PCR培訓(xùn)班考試題

10一.填空〔0.515分〕2023《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增試驗室治理方法》，北京市衛(wèi)生局為做好試驗室備案工作，于2023年公布了《北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗試驗室技術(shù)審核暫行規(guī)定》。〔2023〕北京市衛(wèi)生局及各區(qū)縣衛(wèi)生局負(fù)責(zé)所轄行政區(qū)域內(nèi)地方醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗試驗室的備案和監(jiān)視治理工作。其中備案的技術(shù)審核工作流程主要包括：申報、資料審核、現(xiàn)場驗收、整改、通知試驗室資料審核結(jié)果。醫(yī)療機(jī)構(gòu)的醫(yī)學(xué)檢驗科應(yīng)當(dāng)設(shè)有臨床細(xì)胞分子遺傳學(xué)增檢驗試驗室參與醫(yī)療機(jī)構(gòu)的年度校驗。〔2023〕臨床基因擴(kuò)增檢測的分析中質(zhì)量保證關(guān)鍵內(nèi)容包括：室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評。其中前者監(jiān)測和掌握的是試驗室測定的重復(fù)性，而后者則通過對不同的試驗室測定結(jié)果的比對而評價試驗室測定的準(zhǔn)確度?！?023〕 DNA雙螺旋構(gòu)造的特點是：螺旋中的兩條鏈為反向平行，其中一條鏈的方向為5’-3’，另一條鏈的方向為3’-5’。〔2023〕核酸包括兩種類型：脫氧核糖核酸和核糖核酸，二者的主要區(qū)分為：前者由ATCG四種堿基組成，而后者由AUCG四種堿基組成。〔2023〕依據(jù)遺傳中心法則，遺傳信息的流淌方向為DNARNA蛋白質(zhì)?！?023〕 一般臨床基因擴(kuò)增檢驗試驗室一般包括下面四個分區(qū)：試劑儲存和預(yù)備區(qū) 、標(biāo)本制備區(qū) 、 擴(kuò)增區(qū) 、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) ?！?023〕提純的核酸樣品可依據(jù)OD260 波長的光吸取值算出其含量通過計算 260/280 的比值計算出其純度?！?023〕臨床基因擴(kuò)增試驗室檢測用的試劑應(yīng)當(dāng)經(jīng)國家藥監(jiān)局 批準(zhǔn)。〔2023〕cfDNA的和中文名稱是 細(xì)胞游離DNA ，ctDNA的中文名稱是循環(huán)腫瘤DNA ?！?023〕在PCR前，為保護(hù)操作者和樣本，手工處理樣本應(yīng)當(dāng)在樣本制備區(qū)的 生物安全柜 中進(jìn)展，并使用帶濾芯 的移液吸頭進(jìn)展樣本操作。〔2023〕醫(yī)療廢物垃圾袋結(jié)扎承受 “鵝口頸”套扎 結(jié)扎形式?！?023〕銳器盒容積到達(dá)總體積的 3/4 時需要更換?！?023〕核酸檢測中，全血樣本采集一般使用 EDTA 或 枸櫞酸鹽 抗凝，不使用 肝素 抗凝?！?023〕熒光定量PCR使用的Taqman探針兩端標(biāo)記有 報告熒光R5’ 基團(tuán)和 熒光粹滅Q3’ 基團(tuán)?！?023〕冠病毒核酸檢測應(yīng)當(dāng)在生物安全 Ⅱ 級試驗室開展，同時承受生物安全Ⅲ 級試驗室的個人防護(hù)?！?023〕PCR的根本反響過程包括 變性 、 退火 、 延長 ?！?023〕DNA/RNA的紫外吸取在260 nm四周有最大吸取值?！?023〕核酸的根本構(gòu)造單位是：核苷酸 其組成包括堿基 、核糖或脫氧核糖 和 磷酸 ?！?023〕二．是非題〔在你認(rèn)為正確的句子后面打√，錯誤的后面打×，每題115分〕DNA雙鏈中，堿基A-T之間以三個氫鍵相連，G-C以兩個氫鍵相連。〔 × 〕〔2023〕與細(xì)胞學(xué)初篩相比較，HPV核酸檢測初篩具有更高的敏感性。 〔 √〕〔2023〕使用有防“污染”作用的尿苷糖基酶〔 UNG〕的PCR試劑盒，該酶可以降解含有 UTP的擴(kuò)增產(chǎn)物。〔√ 〕〔2023〕DNA變性是指在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的全部共價鍵同時也受影響。 〔 × 〕〔2023〕自制室內(nèi)質(zhì)控品時，應(yīng)對質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)展評價。 〔 √ 〕〔2023〕定量PCR與定性PCR測定原理的最主要的區(qū)分點在于前者的測定點在PCR的指數(shù)擴(kuò)增期而后者多為擴(kuò)增平臺期。 〔× 〕〔2023〕PCR〔×〕〔2023〕臨床檢驗中的系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定結(jié)果的SD增大。 〔×〕〔2023〕擴(kuò)增管沒有蓋好會造成PCR反響液熱蒸發(fā)，直接影響結(jié)果，但不會成為一個污染源?！病痢场?023〕核酸是極性化合物，溶于水，不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。 〔√〕〔2023〕核酸的解鏈溫度〔Tm〕與G+CG+CTm愈低。〔×〕〔2023〕無法參與室間質(zhì)量評價打算時，可以用室內(nèi)質(zhì)控替代。 〔×〕〔2023〕一般進(jìn)展HCV-RNA檢測時宜承受EDTA抗凝血，不宜承受肝素抗凝。〔√ 〕〔2023〕以次氯酸為主要成分的清潔劑在配制后可以長期使用。 〔 × 〕〔2023〕質(zhì)量治理體系的要素包括質(zhì)量方針、質(zhì)量目標(biāo)和質(zhì)量指標(biāo)。 〔√ 〕〔2023〕16.核酸的復(fù)制是由3’-5’方向進(jìn)展。5---3 〔×〕〔2023〕核酸的解鏈溫度〔Tm〕與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈高?！病?〕〔2023〕標(biāo)本過失率和試驗室布局的合理性均為試驗室質(zhì)量體系監(jiān)控指標(biāo)?！病?〕〔2023〕試驗室質(zhì)量體系文件無統(tǒng)一格式，無標(biāo)準(zhǔn)文件，應(yīng)切合實際，怎么做怎么寫?！病痢场?023〕有標(biāo)準(zhǔn)文件進(jìn)展冠病毒核酸檢測時，采集鼻咽拭子標(biāo)本可使用棉簽。 〔 × 〕〔2023〕植絨拭子在常規(guī)應(yīng)用前，可由制造商對試驗室未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)展獨立驗證?！病?〕〔2023〕DNA在中性或弱堿性溶液中易水解，但在酸性溶液中較穩(wěn)定，RNA在堿性溶液中穩(wěn)定。〔× 〕〔2023〕答案：在酸性溶液中，DNA答案：在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定，DNA在堿中變性，但不水解，RNA水解。DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。 〔 √ 〕〔2023〕DNA微溶于水，可溶于有機(jī)溶劑?！?× 〕〔2023〕溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑三．單項選擇題〔125分〕PCR技術(shù)的制造人是： 〔 C 〕〔2023〕A. WatsonJ.D.; B.CrickF.H.C.;C.KaryMullis; D.RosalindFranklin.二級生物安全柜能對以下哪些進(jìn)展防護(hù)： 〔 D 〕〔2023〕A.人員 B.試驗品C.環(huán)境 D.以上都是在生物界尚無充分證據(jù)的信息流淌過程的是 〔 A 〕〔2023〕A．蛋白質(zhì)→RNA B．RNA→DNAC．DNA→DNA D．DNA→RNA核酸提取純化中，RNase潛在污染源是： 〔 D 〕〔2023〕試驗室環(huán)境； B.試驗用品如吸頭、離心管等；C.試驗人員的手； D.以上都是生物安全水平的級別共分為幾個等級 〔 D 〕〔2023〕個 B．2個 C．3個 D．4個有關(guān)于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？〔 A 〕〔2023〕在擴(kuò)增的指數(shù)期定量； B.承受內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)方法均可；C.可承受Taqman探針； D.在擴(kuò)增的終點測定定量在選擇開展臨床檢驗工程時，應(yīng)首先考慮： 〔 B 〕〔2023〕A.臨床有效性和分析有效性； B.檢測周密度和檢測準(zhǔn)確度；C.臨床有效性和檢測周密度； D.分析有效性和檢測準(zhǔn)確度8以下哪項有利于DNA的保存： 〔A 〕〔2023〕A.參加EDTA螯合鈣離子，去除核酸酶的活性； B.參加少量DNase；C.溶于pH3.0溶液； D.參加少量RNase試驗室的清潔工作應(yīng)在以下狀況下進(jìn)展： 〔 A 〕〔2023〕A.每次試驗后B.文件規(guī)定清潔時間C.試驗室發(fā)生污染時D.以上都是熒光定量PCR檢測過程中，基線漂移的可能緣由有： 〔 D 〕〔2023〕A.蒸發(fā)； B.探針?biāo)?C.相鄰熒光通道干擾 D.以上都是將基因擴(kuò)增檢驗試驗室的產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)置為負(fù)壓狀態(tài)，目的是： 〔 B 〕〔2023〕A.防止有生物傳染危急的樣本逸出；B.防止擴(kuò)增產(chǎn)物從該區(qū)逸出；C.防止該區(qū)灰塵的逸出； D.為了生物安全的目的常用RNase抑制劑是 〔 B 〕〔2023〕乙醇； B.DEPC；C.異丙醇; D.精胺真核生物染色體DNA主要以以下哪種形式存在 〔 D 〕〔2023〕A.環(huán)狀單鏈分子 B.線性單鏈分子C.環(huán)狀雙鏈分子 D.線性雙鏈分子TaqMan探針承受的是 〔 A 〕〔2023〕熒光標(biāo)記的探針 B．生物素標(biāo)記的探針C．同位素標(biāo)記的探針 D．SYBRGreen熒光染料最大量程為200ul的微量移液器，顯示讀數(shù)為020，實際的吸液容量值為：( C 〕〔2023〕A．0.2ul B．2ul C．20ul D．200ul有關(guān)核小體的錯誤表達(dá)是： 〔 D 〕〔2023〕A．核小體是染色體的根本單位 B．DNA和組蛋白共同構(gòu)成核小體C．DNA和組蛋白H1構(gòu)成核小體連接區(qū) D．RNA和組蛋白共同構(gòu)成核小體基因突變的實質(zhì)是： 〔 A 〕〔2023〕A．染色體上的DNA序列變化了 B．染色體上的DNA變成了RNAC．染色體上的DNA變成了蛋白質(zhì) D．染色體上的DNA高級構(gòu)造發(fā)生了局部轉(zhuǎn)變假設(shè)一個PCR20030個循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量將到達(dá)〔C 〕〔2023〕A.200×30×2 B.200×30 C.200×230 D.200×302Sanger測序體系與PCR反響體系的主要區(qū)分是前者含有： 〔B 〕〔2023〕A.模板 B.ddNTPC.DNA聚合酶 D.引物Sanger測序體系與PCR一樣點：都是基于堿基互補(bǔ)配對原則，在DNA聚合酶作用下的聚合反響。不同點：反響過成不同：PCR是引物對擴(kuò)增，測序則是單引物擴(kuò)增。反響成分不同：PCR4種脫氧堿基，測序則有ddNTP分子雜交試驗不能用于： 〔 C 〕〔2023〕A.單鏈DNA分子之間的雜交 B.單鏈DNA與RNA分子之間的雜交C.抗原與抗體分子之間的結(jié)合 D.雙鏈DNA與RNA分子之間的雜交在Sanger基因測序技術(shù)中所使用的酶是: 〔A 〕〔2023〕A.DNA聚合酶 B.RNA聚合酶C.DNA連接酶 D.DNA拓?fù)涿鸽p鏈DNA中的堿基對有： 〔 D 〕〔2023〕A．A-U B．G-T C．C-A D．T-A以下四個DNA片段中含有回文構(gòu)造的是 〔D〕〔2023〕GAAGAA B. TGGAAAC. GAAAAG D. GAATTC核酸分子中儲存遺傳信息的關(guān)鍵局部是： 〔 D 〕〔2023〕A.mRNA B.tRNAC.rRNA D.DNA核酸檢測探針的標(biāo)志性特征是： 〔A 〕〔2023〕一小段序列的單鏈核酸；B.一小段未知序列的單鏈核酸；C.一小段序列的雙鏈核酸； D.有同位素或非同位素標(biāo)記物。作為探針的核酸序列至少必需具備以下兩個條件：①應(yīng)是單鏈，假設(shè)為雙鏈，必需先行變性處理。②應(yīng)帶有簡潔被檢測的標(biāo)記。它可以包括整個基因，也可以僅僅是基因的一局部；可以是DNA本身，也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA。26.核酸分別純化的目的是：〔D〕〔2023〕A.除去PCR抑制物B.增加靶核酸濃度，使之到達(dá)PCR測定范圍C.增加樣本均一性，保證測定周密度和重復(fù)性 D.以上都是mRNA約占總RNA的百分?jǐn)?shù)為：〔A 〕〔2023〕A.5％ B.10％C.15％ D.20％分子檢測對標(biāo)本采集容器的要求是：〔E〕〔2023〕A.密閉 B.一次性 C.無DNase和RNase D.無菌 E.以上均是關(guān)于基因擴(kuò)增檢測試驗室分區(qū)，以下說法不正確的選項是：〔D〕〔2023〕A.外周血游離DNA標(biāo)本制備可與細(xì)胞/組織標(biāo)本制備區(qū)共用；B.須留意試驗室空氣流向；分的通風(fēng)換氣； D.緩沖間不是必需的； E.傳遞窗不是必需的30.“無基因”或“無核酸”概念是指：〔E〕〔2023〕在基因擴(kuò)增檢測操作時，要留意防止由于擴(kuò)增產(chǎn)物污染所致檢測假陽性；在基因擴(kuò)增檢測操作時，要留意防止由于標(biāo)本間穿插污染所致檢測假陽性；每次檢測后試驗室內(nèi)的充分通風(fēng)及清潔；試驗室各區(qū)物品的專用；以上均是商品試劑的性能驗證的合格推斷標(biāo)準(zhǔn)是：〔D〕〔2023〕A.衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)； B.國際標(biāo)準(zhǔn)；C.滿足臨床疾病的診療要求； D.試劑盒說明書上所宣稱的檢測性能E.以上均是L-J指控圖的失控規(guī)章制定的依據(jù)是：〔B〕〔2023〕A.各試驗室依據(jù)自身的狀況具體確定； B.統(tǒng)計學(xué)的“小概率大事”原理；C.超過均值±3SD； D.超過均值±2SD；E.陰性質(zhì)控品檢測為陽性以下哪一種病毒遺傳物質(zhì)為RNA〔D〕〔2023〕A.乙肝病毒 B.人乳頭瘤病毒 C.巨細(xì)胞病毒 D.型冠狀病毒COVID-19以下在PCR反響中，對擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性起打算性作用的是：〔B〕〔2023〕A.模板 B.引物 C.dNTP D.鎂離子有關(guān)于熒光定量PCR方法，下述哪一條是錯誤的？〔 A 〕〔2023〕A.在指數(shù)擴(kuò)增初期定量； B.在擴(kuò)增的終點定量；C.可承受Taqman探針； D.承受內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)方法均可

C.試驗室應(yīng)有充在選擇開展臨床檢驗工程時，應(yīng)首先考慮： 〔 B 〕〔2023〕A.臨床預(yù)期用途； B.檢測周密度和檢測準(zhǔn)確度；C.檢測周密度； D.檢測準(zhǔn)確度一個PCR50030個循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量將到達(dá)〔C 〕〔2023〕A.500×30×2 B.5002×30 C.500×230 D.500×302對COVID-19疑似患者采樣，需要〔C 〕級生物安全個人防護(hù)裝備〔2023〕A.Ⅰ B.Ⅱ C.Ⅲ D.Ⅳ39.手衛(wèi)生分為〔D 〕步〔2023〕A.4 B.5 C.6 D.7除〔A 〕外均可有效滅活型冠狀病毒〔2023〕A.氯已定 B.56℃30分鐘 C.75%乙醇 D.含氯消毒劑在基因擴(kuò)增檢測中，全血或骨髓標(biāo)本不能用肝素抗凝，緣由是〔D 〕〔2023〕A.肝素是TaqDNA聚合酶活性的強(qiáng)抑制劑 B.肝素對Mg++有絡(luò)合作用C.經(jīng)典的核酸提取方法很難去除肝素 D.以上A和C以下哪種狀況需對PCR檢測工程進(jìn)展方法學(xué)驗證明驗：〔D 〕〔2023〕A.開展工程前 B.更換試劑品牌 C.更換儀器 D.以上全是在臨床基因擴(kuò)增檢驗中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控品發(fā)生失控，常見的緣由有下述各項，除〔 B 〕外〔2023〕核酸提取中的喪失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等擴(kuò)增儀孔間溫度的不全都性 C.擴(kuò)增產(chǎn)物的污染D.Taq酶和/或反轉(zhuǎn)錄酶的失活PCR擴(kuò)增檢測承受內(nèi)標(biāo)，可以識別擴(kuò)增檢測的〔C 〕〔2023〕A.假陰性B.假陽性 C.假陰性、假陽性都可以預(yù)防 D.假陰性、假陽性都不能預(yù)防在一個DNA分子中，如G所占摩爾比為17.2%，則A所占摩爾比為〔B 〕〔2023〕A.82.8% B.32.8% C.17.2% D.65.6%四.簡答題(525分)簡述什么狀況下應(yīng)進(jìn)展性能驗證？(5分)〔2023〕答：〔1〕在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由試驗室對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)展獨立驗證。任何嚴(yán)峻影響檢測系統(tǒng)分析性能的狀況發(fā)生后，如儀器搬遷、設(shè)施、環(huán)境嚴(yán)峻失控等。常規(guī)使用期間，定期做。啟用的檢測系統(tǒng)：更換試劑、儀器、校準(zhǔn)品溯源性轉(zhuǎn)變PCR試驗室質(zhì)量治理體系文件應(yīng)包含哪些內(nèi)容？(5分)〔2023〕答：〔1《質(zhì)量手冊》：質(zhì)量方針和質(zhì)量目標(biāo)的聲明。準(zhǔn)則要求的程序和記錄。試驗室規(guī)定的文件和記錄：為確保有效籌劃、運行并掌握其過程。適用的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及其它標(biāo)準(zhǔn)文件。請簡述完整的員工培訓(xùn)打算應(yīng)包含哪些內(nèi)容。(5分)〔2023〕答：〔1〕培訓(xùn)所涉及的范圍：儀器設(shè)備的使用、維護(hù)和校準(zhǔn)。試劑方法原理。質(zhì)量治理體系。相關(guān)法律法規(guī)，相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)、理念和進(jìn)展。試驗操作技能等。如何培訓(xùn)：講座，爭論，自學(xué)和參與培訓(xùn)班。培訓(xùn)的評估：書面考試，試驗考核，爭論心得，論文，綜述等。PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度水平和型別如何要求？(5分)〔2023〕答：定量PCRDNA/RNA參考標(biāo)準(zhǔn)品；定性PCR檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度：接近方法測定下限〔2-4倍〕的濃度，型別：生物DNA參考標(biāo)準(zhǔn)品；人基因組的基因型檢測的室內(nèi)質(zhì)控品的濃度： 型別：人類基因組DNA參考標(biāo)準(zhǔn)品。簡述生物安全的概念、試驗室生物安全水平的概念。(5分)〔2023〕答：試驗室生物安全：為了避開微生物和醫(yī)學(xué)試驗室中有害或有潛在危害的生物因子對人、環(huán)境和社會造成的危害或潛在危害，而實行的防護(hù)措施〔硬件〕和治理措施〔軟件〕，到達(dá)對人、環(huán)境和社會的安全防護(hù)目的。生物安全水平：依據(jù)試驗室的工作性質(zhì)及可能分別到的病原體等級進(jìn)展安全防護(hù)水平的劃分。什么是室內(nèi)質(zhì)量掌握？(5分)〔2023〕答：由試驗室工作人員，實行肯定的方法和步驟，連續(xù)評價本試驗室工作的牢靠性程度，旨在監(jiān)測和掌握本試驗室工作的周密度，提高本試驗室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的全都性，以確定測定結(jié)果是否牢靠，可否發(fā)出報告的一項工作。包括三個方面的內(nèi)容：測定前的質(zhì)量掌握、統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量掌握、質(zhì)量掌握的評價。請從氣流方向、高效過濾器位置、保護(hù)對象、操作對象幾方面比較生物安全柜、超凈臺、通風(fēng)櫥三種設(shè)備。(5分)〔2023〕答：生物安全柜是一種負(fù)壓凈化工作臺，氣流方向是由外向內(nèi)，高效過濾器位置在生物安全柜的頂部漏器上，保護(hù)對象為試驗室和試驗員。超凈臺是正壓送風(fēng)，氣流方向是由內(nèi)向外，進(jìn)風(fēng)口在反面或正面的下方，工作臺正面的金屬網(wǎng)罩內(nèi)是超級濾清器。保護(hù)