微生物檢測(cè)基礎(chǔ)知識(shí)講義

微生物檢測(cè)基礎(chǔ)知識(shí)講義第1頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月微生物檢測(cè)基礎(chǔ)知識(shí)一、基本知識(shí)1.1什么是微生物?

微生物是一群形體非常微小,肉眼看不到或很難看清它的生物,只有通過(guò)光學(xué)或電子顯微鏡,放大幾百倍或幾十萬(wàn)倍才能看清楚.第2頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.2微生物的分類(lèi)非細(xì)胞生物(病毒)

微生物原核生物(細(xì)菌)

細(xì)胞生物真核生物(酵母菌)第3頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.3微生物的特點(diǎn)1)個(gè)體微?。ㄐ∮?.1mm，肉眼不可見(jiàn)）,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單.微生物多數(shù)是單細(xì)胞2)分布廣（自然界中到處都有，如水、空氣、土壤）等,種類(lèi)多（10萬(wàn)多種）3)繁殖快數(shù)量大4)易于變異,適應(yīng)能力強(qiáng)5)易于培養(yǎng),代謝活力強(qiáng)第4頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.4腐敗變質(zhì)食品對(duì)人體健康的影響①產(chǎn)生厭惡感。由于微生物在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中促使食品中蛋白質(zhì)分解，蛋白質(zhì)在分解過(guò)程中產(chǎn)生的有機(jī)胺、硫化氫、硫醇、吲哚、糞臭素等，具有蛋白質(zhì)分解所特有的惡臭，使人嗅覺(jué)產(chǎn)生極其難受的厭惡感。另外細(xì)菌和霉菌在繁殖過(guò)程中能產(chǎn)生色素，使食品染上各種難看的顏色，并破壞了食品的營(yíng)養(yǎng)成分，使食品失去原有的色香味，也使人產(chǎn)生不快的厭惡感。此外，油脂酸敗的“哈喇”和碳水化合物分解后產(chǎn)生的特殊氣味，也往往使人們難以接受。第5頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月②降低食品營(yíng)養(yǎng)。蛋白質(zhì)腐敗分解后產(chǎn)生低分子物質(zhì)，因而喪失了蛋白質(zhì)原有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。脂肪酸敗水解氧化營(yíng)養(yǎng)成分分解，因而使?fàn)I養(yǎng)價(jià)值嚴(yán)重降低。由于食品從生產(chǎn)加工到銷(xiāo)售的整個(gè)過(guò)程中，有很多情況和因素均可促使食品腐敗變質(zhì)并具有毒性，而且可能使食品產(chǎn)生毒性的有毒物質(zhì)多種多樣，食品被污染的方式和程度也很復(fù)雜，因而腐敗變質(zhì)食品對(duì)人體健康造成的危害也表現(xiàn)不同。第6頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一是引起急性中毒。在一般情況下，常引起急性中毒，輕者多以急性胃腸炎癥狀出現(xiàn)，如嘔吐、惡心、腹痛、腹瀉、發(fā)燒等，經(jīng)過(guò)治療可以恢復(fù)健康；但重者可出現(xiàn)呼吸、循環(huán)、神經(jīng)等系統(tǒng)癥狀，搶救及時(shí)可轉(zhuǎn)危為安；如貽誤時(shí)機(jī)還可危及生命，有的急性中毒，雖經(jīng)千方百計(jì)治療，但仍給中毒者留下后遺癥。第7頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二是慢性中毒或潛在性危害。有些變質(zhì)食品中的有毒物質(zhì)含量少，或者由于本身毒性作用的特點(diǎn)，并不引起急性中毒，但長(zhǎng)期食用，往往可造成慢性中毒，甚至可以表現(xiàn)有致癌、致畸、致突變的作用。食用腐敗變質(zhì)、霉變食物除了可以引起急性中毒外，還具有極其嚴(yán)重的潛在危害第8頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.5食品被微生物污染后對(duì)人體的危害自然界有許多微生物存在，其中有少數(shù)微生物對(duì)人類(lèi)、動(dòng)物或植物有病害作用，這類(lèi)微生物就稱(chēng)為病原微生物，也可稱(chēng)它為致病微生物，或簡(jiǎn)稱(chēng)致病菌。在自然界中除了少數(shù)能引起人體病害的病原微生物存在外，還有大量的、種類(lèi)繁多的、非致病的腐生微生物存在，其中一部分微生物在一定的條件下，可以引起食品變質(zhì)。第9頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月引起人類(lèi)病害的微生物有多種，其中一部分是因侵入消化道而引起疾病的，與食品衛(wèi)生有關(guān)的致病菌基本上就是這一類(lèi)的病菌。在引起食品變質(zhì)的微生物中，有些還能產(chǎn)生對(duì)人體有毒害的物質(zhì)，當(dāng)人體誤食含有大量腐生微生物的食品或含有微生物毒素的食品后，就會(huì)發(fā)生不同程度的中毒。能在食品中產(chǎn)生毒素的微生物，多見(jiàn)于細(xì)菌和霉菌。第10頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月食品被微生物污染后對(duì)人體的危害可分為三種：細(xì)菌性食物中毒（常見(jiàn)的食物中毒）、真菌性食物中毒、消化道傳染病。各種致病菌引起人類(lèi)癥狀如下： 沙門(mén)氏菌：主要有傷寒，食物中毒和敗血癥等等。（急性胃腸炎癥狀） 金黃色葡萄球菌：侵入人體傷口會(huì)產(chǎn)生化膿性感染，惡心、多次嘔吐、腹痛。 致病性大腸桿菌：腹瀉第11頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月消化道傳染病是傳染病中的一大類(lèi)疾病，是由于食用了被微生物或寄生蟲(chóng)污染了的食品而發(fā)生的傳染性疾病。這種傳染病的病原菌具有很強(qiáng)的致病力，僅少量病原菌即可引起疾病的發(fā)生，并且人與人之間可以直接傳染。細(xì)菌性痢疾、傷寒及副傷寒、霍亂等。第12頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.6食品微生物檢測(cè)食品微生物檢測(cè)就是應(yīng)用微生物學(xué)的理論與方法，研究食品中微生物的種類(lèi)數(shù)量、生理特性、活動(dòng)規(guī)律及其對(duì)人和動(dòng)物健康的影響。第13頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1菌落總數(shù)的檢測(cè)意義食品可能被多種類(lèi)群的微生物所污染，并在其中進(jìn)行繁殖，食品中含有微生物數(shù)量的多少，可反映出食品被污染的程度如何，食品中細(xì)菌數(shù)越多說(shuō)明食品的污染愈嚴(yán)重，愈不新鮮，細(xì)菌數(shù)少，說(shuō)明衛(wèi)生質(zhì)量好。第14頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月菌落總數(shù)(依據(jù)方法GB/T4789.2-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定)：食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后(培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時(shí)間、Ph、需氧性質(zhì)等)，所得1ml(g)待測(cè)樣品中所含菌落的總數(shù)。(GB/T4789.2-2003)單位cfu/ml(g)所的結(jié)果只包括一群在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。目的是為了判定食品被污染的程度。第15頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2大腸菌群的檢測(cè)意義在評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，也采用大腸菌群作為糞便污染的指標(biāo)細(xì)菌，以含大腸菌群的多少作為依據(jù)。如大腸菌群數(shù)越多，表示受糞便污染的程度越大，受腸道中病原菌污染的可能性越大。第16頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.7食品微生物的檢測(cè)項(xiàng)目大腸菌群(依據(jù)方法:GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測(cè)定)

大腸菌群:一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。依據(jù)方法:GB/T4789.3-2003

食品中大腸菌群數(shù)以100g(ml)檢樣內(nèi)大腸菌群最大可能數(shù)表示第17頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3霉菌的檢測(cè)意義霉菌和酵母菌及其檢驗(yàn)酵母菌是真菌中的一大類(lèi)，通常是單細(xì)胞，呈圓形,卵圓形、臘腸形或桿狀。霉菌也是真菌，能夠形成疏松的絨毛狀的菌絲體的真菌稱(chēng)為霉菌。 第18頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月霉菌和酵母也可造成中腐敗變質(zhì)。由于它們生長(zhǎng)緩慢和競(jìng)爭(zhēng)能力不強(qiáng)，故常常在不適于細(xì)菌生長(zhǎng)的食品中出現(xiàn)，這些食品是pH低、濕度低、含鹽和含糖高的食品、低溫貯藏的食品，含有抗菌素的食品等

。由于霉菌和酵母能抵抗熱、冷凍，以及抗菌素和輻照等貯藏及保藏技術(shù)，它們能轉(zhuǎn)換某些不利于細(xì)菌的物質(zhì)，而促進(jìn)致病細(xì)菌的生長(zhǎng)；有些霉菌能夠合成有毒代謝產(chǎn)物－霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鮮的和加工的食品中繁殖，可使食品發(fā)生難聞的異味，它還可以使液體發(fā)生混濁，產(chǎn)生氣泡，形成薄膜，改變顏色及散發(fā)不正常的氣味等

。第19頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月因此,霉菌和酵母菌也作為評(píng)價(jià)衛(wèi)生質(zhì)量的指示菌,并以霉菌和酵母計(jì)數(shù)來(lái)判定食品被污染的程度.第20頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.8玻璃器皿的洗滌1)新玻璃器皿含有游離堿，應(yīng)用2%鹽酸溶液浸泡過(guò)夜，再用自來(lái)水沖洗干凈，如果被油性雜質(zhì)污染可浸泡與重鉻酸鉀洗液中，再用水沖洗。2）對(duì)于盛有瓊脂的平板，先把平板中的瓊脂刮去，如果培養(yǎng)基已經(jīng)干涸，可放在肥皂水中煮沸，使瓊脂融化后倒出，然后用清水洗滌。并用毛刷或海綿擦洗內(nèi)壁，以除去粘在壁上的污垢。第21頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3）沾有油脂的載玻片，先用皺紋紙擦拭，然后放入肥皂水中煮十分鐘或在酒精堿溶液中浸泡30分鐘再用自來(lái)水沖洗，洗后的載玻片再在稀的重鉻酸鉀洗液內(nèi)浸泡兩小時(shí)，取出，用自來(lái)水沖洗到無(wú)色為止，最后用蒸餾水沖洗數(shù)次，烘干或浸于95%酒精中備用。第22頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4)清潔液的配制：重鉻酸鉀：

100克水

1000毫升濃硫酸

250毫升先將重鉻酸鉀置于大燒杯或搪瓷鍋內(nèi)，加入水加熱使之溶化。待冷卻后，慢慢加入濃硫酸，并不斷攪拌即成。此溶液腐蝕性極強(qiáng)，只能用于玻璃和瓷器類(lèi)清潔消毒，可以多次使用。待顏色變綠時(shí)，才失去效力。第23頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.9滅菌與消毒消毒：是指應(yīng)用物理或化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的病原微生物，而對(duì)非病原微生物及其芽孢并不嚴(yán)格要求全部殺死。用于消毒的化學(xué)物質(zhì)，稱(chēng)為消毒劑。滅菌：是指殺死一切病原菌和非病原菌及其芽孢，使物體上無(wú)任何存活的微生物第24頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月消毒與滅菌的區(qū)別消毒一般是指消滅病原菌和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體.

滅菌是指殺滅一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體,芽孢和孢子.第25頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干熱滅菌法

灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)、試管口及不能用的污染物品滅菌。干熱空氣滅菌法：這是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種方法，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160℃，恒溫1小時(shí)即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。

第26頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月濕熱滅菌法:

在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因?yàn)橐环矫婕?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含水量高，容易變性。另一方面高溫水蒸汽對(duì)蛋白質(zhì)有高度的穿透力，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡。第27頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月a高壓蒸汽滅菌使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，應(yīng)先打開(kāi)氣門(mén)，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣．再關(guān)上氣門(mén)．使滅菌鍋內(nèi)的壓力升高．0.07MPa115℃0.1MPa121℃滅菌完畢后，切斷電源，等壓力降到零后，再打開(kāi)排氣閥，打開(kāi)滅菌鍋蓋，取出物品。適用于高壓蒸汽滅菌的有：各種培養(yǎng)基，溶液，玻璃器皿、金屬器械、工作服、橡膠用品。第28頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月b流通蒸汽滅菌利用流通蒸汽滅菌器或蒸籠進(jìn)行滅菌的一種方法.每天蒸煮一次每次30分鐘,連續(xù)三天,又稱(chēng)為間歇滅菌.主要用于實(shí)驗(yàn)室一些不耐高溫的培養(yǎng)基及其它液體材料c巴氏消毒主要用于葡萄酒,啤酒及牛奶的消毒.這種方法可以殺死食品中常見(jiàn)的病原菌,及其他微生物的繁殖體,而有不損失食品中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)d煮沸消毒第29頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月將液體材料加熱煮沸至近100℃,維持10-20分鐘可以殺死所有的細(xì)菌繁殖體,但不可能殺死全部芽孢.此法多用于實(shí)驗(yàn)室小件器械的臨時(shí)消毒.第30頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月影響滅菌的因素

a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對(duì)高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)體和病毒在50~65℃，10分鐘就會(huì)被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱，其中抗熱性最強(qiáng)的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在121℃，12分鐘才被殺死。對(duì)同種微生物來(lái)講，幼齡菌比老齡菌對(duì)熱更敏感。第31頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月b.微生物的數(shù)量多少顯然會(huì)影響滅菌的效果，數(shù)量越多，熱死時(shí)間越長(zhǎng)。

c.培養(yǎng)基的成分與組成也會(huì)影響滅菌效果。一般地講，蛋白質(zhì)、糖或脂肪存在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性最強(qiáng)，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同的鹽類(lèi)可能對(duì)滅菌產(chǎn)生不同的影響；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時(shí)間長(zhǎng)。第32頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.10無(wú)菌操作原則用于防止微生物進(jìn)入人體組織或其它無(wú)菌范圍的操作技術(shù)稱(chēng)為無(wú)菌操作。如外科手術(shù)需防止細(xì)菌進(jìn)入傷口.

在各種生物實(shí)驗(yàn)中,為了防止微生物的生長(zhǎng)和繁殖影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,也要在無(wú)菌的環(huán)境下進(jìn)行.

第33頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月無(wú)菌操作的要求是:

1操作前將界面上的細(xì)菌和病毒等微生物殺滅

2操作過(guò)程中是界面與外界隔離,避免微生物的侵入第34頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1)實(shí)驗(yàn)前，無(wú)菌室應(yīng)打開(kāi)紫外線燈滅菌30分鐘以上,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)穿工作衣帽.2)嚴(yán)格無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)在使用前后都必須火焰灼燒。3)實(shí)驗(yàn)前后用75%（v/v）酒精對(duì)手消毒。4)沾有病原微生物的器材，應(yīng)置于指定地點(diǎn)。廢棄物應(yīng)用5%苯酚浸泡。第35頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.11革蘭氏染色

革蘭氏染色法將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性,是由這兩類(lèi)細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不同決定的.G＋菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，透性降低,故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞膜上。呈紫色第36頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，細(xì)胞壁透性加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：

1）涂片固定。取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片,干燥,固定.

2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。

第37頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3）自來(lái)水沖洗。

4）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

第38頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，10秒后水洗，吸去水分。

7）滴加沙黃復(fù)染液復(fù)染1分鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。

染色的結(jié)果，革蘭氏陽(yáng)性菌體都呈紫色，陰性菌體都呈紅色第39頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.10顯微鏡的使用方法顯微鏡是檢驗(yàn)工作中常用的貴重和精密儀器，對(duì)它的使用和保護(hù)必須十分重視。（1）姿勢(shì)：使用顯微鏡時(shí)必須端坐，凳和桌高度適宜。顯微鏡應(yīng)直立在桌上，不可將鏡臂彎曲而使載物臺(tái)傾斜，油液或菌液將流散而影響觀察和污染。用顯微鏡觀察標(biāo)本時(shí)要兩眼睜開(kāi)（如開(kāi)始不習(xí)慣，可以一手掩目，不可閉眼）第40頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）光源：通常用日光燈或天然光線，不用直射日光，以免眼睛和鏡頭受損。若使用顯微鏡燈時(shí)，最好加以藍(lán)色濾光片，以除去黃光的影響。光線的強(qiáng)弱可通過(guò)聚光器的升降、光圈的大小及反光鏡的平面或凹面來(lái)調(diào)節(jié)，光線的適當(dāng)運(yùn)用是項(xiàng)重要的基本功。第41頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3）檢查：①

低倍鏡：一般先用低倍鏡開(kāi)始觀察標(biāo)本，先從側(cè)面注視鏡頭，用粗調(diào)節(jié)將物鏡下旋到底或降到將接觸標(biāo)本時(shí)，再用左眼注視目鏡中，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器，至視野中出現(xiàn)物象時(shí)，最后用細(xì)調(diào)節(jié)器使形象清晰。②

高倍境：低倍鏡調(diào)節(jié)清晰后，換上高倍境，稍加調(diào)節(jié)，即可進(jìn)行觀察，要避免細(xì)菌懸液等污染鏡頭。第42頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月③

油鏡：檢查細(xì)菌常用油鏡。使用油鏡時(shí)要升高聚光鏡，放大光圈，調(diào)節(jié)反光鏡，使射入鏡筒之光線最強(qiáng)。于載玻片上滴加鏡油（香柏油）一滴，使接物鏡下降和鏡油接觸（將觸及載玻片）。注視目鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使物鏡上升少許，見(jiàn)到標(biāo)本后，左手轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器，使物象清晰；右手掌握移動(dòng)器，檢查標(biāo)本。用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，切勿用粗調(diào)節(jié)器下目鏡，以免壓碎標(biāo)本片，損壞油鏡頭。油鏡使用完畢，須用擦鏡紙將鏡頭拭凈。第43頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月加鏡油的原理：主要是避免部分光線折射的損失。因油鏡的折射率和玻片的折射率相近，而與空氣的折射率相差較多，所以使用鏡油的目的是將鏡頭的鏡面和玻片之間的空間為鏡油所充滿(mǎn)，這樣絕大部分光線可進(jìn)入鏡面內(nèi)，使視野明亮，便于觀察。第44頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4)顯微鏡的保養(yǎng)：（1）移動(dòng)顯微鏡時(shí)，一般右手握住鏡臂，左手托住鏡座，不可倒立，以免損壞。（2）顯微鏡要保持清潔，鏡頭上如有油污時(shí)，須用擦鏡紙蘸取少許二甲苯輕輕擦拭，然后將二甲苯擦凈，以免脫膠。如被細(xì)菌或糞便沾污時(shí)，應(yīng)立即用紗布拭凈。酸、堿、氯仿、乙醚及乙醇能使油漆脫落，損壞機(jī)件，應(yīng)避免接觸。第45頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（3）顯微鏡使用完畢后，可將鏡頭轉(zhuǎn)成八字形，將聚光器及鏡筒下降至最低位置，用綢布包好，放入鏡箱內(nèi)。（4）顯微鏡時(shí)很貴重和精密的儀器，使用時(shí)要十分愛(ài)惜，各部件不要拆卸。（5）顯微鏡應(yīng)放在干燥、清潔的室內(nèi)，避免受潮發(fā)霉。第46頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一般計(jì)算顯微鏡的放大倍數(shù)是：目鏡的放大率×物鏡的放大率＝顯微鏡的放大倍數(shù)。例如，目鏡的放大率為10，物鏡的放大率為45，這時(shí)顯微鏡的放大倍數(shù)為450。第47頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、食品中微生物的檢測(cè)。2.1實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作1)營(yíng)養(yǎng)瓊脂的配置和滅菌，按照使用說(shuō)明進(jìn)行配制，121℃15分鐘。2)生理鹽水0.9%氯化鈉溶液3)刻度吸管的滅菌(1ml、10ml、25ml)

尾部塞(或不塞)棉花,用舊報(bào)紙包好,或者不包全部放入滅菌桶中.121℃15分鐘高壓蒸汽滅菌第48頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4)9ml的鹽水試管(18mm×180mm)塞上橡膠塞后，121℃滅菌15min5)單料乳糖膽鹽發(fā)酵管按照乳糖膽鹽的使用說(shuō)明，配制成相應(yīng)的溶液，分裝到加有小倒管的試管(18mm×180mm)中，加入量以沒(méi)過(guò)小倒管為宜。塞上橡膠塞后，115℃滅菌15分鐘。第49頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6)雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管只是稱(chēng)取乳糖膽鹽的量加倍，其它與單料乳糖膽鹽發(fā)酵管相同7)滅菌平皿把多個(gè)平皿用報(bào)紙包好，或加入滅菌桶中，121℃滅菌15min8)伊紅美藍(lán)瓊脂平板按照伊紅美藍(lán)瓊脂的使用說(shuō)明配制成相應(yīng)的溶液,在高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行滅菌,115℃15min.然后取出,在液體狀態(tài)時(shí)(無(wú)菌操作)倒入平板中,每個(gè)平板約15ml,冷卻凝固,待用第50頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月9）225ml滅菌生理鹽水（121℃15分鐘）10）高鹽察氏培養(yǎng)基（按使用說(shuō)明進(jìn)行配制和滅菌）第51頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.2實(shí)驗(yàn)操作1)在酒精燈火焰周?chē)Q(chēng)取25g或吸取25ml樣品加入到加有225ml生理鹽水并經(jīng)過(guò)滅菌的三角瓶中，充分振蕩搖勻，制成(1:10)樣品稀釋液。2)用一支10ml的滅菌吸管,每次吸取10ml（1:10）樣品稀釋液，加入到1支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管中，重復(fù)做三支。第52頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3）用一支1ml滅菌吸管，每次吸取1ml(1:10)樣品稀釋液，加入到3支不同的單料乳糖膽鹽發(fā)酵管中。每次吸取1ml(1:10)樣品稀釋液，加入到2個(gè)不同的平皿中。吸取1ml(1:10)樣品稀釋液加入到一直9ml生理鹽水試管中，充分振蕩做成(1:100)樣品稀釋液第53頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4)另用一支1ml滅菌吸管，每次吸取1ml(1:100)樣品稀釋液，加入到3支不同的單料乳糖膽鹽發(fā)酵管中。每次吸取1ml(1:100)樣品稀釋液，加入到2個(gè)不同的平皿中吸取1ml(1:100)樣品稀釋液加入到一直9ml生理鹽水試管中，充分振蕩做成(1:1000)樣品稀釋液第54頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5)另用一支1ml滅菌吸管,每次吸取1ml(1:1000)樣品稀釋液，加入到2個(gè)不同的平皿中6)把滅過(guò)菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱融化，冷卻到46℃后，倒入加過(guò)樣品稀釋液的平板中，每次15ml左右。7）平板在36℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)觀察結(jié)果。乳糖膽鹽發(fā)酵管在36℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果。第55頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第56頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第57頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月8)菌落總數(shù)結(jié)果的記錄及報(bào)告平板培養(yǎng)48小時(shí)之后,取出記錄每個(gè)稀釋度的兩個(gè)平板的菌落數(shù).計(jì)數(shù)時(shí)可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏.求出同稀釋度的兩個(gè)平板平均菌落總數(shù).一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù),其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片裝菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù),若片狀菌落不到平板的一半,而余下的一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2代表全平板菌落數(shù).平板內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)(菌落之間無(wú)明顯界限),僅有一第58頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月條鏈,可視為一個(gè)菌落,如果有不同來(lái)源的幾條鏈,則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì).

選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之.

如果有兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)都在30-300之間時(shí),若兩者的比值小于或等于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù),若大于二則報(bào)告其中較小的數(shù)字第59頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如果所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告.如果所有稀釋度的平均菌落數(shù)都小于30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以倍數(shù)報(bào)告之.如果所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之.第60頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如果所有稀釋度的平均菌落數(shù)都不在30-300之間,其中一部分大于300,一部分小于30,則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之,菌落數(shù)在100以?xún)?nèi)時(shí),按其實(shí)有數(shù)報(bào)告大于100時(shí)采用兩位有效數(shù)字,在有效數(shù)字后面的數(shù)值,以“四舍五入”法計(jì)算.為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來(lái)表示第61頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月例次稀釋液及菌落數(shù)兩稀釋液之比菌落總數(shù)（個(gè)/g或個(gè)ml）報(bào)告方式（個(gè)/g或ml）10-1

10-2

10-3

1多不可計(jì)16420—1640016000或1.6×104

2多不可計(jì)295461.63775038000或3.8×104

3多不可計(jì)271602.22710027000或2.7×104

4多不可計(jì)多不可計(jì)313—313000310000或3.0×105

527115—270270或2.7×102

6000—1<10

<10

7多不可計(jì)30512—3050031000或3.1×104

第62頁(yè)，課件共71頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月9)乳糖膽鹽發(fā)酵管在培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng)24小時(shí)之后取出觀察培養(yǎng)情況