比值基本一致，符合指紋圖的要求。五、臨床方案——以血塞能注射液為對照藥評價銀杏葉凍干粉，治療缺血性腦中風恢復期（瘀血阻絡型中風中經(jīng)絡）的有效性和安全性的分層隨機、多中心臨床研究。（一）試驗背景資料并根據(jù)《新藥審批原則》、《中藥新藥臨床研究指導原則》和《藥品臨床試驗管理規(guī)范》及新藥的功能主治和藥效學、毒理學試驗等資料制定臨床方案。（二）試驗目的主要觀察銀杏葉凍干粉治療缺血性腦中風恢復期患者的療效及安全性和不良反應。病例入選者應符合動脈粥樣硬化腦梗塞的診斷標準，符合瘀血阻絡引起的中風中經(jīng)絡的中醫(yī)辨證標準。本次試驗是采用隨機、對照、單盲、多中心試驗方法進行。（三）倫理要求向受試者說明銀杏葉凍干粉的臨床用途，本次試驗的目的，給藥方法及療程，需要進行的實驗室檢查項目，可能出現(xiàn)的不良反應及由此采取的搶救治療的措施等；實驗必須征得受試者的自愿同意，并由本人簽署知情同意書方可實行。（四）病例入選診斷標準1、中醫(yī)診斷標準（參照1986年中華全國中醫(yī)學會內(nèi)科學會修訂的《中風病中醫(yī)診斷療效評定標準》及在此基礎上制定的新的中風中醫(yī)診斷與療效評定標準）。（1）主癥：半身不遂，口舌歪斜，神志昏蒙，舌強言謇或不語，偏身麻木。（2）次癥：頭痛、眩暈、瞳神變化，飲水發(fā)嗆，目偏不瞬，共濟失調(diào)。（3）急性起病。（4）病發(fā)多有誘因，未發(fā)前常有先兆癥狀。（5）好發(fā)年齡多在40歲以上。具有主癥2個以上或一個主癥兩個次癥，急性起病，結(jié)合舌象、脈象、誘因、先兆、年齡等方面的特點即可確定診斷。不具備上述條件，結(jié)合影像學檢查結(jié)果亦可確診。2、中醫(yī)辯證中經(jīng)絡、瘀血阻絡證。癥見：半身不遂，口舌歪斜，言語不利，偏身麻木，口角流涎，舌質(zhì)暗或有瘀點瘀斑，舌苔薄白，脈沉澀。3、西醫(yī)診斷標準（參照1989年中華醫(yī)學會第二次全國腦血管病學術(shù)會議第三次修訂的《各類腦血管疾病診斷要點》）動脈粥樣硬化性腦梗塞①常于安靜狀態(tài)下發(fā)?。虎诖蠖鄶?shù)發(fā)病時無明顯頭痛和嘔吐；③發(fā)病可較緩慢，多逐漸進展，或呈現(xiàn)階段性進行，多與腦動脈粥樣硬化有關，也可見于動脈炎、血液病等；④一般發(fā)病后1-2日內(nèi)意識清楚或輕度障礙；⑤有頸內(nèi)動脈系統(tǒng)和/或椎一基底動脈系統(tǒng)癥狀和體征；⑥腰穿腦脊液一般不應含血；⑦CT檢查發(fā)現(xiàn)腦梗塞部位。4、中風分期標準（1）急性期：發(fā)病在2周以內(nèi)。（2）恢復期：發(fā)病2周至半年。（3）后遺癥期：發(fā)病半年以上。六、臨床實施方案銀杏葉凍干粉臨床試驗根據(jù)《新藥審批原則》，采用隨機、對照、單盲、多中心試驗方法進行。（一）試驗方案設計1、試驗設計：本次試驗是采用隨機、對照、單盲、多中心的研究方法，病例分組采用簡單隨機的方法。將符合上述診斷標準、納入標準的合格受試者，采用隨機方法按1∶1∶1比例隨機分入治療A組、治療B組與對照組。整個Ⅱ期臨床試驗擬在五家醫(yī)院同時進行，治療A組120例，治療B組120例，對照組120例。每家醫(yī)院試驗病例數(shù)72例，每組觀察病例數(shù)不小于20例。2、受試對象符合試驗病例標準的臨床試驗單位的住院和門診病人。門診病人應嚴格控制可變因素，保證受試者單純按試驗方案用藥。1、試驗分組與用藥方法本品治療缺血性腦中風恢復期患者，故在受試準備期進行藥物洗脫1周，以避免其他藥物治療效應的影響。治療A組：銀杏葉凍干粉，以5%～10%葡萄糖注射液100ml稀釋后靜脈滴注，每日一次。對照組：血塞通注射液5ml，以5%～10%葡萄糖注射液100ml稀釋后滴注，每日一次。療程：每一療程為兩周。3、合并用藥：臨床試驗過程中，可配合西醫(yī)的支持療法及使用，自由劑清除劑，腦代謝改善劑等療法，但不得使用血小板激活因子拮抗劑類藥物。（二）藥品編盲本試驗為隨機、單盲、平行對照的多中心臨床試驗，用于藥品隨機編盲的隨機數(shù)字表由統(tǒng)計學專業(yè)人員提供，利用SHIFT+RAN#健計算器隨機產(chǎn)生。按試驗中心分層分段進行隨機。并由與本次試驗無關人員完成藥品編盲及應急信件的準備工作，其中藥品經(jīng)隨機編盲后的藥品編號即為隨機號。分藥結(jié)束后，盲底將一式二份。七、療效性判定（一）對治療前后患者的神志、言語、肢體運動功能等主癥進行綜合評定參照1995年中華醫(yī)學會第四次全國腦血管病學術(shù)會議通過的療效評定標準。1、疾病療效判定標準2、臨床療效評定分級標準3、中醫(yī)證候改善程度的判定注：計算公式（尼莫地平法）為[（治療前積分—治療后積分）/治療前積分]×100%。八、項目進展已獲臨床批件.臨床批件或新藥證書轉(zhuǎn)讓九、項目投資及建設情況第二章市場需求預測一、市場預測1.國內(nèi)市場：目前的我國市場現(xiàn)狀僅處在一個剛認識、剛開發(fā)的階段，銀杏葉的綜合開發(fā)剛剛開始，中國的市場空間是巨大的，是不可限量的。目前，銀杏葉制劑產(chǎn)品已達120億元，并每年80%的速率遞增，這是其他任何中藥材所沒有的。國內(nèi)開發(fā)的產(chǎn)品以片劑為主，包括膠囊，口服液，茶類等，國人對銀杏葉制劑產(chǎn)品的認識處在一個剛剛萌芽的階段。國內(nèi)的消費意識還較低，技術(shù)水平還較落后，很多研究成果因缺少資金很難轉(zhuǎn)為生產(chǎn)力，如凍干粉針等至今是一片空白，還沒有國家新藥，主要靠進口，但價格又很昂貴，大多數(shù)國內(nèi)的消費群體還消費不起。中國的銀杏葉制劑開發(fā)就處在這樣一個怪圈中。國內(nèi)市場一片空白，銀杏葉制劑的治療效果以被世界所公認，市場前景不可估計。國際市場的銀杏葉制劑產(chǎn)品如注射劑類產(chǎn)品幾百多元一支，實際成本也（除去開發(fā)費用）只有幾元一支，屬于高附加值產(chǎn)品。雖然銀杏葉提取物市場經(jīng)歷了1998年進入市場低谷至2004年整整6年的最低市場低谷，但沒有影響到制劑產(chǎn)品的價格，并且一直居高不下。從今年開始進行全力的反彈，迎來了銀杏葉開發(fā)的第二個高峰期，有專家預測說五年之內(nèi)銀杏葉開發(fā)的將持續(xù)走高，將推動中國人對銀杏系列產(chǎn)品的高度消費觀念的進一步發(fā)展。這一定能帶動銀杏葉制劑產(chǎn)品的大量消費創(chuàng)造了條件。2.國外市場從70年代中期起，德國每年從韓國進口達1000萬美元的銀杏葉提取物（銀杏葉每噸價格為2500美元），用于生產(chǎn)降低膽固醇藥物。80年代從中國進口銀杏葉。據(jù)80年代初統(tǒng)計，世界年銷售額達40億美元。90年代初，韓國各制藥業(yè)企業(yè)每年在國內(nèi)收購銀杏樹葉3000～4000噸用于制造藥品。據(jù)韓國有關企業(yè)調(diào)查，與銀杏葉有關的產(chǎn)品在韓國和國際上擁有廣闊的市場。在韓國境內(nèi)，這些產(chǎn)品的銷售額每年為1000億韓元。在美國，這些產(chǎn)品的年銷售額可達20億美元。韓國各企業(yè)在擴大銀杏葉綜合加工設施的同時，還派遣人員到海外進行市場調(diào)查，以便使有產(chǎn)在產(chǎn)品占領國際市場。目前韓國制藥業(yè)廠家要求完全禁止出口銀杏樹葉，而要用它制成藥劑以后再出口，德國和法國的制藥業(yè)廠家每年從韓國進口1200噸銀杏樹葉，價值約350萬美元。韓國東方制藥業(yè)公司認為，如果不出口銀杏樹葉而用它制成成藥再出口，每年可以獲得1億美元的利潤。國外市場如歐美市場、日韓市場已經(jīng)是越來越成熟，消費群體對銀杏葉制劑及銀杏的認識越來越深刻，越來越龐大。外國從80年代中期對中國的銀杏葉進行掠奪式的搶購。每公斤提取物最高售價達到過3萬美元。這些提取物除醫(yī)藥應用外，還可做成保健食品、保健飲料、巧克力糖、口香糖和其他食品。1998年達到了最低谷。2003年開始反彈，從04年開始進行全力的反彈，應來了銀杏葉開發(fā)的第二個高峰期，有專家預測說五年之內(nèi)銀杏葉開發(fā)的將持續(xù)走熱，將推動中國人對銀杏系列產(chǎn)品的高度消費觀念的進一步發(fā)展。特別是從2003年全國各地反饋來的信息表明，已有供不應求的態(tài)勢，國內(nèi)銀杏葉提取物（GBE）由原來的每公斤30美元左右，已上升到60美元，國際市場更是供不應求，法、德等國的高質(zhì)量提取物已升至在每公斤800美元。在非洲市場，銀杏葉制劑產(chǎn)品倍受歡迎，被當作“神物”市場前景相當好。銀杏葉制劑年銷售額達260億美元，而且逐年增長。二、銷售預測銀杏葉中主要含有銀杏總黃酮、銀杏內(nèi)酯、白果內(nèi)酯、聚異戊烯醇等活性成分，如黃酮類：對心腦血管疾病，高血脂，高血壓，清除氧自由基具有顯著的療效，是目前世界上治療該類疾病最顯著的藥物。如銀杏內(nèi)酯A、B、C、M類：是血小板活化因子（PAF）拮抗劑，是銀杏葉中最重要的活性成分，是治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的特效藥物。如白果內(nèi)酯類：白果內(nèi)酯有很強的生物活性，為神經(jīng)精神病藥物，對因年老的呆傻癥有奇異的療效，它能抗神經(jīng)末梢的衰老，被譽為真正抗衰老化學物質(zhì)。聚異戊烯醇促進造血功能，改善肝臟機能，對再生障礙性貧血（白血病），對各種肝病、糖尿病具有最顯著的療效，是治療這類疾病最具有開發(fā)前景的藥物。產(chǎn)品功效奇特，市場前景是相當廣闊的。預計建成投產(chǎn)后高質(zhì)量銀杏葉及銀杏及內(nèi)酯凍干粉針劑、白果內(nèi)酯凍干粉針劑、聚異戊烯醇凍干粉針劑市場價格400元/支，以產(chǎn)量200萬支計算，銷售收入8億元。滴丸按市場價格1.5元計算，按1億粒計算銷售收入1.5億元，軟膠囊1000萬粒按市場單價5元計算，銷售收入5000萬元，原料2000公斤，一半自用，一半用于出口按市場價6.2萬美元千克（折合人民幣每千克50萬元），銷售收入5億元。共計年銷售收入15億元，年利潤5億元。公司經(jīng)過多年的發(fā)展，銷售網(wǎng)絡遍布國內(nèi)外，銷售渠道一方面除了面向進出口公司面向國外市場外，另一方面與國內(nèi)的很多銀杏制劑生產(chǎn)廠家有著密切的業(yè)務聯(lián)系，同時企業(yè)內(nèi)部制劑產(chǎn)品需求一部分用于生產(chǎn)銀杏葉口服液、銀杏片國內(nèi)銷售及出口非洲市場，因此銷售工作是本項目中最容易的工作。同時狠抓銷售隊伍建設，面向全國廣招銷售精英，著力打造一支精干的銷售隊伍。計劃在全國各大、中城市分設銷售機構(gòu)，以優(yōu)良的售前、售后服務拓寬銷售渠道，以優(yōu)秀的廣告策劃樹立公司良好的企業(yè)形象，從而增加企業(yè)及產(chǎn)品知名度，產(chǎn)品市場前景將會更加廣闊。公司嚴格按按照最新技術(shù)工藝要求和GMP要求對生產(chǎn)進行全程監(jiān)控。本項目設計力求選用國內(nèi)先進設備，自控水平較高，注重節(jié)能降耗，以達到提高產(chǎn)品質(zhì)量，降低產(chǎn)品成本從而降低售價，增強市場競爭力的目的。因此，本項目無論從產(chǎn)品品種、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品價格等方面都有很強的市場競爭力，只要抓住這次市場機會，能夠在最短的時間內(nèi)收回投入。