細菌內(nèi)毒素（凝膠法）操作SOP

細菌內(nèi)毒素（凝膠法）操作SOP編號：SOP-ZL002-01頁碼：1/3版本號：01修訂號：00機密等級：秘密起草人起草日期頒發(fā)部門質量管理部審核人審核日期批準人批準日期生效日期分發(fā)清單研發(fā)部[]質量管理部[]綜合管理部[]生產(chǎn)管理部[]市場銷售部[]財務部[]目的建立血清內(nèi)毒素檢驗操作規(guī)程，以確保內(nèi)毒素控制效果。適用范圍初制、精制血清的內(nèi)毒素檢驗操作。職責3.1．質量管理部：負責本規(guī)程的起草。3.2．質量管理部檢驗人員：負責本規(guī)程的操作。3.3．總經(jīng)理:負責本規(guī)程的起草。定義無引用標準《中華人民共和國藥典》四部2015版材料及設備6.1.1.鱟試劑，應具有國家主管部門的批準文號。6.1.2.試管架、洗耳球、醫(yī)用膠布、時鐘、脫脂棉、吸水紙、剪刀、砂輪等。6.1.3.刻度吸管6.1.4.細菌內(nèi)毒素國家標準品（NSE）、細菌內(nèi)毒素工作標準品（WSE）6.1.5.細菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水）6.1.6.試管架、洗耳球、醫(yī)用膠布、時鐘、脫脂棉、吸水紙、剪刀、砂輪等。6.1.7.電熱干燥箱：溫度應能維持250℃以上。6.1.8.恒溫試管儀應能在（37±1）℃保持1h。9.1.9.旋渦混合器流程圖無內(nèi)容8.1.供試品細菌內(nèi)毒素的檢查。8.1.1.計算MVD值：MVD＝C·L／λ根據(jù)《中國藥典》現(xiàn)行版L＝10EU／ml，故C為1.0ml／ml。當λ=0.06EU／ml時。MVD＝C·L／λ＝1.0×10／0.06＝160制備供試品溶液其稀釋倍數(shù)不得超過160倍。8.1.2.陽性對照溶液的制備，用BET水制成4λ(0.25)內(nèi)毒素標準溶液。8.1.3.供試品陽性對照液的制備用被測供試品將WSE制成0.25EU/ml內(nèi)毒素標準溶液。8.1.4.鱟試劑的制備：取0.lml／支的鱟試劑5支，加入0.lmlBET水復溶，輕輕轉動瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。8.2.加樣復溶后的0.lml／支規(guī)格的鱟試劑安培5支，其中2支加入0.1ml最大有效稀釋的供試品溶液作為供試品管,1支加入0.1ml用BET水將WSE制成的0.25EU/ml濃度的內(nèi)毒素溶液作為陽性對照，l支加入0.1mlBET水作為陰性對照，1支加入0.1ml供試品陽性對照溶液作為供試品陽性對照管。加樣結束后，混勻保溫放入（37±1）℃恒溫水浴中，（60±2）min后觀察結果。8.3實驗結果將安瓿從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉180度時，管內(nèi)凝膠不變形,不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（＋）;凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性,記錄為（一）。a鱟試劑靈敏度復核如最大濃度2.0λ4管均為陽性，最低濃度0.25λ4管均為陰性，陰性對照為陰性，求反應終點濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的復核結果（λ）。b干擾實驗：如內(nèi)毒素標準溶液最大濃度2.0λ4管均為陽性，最低濃度0.25λ4管均為陰性，陰性對照為陰性，求用BET水制成的內(nèi)毒素標準溶液的反應終點濃度的幾何平均值（ES）和用供試品稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應終點濃度的幾何平均值（Et）。8.4.結果判斷a鱟試劑靈敏度復核：當λ在0.5λ～2.0λ(包括0.5λ、2.0λ)方可用于干擾實驗和供試品細菌內(nèi)毒素檢查，并以λ（標示靈敏度）為該批鱟試劑的靈敏度。b干擾實驗當Es在0.5λ2.0λ(包括0.5λ、2.0λ)時，且當Et在0.5Es～2.0Es(包括0.5Es、2.0Es)時，則認為供試品在該濃度下不干擾試驗，否則使用更靈敏的鱟試劑，對供試品進行更大倍數(shù)稀釋后再進行干擾試驗。c供試品細菌內(nèi)毒素檢查供試品2管均為（一），應認為符合規(guī)定。如2管均為（＋）,應認為不符合規(guī)定；如2管其中1管為（＋），另1管為（一），按上述方法另取4支鱟試劑與供試品進行復試，4管中只要有1管為（＋），即認為不符合規(guī)定。若第一次試驗時供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而結果出現(xiàn)2管為（＋）或2管中1管為（＋），另1管為（一）時，按同樣方法復試和判定，復試時要求將其稀釋至MVD。若陽性對照（一）或供試品陽性對照為（一）或陰性對照為（＋），試驗失