疫苗制造基本程序

疫苗制造基本程序第1頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月項(xiàng)目一細(xì)菌性滅活疫苗制造項(xiàng)目二細(xì)菌性活疫苗制造項(xiàng)目三病毒疫苗的制造內(nèi)容第2頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月項(xiàng)目一細(xì)菌性滅活疫苗制造第3頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅活細(xì)菌疫苗通用制造程序

菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活

配苗濃縮

菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗細(xì)菌性滅活疫苗簡(jiǎn)稱滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。

一、細(xì)菌性滅活疫苗制造第4頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第5頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月基本流程菌液佐劑+乳化分裝和保存原料配置滅活菌液滅活第6頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、細(xì)菌性滅活疫苗制造（一）菌種與種子

1.菌種

制苗用菌種多數(shù)為毒力強(qiáng)、免疫原性優(yōu)良的菌株，通常使用1-3個(gè)品系，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所或中國(guó)獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、凍干保存和供應(yīng)。各種用于制造菌苗的菌種應(yīng)按規(guī)定定期復(fù)壯，并進(jìn)行形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌型、抗原性和免疫原性鑒定，合格菌種準(zhǔn)許用于制苗。2.種子培養(yǎng)將經(jīng)鑒定符合標(biāo)準(zhǔn)的菌種接種于菌苗生產(chǎn)規(guī)程中所規(guī)定的培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查、活菌計(jì)數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)后即為種子液，用于菌苗生產(chǎn)。種子液通常保存于2-8C冷暗處，不得超過規(guī)程規(guī)定的使用期限。菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗第7頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）菌液培養(yǎng)

大量生產(chǎn)的細(xì)菌培養(yǎng)方法甚多，既有手工式的，也有機(jī)械化或自動(dòng)化的培養(yǎng)方式。機(jī)械化或自動(dòng)化的培養(yǎng)方式通稱為反應(yīng)缸培養(yǎng)法，可供選擇的菌液培養(yǎng)法有：液體靜置培養(yǎng)法、液體深層通氣培養(yǎng)法、透析培養(yǎng)法及連續(xù)培養(yǎng)法等。

菌液培養(yǎng)也可采用固體培養(yǎng)法，該方法易獲得高濃度的細(xì)菌懸液，易稀釋成不同濃度，且含培養(yǎng)基的成分較少，所以比較適用于制備診斷用的抗原。一、細(xì)菌性滅活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗第8頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）滅活

滅活菌苗通常根據(jù)細(xì)菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當(dāng)?shù)臏缁顥l件進(jìn)行，幾種滅活菌苗的滅活方法如表所示。表幾種滅活菌苗的滅活方法

一、細(xì)菌性滅活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗第9頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）濃縮

為提高某些滅活菌苗的免疫力，在培養(yǎng)過程中采取提高菌數(shù)的基礎(chǔ)上，再通過濃縮方法達(dá)到目的。常用的濃縮方法：氧化鋁膠吸附沉淀法離心沉降法羧甲基纖維沉淀法

以上方法可使菌液濃縮一倍以上。此外，有些細(xì)菌在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生分子量小的可溶性抗原（如豬丹毒桿菌產(chǎn)生的糖蛋白）也可經(jīng)氫氧化鋁吸附濃縮；將破傷風(fēng)脫毒液按鹽酸—食鹽法處理，以作進(jìn)一步精制成提純破傷風(fēng)類毒素。一、細(xì)菌性滅活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗第10頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（五）配苗與分裝

由于滅活菌苗所用的佐劑不同，所以配苗方法也不相同。

氫氧化鋁菌苗：可在加入甲醛滅活的同時(shí)，按比例加入氫氧化鋁膠配制；也可在菌液經(jīng)甲醛滅活后再按比例加入氫氧化鋁膠配苗。有的廠油佐劑菌苗的配制程序?yàn)椋河跍缇挠腿閯?35m110號(hào)白油、11.4m1Span-85、3.6mlTween80混合液中，在邊攪拌下加入等量甲醛滅活菌液配制。

配苗和分裝：應(yīng)充分混勻，及時(shí)塞塞、貼簽或印字。一、細(xì)菌性滅活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗第11頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月項(xiàng)目二細(xì)菌性活疫苗制造第12頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月弱毒菌種多系凍干品，由中國(guó)藥品生物制品檢定所或中國(guó)獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、保存與分發(fā)，少數(shù)由國(guó)家指定單位鑒定、保存與供給。菌種使用前應(yīng)按規(guī)程規(guī)定進(jìn)行復(fù)壯、挑選，并作形態(tài)、特性、抗原性和免疫原性鑒定，符合標(biāo)準(zhǔn)后方可用于制苗。將檢定合格的菌種接種子于規(guī)定的培養(yǎng)基，按規(guī)定的條件增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查及有關(guān)的檢查合格者即可作為種子液。種子液通常在0～4C可保存2個(gè)月，在保存期內(nèi)可作為菌苗生產(chǎn)的批量種子使用。

細(xì)菌性活疫苗多指弱毒菌苗，盡管種類與苗型甚多，但基本制造程序相同。（一）菌種與種子二、細(xì)菌性活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)濃縮配苗第13頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月按1%～3%量將種子液接種于培養(yǎng)基，然后依不同菌苗要求進(jìn)行培養(yǎng)。如豬丹毒弱毒菌須在在深層通氣培養(yǎng)中加入適當(dāng)植物油作消泡劑，通入過濾除菌的熱空氣進(jìn)行培養(yǎng)制造菌液如人用炭疽活疫苗、卡介苗經(jīng)固體表面培養(yǎng)完成后須按規(guī)定要求將菌苔洗下制成菌液菌液于0～4C暗處保存，待抽樣經(jīng)純粹、活菌數(shù)等檢查合格后使用。（二）菌液培養(yǎng)二、細(xì)菌性活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)濃縮配苗第14頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月經(jīng)檢驗(yàn)合格的菌液，按規(guī)定比例加入保護(hù)劑配苗，充分搖勻后隨即進(jìn)行分裝，分裝量必須準(zhǔn)確。分裝好的菌苗迅速送入凍干柜進(jìn)行預(yù)凍、真空干燥，凍于完畢后立即加塞、抽空、封口，移入冷庫(kù)保存，并由質(zhì)檢部門抽樣檢驗(yàn)。（四）配苗與凍干為提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可進(jìn)行濃縮，以提高單位活菌數(shù)，常用的依縮方法有吸附劑吸附沉降法、離心沉降法等，如于豬丹毒菌液內(nèi)加入0.2%～0.25%羧甲基纖維素(CMC)進(jìn)行濃縮，也可用離心沉淀濃縮。濃縮菌液應(yīng)抽樣作純粹、活菌數(shù)等檢查。（三）濃縮二、細(xì)菌性活疫苗制造菌種的選擇菌液培養(yǎng)濃縮配苗第15頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流程圖1——細(xì)菌疫苗制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基細(xì)菌分離菌種弱毒菌種配置、滅菌鑒定減毒檢驗(yàn)配制滅菌檢驗(yàn)配制滅菌原料佐劑滅活菌液配苗、乳化滅活疫苗培養(yǎng)菌苗原液配苗活疫苗保護(hù)劑菌液分裝、凍干分裝滅活原料活化種子第16頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月項(xiàng)目三病毒疫苗制造病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造病毒性動(dòng)物組織疫苗制造第17頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造受精卵應(yīng)來自SPF雞群，至少源于未用抗生素藥物的非免疫雞群，以免受母源抗體的干擾和殘留抗生素的影響。從受精卵入孵開始至培養(yǎng)全過程都應(yīng)保持無菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動(dòng)，然后選擇。選擇一定日齡、發(fā)育正常的胚用于接毒培養(yǎng)。

痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和皰疹病毒等一類生物制品，目前仍然利用禽胚特別是雞胚制備，如雞新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟熱雞胚弱毒疫苗等。禽胚疫苗生產(chǎn)的原材料來源方便、質(zhì)量比較容易控制，制造程序簡(jiǎn)單，不需要過高的設(shè)備條件，生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量可靠。（一）雞胚選擇雞胚選擇種毒與毒種繼代接毒與收獲配苗第18頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）種毒與毒種繼代目前適應(yīng)于雞胚的種毒多系弱毒，包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類。各種制苗用的種毒多數(shù)由國(guó)家菌毒種保藏部門或指定單位保存，保存的種毒多為凍干毒。凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復(fù)壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標(biāo)準(zhǔn)后方可作力生產(chǎn)疫苗的毒種，毒種檢定內(nèi)容包括無菌檢驗(yàn)、毒價(jià)測(cè)定和其他項(xiàng)目的檢定等。一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造種毒與毒種繼代雞胚選擇接毒與收獲配苗第19頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）接毒與收獲

雞胚接毒涉及接毒途徑和接毒量?jī)煞矫妗８鶕?jù)不同的病毒與不同疫苗生產(chǎn)程序，選擇最佳接種途徑和接種量。接種途徑：絨毛尿囊膜接種11~12日齡胚尿囊腔接種9~11日齡胚羊膜腔接種10~12日齡胚卵黃囊接種5~8日齡胚如雞新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接種10-3稀釋毒種0.1ml，后者接種10-4稀釋毒種0.1ml。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗采用絨毛尿囊膜接種50-100倍稀釋毒0.2ml。1.接毒一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造接毒與收獲雞胚選擇種毒與毒種繼代配苗第20頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時(shí)間和溫度、濕度以及收獲的標(biāo)準(zhǔn)與內(nèi)容物依不同的病毒和不同的疫苗而異。如雞新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39C、相對(duì)濕度60%~70%條件培養(yǎng)增殖，收集接毒后24~48h內(nèi)死亡胚，置0~10C冷卻4~24h，收獲胚液，進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，供制備濕苗用。也可收獲胚液、胎兒及絨毛尿囊膜混合制成乳劑制備凍干苗。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗，則收集接毒后48~120h內(nèi)死亡的雞胚，冷卻后采取絨毛尿囊膜、尿囊液、胎兒制造凍干苗用。2.培養(yǎng)收獲第21頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

按規(guī)定收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無菌檢驗(yàn)合格后即可進(jìn)行配苗。

1.濕苗通常于雞胚液內(nèi)，按每毫升加入青霉素和鏈霉素500~1000U，放置0~10C冷暗處處理后分裝。

2.凍干苗經(jīng)無菌檢驗(yàn)后合格的胚液或胚液、胎兒、絨毛尿囊膜乳劑，按比例加入保護(hù)劑，充分混合后濾過，于濾液內(nèi)按每毫升加入青、鏈霉素500~1000U，混合后分裝凍干。

3.滅活苗

收獲雞胚液經(jīng)無菌檢驗(yàn)及毒價(jià)測(cè)定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液，按不同病毒的滅活溫度、時(shí)間進(jìn)行滅活，加入相應(yīng)的佐劑，制備成滅活疫苗，放置4-10C保存。（四）配苗一、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造配苗雞胚選擇種毒與毒種繼代接毒與收獲第22頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流程圖2——病毒性禽胚疫苗制造工藝流程受精卵禽胚毒株種毒滅活病毒液鑒定培育檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制原料佐劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒尿囊液或禽胚組織含病毒懸液配苗活疫苗保護(hù)劑分裝、凍干分裝滅活原料種子擴(kuò)增收獲配制純化病毒懸液接種第23頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造

用于制苗用的種毒應(yīng)經(jīng)毒力、最小免疫量、安全性、無菌檢定合格，通常為凍干品，由國(guó)家指定的苗毒種保藏部門檢定分發(fā)。領(lǐng)取的種毒應(yīng)按規(guī)定在細(xì)胞繼代培養(yǎng)適應(yīng)后用作毒種，制苗用毒種應(yīng)按規(guī)定控制在一定代數(shù)以內(nèi)，或?yàn)闈穸径痉N，或?yàn)閮龈啥痉N。

細(xì)胞培養(yǎng)疫苗有細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗和細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗兩類，前者多以強(qiáng)毒毒株培養(yǎng)增殖制造，后者則用弱毒毒株增殖生產(chǎn)，兩者的制造程序既有相同之處，又有區(qū)別。由于病毒不同與疫苗性質(zhì)不同，所采用的細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)方法也有所不同（一）種毒與毒種繼代接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備第24頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

制造疫苗用的細(xì)胞大體為原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞兩類，根據(jù)病毒種類、疫苗性質(zhì)與工藝流程選擇不同的細(xì)胞。

選擇的依據(jù)包括：病毒的適應(yīng)性高、毒價(jià)高、細(xì)胞來源方便、制備簡(jiǎn)單、生命力強(qiáng)。如豬瘟兔化弱毒牛睪丸細(xì)胞疫苗采用犢牛睪丸原代細(xì)胞；脊髓灰質(zhì)炎活疫苗選擇vero細(xì)胞；狂犬病弱毒細(xì)胞適應(yīng)疫苗采取BHK21細(xì)胞增殖病毒等。（三）細(xì)胞制備接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造培養(yǎng)細(xì)胞和增殖病毒用的營(yíng)養(yǎng)液又稱培養(yǎng)液，通常分為細(xì)胞培養(yǎng)用的生長(zhǎng)液和病毒增殖用的維持液，兩者不同的之處通常只是生長(zhǎng)液內(nèi)含有5%-10%的血清；維持液血清濃度為2%-5%。不同細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)成分和生長(zhǎng)條件不盡相同。目前常用的細(xì)胞培養(yǎng)方法為靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)，至于微載體培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)在我國(guó)尚處于試驗(yàn)之中。第25頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）接毒與收獲

病毒接種培養(yǎng)有同步與異步之分，前者在細(xì)胞分裝同時(shí)或不久接種毒種，進(jìn)行培養(yǎng)，如貓、犬傳染性腸炎疫苗(細(xì)小病毒)；后者在細(xì)胞形成單層后接種毒種，如流行性乙型腦炎細(xì)胞培養(yǎng)疫苗。通常在細(xì)胞形成單層后傾去培養(yǎng)液，按1%-2%量接種毒種，經(jīng)吸附后加入維持液繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，待出現(xiàn)70%-85%以上細(xì)胞病變時(shí)即可收獲。病毒培養(yǎng)液收獲時(shí)間和方法依疫苗性質(zhì)而定，可將培養(yǎng)瓶?jī)鋈跀?shù)次后收集；或加入EDTA-胰蛋白酶液消化分散收?。换蛟诓《驹鲋撑囵B(yǎng)過程中可收獲5-7次毒液，細(xì)胞毒液經(jīng)無菌檢驗(yàn)、毒價(jià)測(cè)定合格后供配苗用。

接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造第26頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）配苗1．滅活疫苗不同滅活劑對(duì)不同病毒的作用也不同。向細(xì)胞毒液內(nèi)按規(guī)定加入滅活劑，在一定的溫度下作用一定的時(shí)間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活。滅活疫苗配置通常都需加入佐劑，充分混合、分裝，制成滅活疫苗。2．凍干苗細(xì)胞毒液內(nèi)按比例加入保護(hù)劑或穩(wěn)定劑，充分混合、分裝，進(jìn)行冷凍真空干燥制成凍于疫苗。

接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細(xì)胞制備二、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造第27頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月流程圖3——病毒性細(xì)胞疫苗制造工藝流程動(dòng)物或胚胎組織毒株種毒滅活病毒消化鑒定培育培養(yǎng)檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制原料佐劑傳代細(xì)胞配苗（混勻、乳化）滅活疫苗細(xì)胞懸液生長(zhǎng)細(xì)胞配苗活疫苗保護(hù)劑原苗分裝、凍干分裝滅活原料原料細(xì)胞培養(yǎng)液配制剪碎種子鑒定擴(kuò)增收獲配制滅菌第28頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第29頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、病毒性動(dòng)物組織疫苗制造病毒在易感動(dòng)物體內(nèi)可大量增殖，但在各器官組織、部位中增殖病毒的量卻有很大的差異，利用病毒增殖迅速、含毒量高的組織制造的疫苗稱為組織疫苗(tissuevaccine)。動(dòng)物組織疫苗包括動(dòng)物組織滅活疫苗和動(dòng)物組織弱毒活苗兩類，前者多數(shù)由強(qiáng)毒株制造，如豬瘟結(jié)晶紫疫苗、狂犬病羊腦組織疫苗；后者均以弱毒株生產(chǎn)，如豬瘟兔化弱毒乳兔組織疫苗、牛瘟兔化弱毒組織疫苗等。動(dòng)物質(zhì)量直接影響到組織疫苗的質(zhì)量，特別是對(duì)疫苗的安全性和效力有著決定性的作用，動(dòng)物必須符合下列標(biāo)準(zhǔn)：

(1)應(yīng)該是清潔級(jí)(二級(jí))以上的等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，即無規(guī)定的人獸共患性病原體動(dòng)物；

(2)應(yīng)是對(duì)所接種病毒易感性高的動(dòng)物，即在品種、年齡和體重方面合乎要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。（一）動(dòng)物選擇觀察與收獲動(dòng)物選擇配苗種毒與接種第30頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月種毒既可用抗原性優(yōu)良、致死力強(qiáng)的自然毒株臟器組織毒或強(qiáng)毒株增殖培養(yǎng)物，也可用弱毒株組織毒種。無論何種種毒都須經(jīng)純粹、抗原性和免疫原性檢查合格后使用。接種途徑依病毒性質(zhì)和目的而異，例如豬瘟結(jié)晶紫苗，采取豬肌肉注射血液毒種；牛瘟兔化弱毒疫苗，以兔耳靜脈注射脾淋毒種；狂犬病疫苗，用兔腦毒種接種綿羊腦內(nèi)途徑感染。幾種動(dòng)物常用的接種途徑如下：

1.腦內(nèi)注射：顱前后中線5mm平行線與瞳孔橫線交叉處。

2.靜脈注射：家兔由耳靜脈注入；雞自翅下肢靜脈注入。

3.肌肉注射：選擇腿部、胸部、臀部等肌肉豐滿處注射。

4.皮下注射：家兔和豚鼠可選擇在腹部或后腿內(nèi)注射。

5.腹腔注射：家兔與豚鼠可選腹股溝處刺入腹腔。（二）種毒與接種三、病毒性動(dòng)物組織疫苗制造觀察與收獲動(dòng)物選擇配苗種毒與接種第31頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物在接種感染后應(yīng)每天觀察和檢查規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)，指標(biāo)或項(xiàng)目因不同病毒而異。常規(guī)觀察、檢查的項(xiàng)目如食欲、精神和活動(dòng)狀態(tài)、體溫、糞便、尿和血液變化等。根據(jù)觀察的征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動(dòng)物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒量高的器官組織。如豬瘟結(jié)晶紫疫苗采取發(fā)病豬的血液制備；兔出血癥組織滅活疫苗采集病兔肝臟生產(chǎn)；狂犬病疫苗利用發(fā)病羊的羊腦組織制造。（三）觀察與收獲三、病毒性動(dòng)物組織疫苗制造觀察與收獲動(dòng)物選擇配苗種毒與接種第32頁(yè)，課件共36頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．組織滅活疫苗采取收獲的組織經(jīng)無菌檢驗(yàn)及毒價(jià)測(cè)定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液和滅活劑（甲醛、酚、結(jié)晶紫等）制成勻漿，然后按不同病毒的滅活溫度、時(shí)間進(jìn)行滅活。如狂犬病疫苗配制按腦組織1:4加入含有甘油及1%酚蒸餾水，于360.5C滅活7天制成；豬瘟結(jié)晶紫疫苗配制，按血毒4份，結(jié)晶紫甘油溶液1份混合，于37C~38C滅活6~8天。2.弱毒組織疫苗在無菌操作下剔除臟器上的脂肪與結(jié)締組織等，稱重后剪碎，加入適最保護(hù)劑制成勻漿，然后濾過扣除殘?jiān)?，再按濾液中的實(shí)際組織量計(jì)算稀釋倍數(shù)，加入余量保護(hù)劑和青鏈霉素500~100