預(yù)防艾滋病梅毒乙肝母嬰傳播實驗室檢測

預(yù)防艾滋病梅毒乙肝母嬰傳播實驗室檢測1第1頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月2

目錄第一部分艾滋病實驗室檢測第二部分梅毒實驗室檢測第三部分乙肝實驗室檢測第2頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月3第一部分艾滋病實驗室檢測第3頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月4艾滋病病原學(xué)及分型艾滋病由艾滋病病毒引起目前已發(fā)現(xiàn)艾滋病病毒分HIV-1型和HIV-2型，后者主要流行于西非。我國目前流行的絕大多數(shù)毒株是HIV-1型中的M亞型，而HIV-1型中的O亞型、N亞型和HIV-2型主要在非洲某些局部地區(qū)流行。HIV屬于RNA病毒，是一種變異性很強的病毒，不同的病毒株之間差異很大，甚至同一毒株在同一感染者體內(nèi)僅數(shù)月就可以改變，使原中和抗體失去中和效能，這給疫苗的研制造成很大困難。第4頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月5發(fā)病機理艾滋病侵入人體后首先與細胞表面含有CD4受體CD4+T淋巴細胞（原始T細胞）結(jié)合，進入細胞進行復(fù)制，部分整合于細胞染色體DNA中成為潛伏型。感染初期由于機體細胞免疫和體液免疫對艾滋病毒的抵抗作用，艾滋病毒低水平復(fù)制。潛伏的艾滋病毒被激活而大量復(fù)制，廣泛侵入人體CD4+T淋巴細胞，使CD4+T淋巴細胞、單核-巨噬細胞、B淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞和NK細胞等功能受損，最后導(dǎo)致整個免疫功能缺陷，最終發(fā)生一系列頑固性機會感染和腫瘤的發(fā)生。第5頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月6自然病程

途徑HIV感染至AIDSAIDS后存活性傳播6-10年（平均8年）12月靜脈吸毒6年左右8.4月血源傳播4-10年（平均6.2年）10-14月第6頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月7感染后的臨床類型典型進展：8-10年內(nèi)免疫力下降?？焖龠M展：CD4+T細胞2-5年內(nèi)迅速下降，HIV病毒一直維持較高病毒栽量。長期不進展：保持較高細胞計數(shù)12-15年以上。第7頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月8

感染后的自然病史時間階段癥狀0初期感染無1-4周血清轉(zhuǎn)化期皮疹，發(fā)熱0-4年無癥狀期無1-6年癥狀期輕微4-10年艾滋病期中等的-嚴重的第8頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月9傳播方式性接觸傳播：主要傳播途徑，包括同性及異性之間的性接觸。肛交、口交有著更大的傳染危險。血液傳播：輸入污染了艾滋病病毒的血液或血液制品；與艾滋病病毒感染的吸毒者共用注射器。共用醫(yī)療器械消毒不徹底或不消毒以及生活用具（如牙刷、剃刀等）第9頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月10傳播方式母嬰傳播：通過胎盤通過分娩時產(chǎn)道通過哺乳傳染。*不會經(jīng)淺吻、握手、擁抱、共餐、共用辦公用品、共用廁所、游泳池、共用電話、打噴嚏等而感染，甚至照料病毒感染者或艾滋病患者都沒有關(guān)系。第10頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月11實驗室檢測一、HIV實驗室診斷二、母親為HIV陽性所生嬰幼兒HIV實驗室檢測第11頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月12一、HIV實驗室診斷第12頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月13HIV感染特點所有的HIV感染者體內(nèi)都會產(chǎn)生針對HIV的抗體這種抗體是針對病毒的特定蛋白而生成的，對HIV而言是獨一無二的。感染者終生都會帶有這種抗體。

第13頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月14HIV檢測種類HIV抗體、抗原檢測HIV病毒栽量檢測HIVCD4+T淋巴細胞檢測HIV耐藥性檢測第14頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月15我國HIV抗體檢測程序篩查試驗重復(fù)試驗確認試驗第15頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月16

抗體篩查試驗的流程圖一陰一陽重復(fù)檢測陰性反應(yīng)篩查試劑原有試劑+另一種篩查試劑陰性報告送確認實驗室進行確認均陽性反應(yīng)均陰性反應(yīng)樣本篩查檢測陽性反應(yīng)第16頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月17初篩試驗報告方式篩查實驗呈陰性反應(yīng)出具HIV抗體陰性報告篩查實驗呈陽性反應(yīng)，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告，不能出陽性報告。第17頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月18HIV篩查檢測結(jié)果的解釋HIV篩查檢測結(jié)果“陰性(-)”：受檢者沒有感染HIV受檢者已經(jīng)感染了HIV，但處于窗口期：3個月后再次進行檢測HIV篩查檢測結(jié)果“陽性(+)”：病人可能已經(jīng)感染HIV但應(yīng)再次重復(fù)檢測，如兩次重復(fù)檢測中1次或2次檢測結(jié)果為陽性，需要進行確認試驗第18頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月19在產(chǎn)前檢查服務(wù)中開展整合的檢測咨詢所采用的HIV檢測流程第19頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月20產(chǎn)時HIV抗體檢測流程第20頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月21HIV抗體初篩檢測試驗酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA常用方法）金標(biāo)快速檢測實驗化學(xué)發(fā)光檢測實驗明膠顆粒凝聚實驗（PA）第21頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月22酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）特點：準(zhǔn)確性高、價格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存，適合于大批樣本檢測。手工操作時應(yīng)注意點：標(biāo)本采集試驗準(zhǔn)備加樣溫育洗板顯色比色第22頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月23抗體初篩檢測中出現(xiàn)的問題假陽性：血液惡化病變自身免疫性疾病多發(fā)性膽汁型肝硬化酒精性肝炎疫苗接種（流感、乙肝）多發(fā)性骨髓瘤腎移植或慢性腎衰竭瘧疾或絲蟲病其它（如孕婦）第23頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月24抗體初篩檢測中出現(xiàn)的問題假陰性：窗口期免疫移植換血輸血惡性腫瘤免疫功能喪失（B細胞功能缺失）其他（試劑或操作原因）第24頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月25檢測HIV的ELISA診斷試劑的進展代次年份方法抗原來源特點窗口期（天）第一代1985間接法純化的HIV病毒裂解抗原對細胞培養(yǎng)蛋白成分發(fā)生交叉反應(yīng)，假陽性較多，血清要高度稀釋，敏感性低，僅含HIV1。

30-60第二代1990間接法基因重組抗原和合成肽抗原無細胞培養(yǎng)蛋白導(dǎo)致的假陽性，敏感性特異性均較第一代有所提高，只能測IgG.1992年批準(zhǔn)HIV1/2。28-35第三代1992雙抗原夾心法基因重組抗原和合成肽抗原可檢測HIV不同抗體亞類（IgG、IgM、IgA等）敏感性、特異性均較高。1996年出現(xiàn)HIV1/2試劑。14-25第四代1998雙抗原夾心法抗體捕獲重組、合成肽，P24抗原單克隆抗體檢測HIV1/2抗體和P24抗原，稱HIV抗原/抗體試劑，可進一步降低輸血的殘余危險度。10-18第25頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月26HIV抗體確認試驗免疫熒光試驗（IFA）放射免疫沉淀試驗（RIPA）免疫印跡（WB）（常用方法）第26頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月27確認試驗報告方式陰性陽性不確定第27頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月28HIV確認試驗結(jié)果的解釋免疫印跡法（WB）確認試驗結(jié)果：陽性：病人確認感染HIV陰性：受檢者沒有感染HIV不確定：受檢者必須在4周后再次采血進行確認試驗。第28頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月29HIV抗體確認試驗流程圖免疫印跡法（HIV1/2混合型)HIV-1陽性反應(yīng)不確定反應(yīng)出現(xiàn)HIV-2指示條帶陰性反應(yīng)陰性報告HIV-1陽性報告免疫印跡法（HIV-2)陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)陰性報告不確定反應(yīng)報告HIV-2血清陽性，必要時測核酸每3個月隨訪一次，共2次，仍屬可疑，則作陰性報告。如隨訪出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報告陽性。第29頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月30HIV抗體檢測類型快速檢測ELISA免疫印跡（WB）準(zhǔn)確性靈敏度特異度非常高幾乎100%>99%非常高幾乎100%>99%因為特異度極高，用于檢測結(jié)果不確定樣本的確認試驗成本++++++結(jié)果報告時間<1小時<3天<10天需要專門實驗室設(shè)備否是是對檢驗人員技術(shù)要求高否是是第30頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月31二、母親為HIV陽性所生嬰幼兒HIV實驗室檢測第31頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月32感染特點母親HIV抗體經(jīng)胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染。出生時嬰兒體內(nèi)的母親HIV抗體，80-90%在生后9-12月消失，出生后18個月基本上全部消失。18個月后兒童體內(nèi)HIV仍然陽性，視為自身感染產(chǎn)生的抗體。18個月以下HIV暴露嬰兒早期診斷推薦檢測HIVDNA，原因是HIV前病毒DNA，以細胞內(nèi)前病毒感染狀態(tài)存在，所以它不受母親圍產(chǎn)期抗病毒治療和嬰幼兒預(yù)防性抗病毒治療的影響。第32頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月33應(yīng)用DNA-PCR方法進行

嬰兒感染早期診斷（EID）（1）采集干血斑（DBS）在嬰兒6周齡時進行檢測。如果PCR檢測結(jié)果陽性，盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測，如果第二次PCR檢測結(jié)果陽性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測結(jié)果陰性，嬰兒出生后3個月再次進行PCR檢測。第33頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月34應(yīng)用DNA-PCR方法進行

嬰兒感染早期診斷（EID）（2）出生后3個月再次進行HIVDNA-PCR檢測如果PCR檢測結(jié)果陽性，盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測，如果第二次PCR檢測結(jié)果陽性，嬰兒確定感染HIV。如果PCR檢測結(jié)果陰性，嬰兒視為未感染HIV，但在嬰兒滿12月齡時進行HIV抗體檢測（如有必要，在18月齡時再次進行檢測）。檢測結(jié)果陰性的嬰兒接受母乳喂養(yǎng)，必須在停止母乳喂養(yǎng)后6周再次進行PCR檢測，以確保嬰兒沒有在母乳喂養(yǎng)期間感染HIV。第34頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月35嬰兒HIV感染早期診斷流程第35頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月36HIV暴露嬰兒/兒童的HIV抗體檢測所有HIV感染母親所生兒童，在出生后6周或3個月未接受EID檢測者，應(yīng)進行HIV抗體檢測。檢測時間：滿12月齡和滿18月齡（必要時，見HIV抗體檢測流程）出生后3個月EID檢測結(jié)果為陰性的兒童也應(yīng)接受HIV抗體檢測滿18月齡HIV抗體檢測陽性，可確認兒童HIV感染。第36頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月37

HIV暴露兒童HIV抗體檢測流程第37頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月38收集、制備干血斑（DBS）什么是干血斑（DBS）？干血斑是直接用濾紙收集一滴全血進行干燥用于血樣本的長時間儲存DBS是用HIVDNA-PCR方法進行嬰兒HIV感染早期診斷檢測的最佳采血方法HIVDNA和HIV抗體可穩(wěn)定地保存在干血斑中轉(zhuǎn)運方便：無需冷藏第38頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月39如何采集干血斑血樣本（1）時刻遵循“普遍防護原則”采集足跟血選擇合適的采血部位，皮膚消毒（圖片中陰影部位）必要時保暖足跟使用一次性消毒采血針足跟置于心臟水平位或之下不要“擠”足跟第39頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月40如何采集干血斑血樣本（2）1.用消毒紗布擦掉第一滴血2.收集此后滴出的大滴血液3.快速、輕柔地用濾紙片的一面接觸血滴4.讓血液滴到采血圈中重復(fù)步驟1-4，直到整個采血圈全部充滿血液。在卡片上標(biāo)注患者的編號。每個兒童用一張新紙片。收集2-4個血斑。不要：用濾紙片按壓出血部位不要多次在同一個采血圈中涂抹血滴在濾紙片兩面均滴入血滴第40頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月41如何采集干血斑血樣本（3）采血圈充滿后：避免碰觸或涂抹血滴水平放置濾紙片，室溫下自然晾干（至少4小時）。避免陽光直射，不要加熱。不要將多張濾紙片疊放在一起，避免血滴接觸其他表面。一旦血樣本完全干燥：放入可封閉的塑料袋中加入干燥劑和濕度指示卡干燥、陰涼保存干血斑濾紙片包裝袋，直到轉(zhuǎn)送到相關(guān)實驗室第41頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月42采集樣本所需要的設(shè)備血樣本采集卡片(濾紙片)；可密封的塑料袋；濕度指示卡；干燥劑（1-2g/袋）；第42頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月43怎樣采集抗凝靜脈血DBS靜脈血充分與EDTA混合；足跟血采集到帶有EDTA

抗凝劑子彈頭內(nèi)；最好采集后立即制備干血斑；血漿與血細胞分層的全血在制備干血斑前，應(yīng)輕柔地上下顛倒采血管（避免血細胞破裂），使血液混勻后制備；第43頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月44用移液槍加代濾芯槍頭移取50-80ul血液；槍頭對準(zhǔn)印圈的中心緩慢將血液滴于濾紙上；避免有氣泡；第44頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月45在包裝前DBS充分干燥第45頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月46怎樣包裝DBS易于保存最好一個樣本一個包裝，多個樣本一個包裝時，樣本間用稱量紙隔開；放入可密封塑料袋中；加干燥劑；加濕度指示卡；標(biāo)記包裝中的內(nèi)容物并密封；第46頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月47第47頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月48第48頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月49第49頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月50怎樣保存DBS將干燥后的DBS冷藏干燥-20度保存；避免陽光暴曬和加熱；第50頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月51怎樣為運輸樣本包裝第一層包裝好的DBS

放入結(jié)實的紙袋中，放入相應(yīng)的文件（采樣單），將上述兩樣放入郵寄信封中并密封，第51頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月52有效的樣本血液充分吸收透過濾紙，填滿印圈，不要在一個圈上重復(fù)采血，避免觸摸或涂抹血斑。第52頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月53第53頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月54第54頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月55樣本在干燥小于4小時前即寄出1、吸附血液過多；2、雙面貼第55頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月56干血斑送檢1、填寫送樣表2、單位：北京海淀區(qū)婦幼保健院檢驗科地址：北京海淀區(qū)蘇州街53號聯(lián)系人：盧新（主任）楊海珊、王孟濱電話9614

郵編：100080

郵箱：hdfyHiv@126.com第56頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月57三、HIV感染的實驗室監(jiān)測

第57頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月58HIV感染的實驗室監(jiān)測實驗室監(jiān)測主要用于：決定開始抗病毒治療還是預(yù)防性應(yīng)用抗病毒藥物；效果監(jiān)測:抗病毒治療效果；毒性監(jiān)測:抗病毒藥物引起的毒副作用。第58頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月59孕產(chǎn)婦抗病毒治療的相關(guān)檢測用藥前，進行CD4+T淋巴細胞計數(shù)、病毒載量檢測及其他相關(guān)檢測（包括血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、血脂、血糖等）。用藥過程中，每三個月進行1次CD4+T淋巴細胞計數(shù)及其他相關(guān)檢測（同前）。孕晚期，進行1次病毒載量檢測，并在分娩前獲得檢測結(jié)果。第59頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月60HIV感染孕產(chǎn)婦常規(guī)實驗室檢測檢測檢測對象原因臨床指導(dǎo)CD4+T淋巴細胞計數(shù)所有HIV感染孕產(chǎn)婦基線評估是否需要抗病毒治療孕產(chǎn)婦：抗病毒治療：CD4<350個細胞/mm3預(yù)防應(yīng)用抗病毒藥物：CD4≥350個細胞/mm3全血細胞計數(shù)（CBC）所有HIV感染孕產(chǎn)婦AZT可引起貧血或白細胞計數(shù)降低如果Hb<9g/dl，不用使用AZT轉(zhuǎn)氨酶所有HIV感染孕產(chǎn)婦如果ALT或AST升高，NVP肝損害副作用的風(fēng)險較高如果ALT/AST升高超過3倍，不要使用NVP尿肌酐所有HIV感染孕產(chǎn)婦如果升高，需要調(diào)整抗病毒藥物的劑量需要參考各種抗病毒藥物劑量說明第60頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月61HIV感染孕產(chǎn)婦常規(guī)實驗室檢測檢測檢測對象原因臨床指導(dǎo)血糖所有HIV感染孕產(chǎn)婦PI類藥物可致血糖升高糖尿病人避免應(yīng)用PI類藥物血脂如果使用PI類藥物PI類藥物可致血脂升高如果血脂升高，避免應(yīng)用PI類藥物梅毒血清學(xué)試驗所有HIV感染孕產(chǎn)婦篩查是否同時感染梅毒如果梅毒檢測陽性，治療梅毒HBsAg如果需要，丙肝血清檢測所有HIV感染孕產(chǎn)婦篩查HBV/HCV感染HBV暴露嬰兒出生后24小時內(nèi)給予HBV疫苗和免疫球蛋白注射；如果HBV/HCV陽性，避免使用NVP胸部X線片和/或結(jié)核皮膚試驗所有HIV感染孕產(chǎn)婦篩查結(jié)核進一步調(diào)查如果活動結(jié)核，治療如果必要，考慮異煙肼預(yù)防性治療（IPT）第61頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月62第二部分梅毒實驗室檢測第62頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月63梅毒病原學(xué)梅毒螺旋體呈細長形似細密的彈簧大小為5-15×0.1-0.2um，一般染料不易著色。梅毒螺旋體有生活發(fā)育周期，平均約30小時增殖一代。發(fā)育周期與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關(guān)。第63頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月64梅毒致病性梅毒螺旋體只感染人類人是梅毒的唯一傳染源根據(jù)感染方式不同可分期：見圖。第64頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月65第65頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月66梅毒免疫性梅毒的免疫是以細胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用，意義不大。當(dāng)螺旋體從體內(nèi)清除后仍可再感染梅毒，而且仍可出現(xiàn)一期梅毒癥狀。梅毒螺旋體侵入人體后，機體會產(chǎn)生梅毒螺旋體特異性抗體以及抗磷脂的自身抗體（非特異性抗體）稱之為反應(yīng)素。第66頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月67梅毒傳播途徑性接觸傳播：是主要的傳染途徑。未經(jīng)治療的患者在感染后1年內(nèi)最具有傳染性；隨著病期的延長，傳染性越來越?。坏礁腥竞?年，通過性接觸一般無傳染性；母嬰傳播：梅毒螺旋體可通過胎盤傳染給胎兒。未經(jīng)治療者，病期>2年雖性傳播危險性較低，但妊娠時仍可傳染給胎兒。血液傳播：輸血、吸毒、紋身、醫(yī)源性傳播等。第67頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月68梅毒實驗室檢測方法

暗視野顯微鏡病原學(xué)檢測

鍍銀染色鏡檢非特異性抗體：即抗心磷脂抗體等（反應(yīng)素）

血清學(xué)檢測特異性梅毒螺旋體抗體：第68頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月69暗視野顯微鏡第69頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月70鍍銀染色鏡檢第70頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月71病原學(xué)檢測特點直接鏡檢找梅毒螺旋體，可確診梅毒。具有快速、方便易操作的特點。早期診斷、及時治療預(yù)后和盡早切斷傳染源都具有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。第71頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月72梅毒血清學(xué)檢測非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（檢測非特異性抗體）RPR（快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗）TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗）VDRL（性病研究實驗室試驗）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（檢測特異性梅毒螺旋體抗體）TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗）:WHO公認的“金標(biāo)準(zhǔn)”ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）POC（快速檢測、一站式檢測）第72頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月73梅毒血清學(xué)試驗基本實驗室設(shè)備檢方法檢測樣本類型必要設(shè)備血清血漿全血RPR/TRUST√√水平旋轉(zhuǎn)儀TPPA√√震蕩儀ELISA√√酶標(biāo)儀、洗板機POC檢測√√√無需特殊設(shè)備第73頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月74非梅毒螺旋體抗體試驗（一）梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對螺旋體表面脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在3-4周產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗原的抗體（反應(yīng)素），并且在不斷升高?？贵w主要是IgM和IgG。除梅毒外，其他醫(yī)學(xué)情況如結(jié)核、瘧疾、妊娠和風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、狼瘡及硬皮病等自體免疫學(xué)疾病也可導(dǎo)致假陽性結(jié)果。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。第74頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月75非梅毒螺旋體抗體試驗（二）抗體滴度通常與疾病活動度有關(guān)。治療后（可能幾個月）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗通常轉(zhuǎn)變?yōu)椴环磻?yīng)；如果用同一種實驗，相同試驗滴度4倍變化（如從1:16下降到1:4或從1:8上升到1:32）為臨床顯著變化；有些病人，抗體滴度可始終處于較低水平，有時可持續(xù)終生（血清固定）。注意：病人血清學(xué)監(jiān)測應(yīng)在同一個實驗室使用同一種檢測方法（RPR、TRUST）進行連續(xù)多次檢測；RPR和TRUST方法均有效，但檢測的滴度結(jié)果不能直接進行比較。第75頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月76非梅毒螺旋體抗體試驗特點快速、簡便、便宜、敏感性和特異性較高；早期梅毒感染后1-2周內(nèi)可呈陰性；出現(xiàn)硬下疳后1-2周變?yōu)殛栃?。二期梅毒時也可出現(xiàn)陰性反應(yīng)。前帶現(xiàn)象：血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現(xiàn)了陽性結(jié)果。可用于：篩查樣本；評估對治療的反應(yīng)；鑒別復(fù)發(fā)還是再次感染。第76頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月77治療后非梅毒螺旋體抗體試驗

抗體滴度變化的臨床意義一期梅毒和二期梅毒：成功治療，抗體滴度應(yīng)3個月后下降2倍6個月后下降4倍一期梅毒：1年后抗體滴度轉(zhuǎn)陰二期梅毒：2年后抗體滴度轉(zhuǎn)陰晚期梅毒：治療后抗體滴度緩慢下降50%的病人2年后抗體滴度仍為陽性第77頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月78RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗)

基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性碳顆粒，與待檢血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見的黑色絮狀物TRUST（甲苯胺紅試驗)特點：其原理和成分與RPR試驗相同用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒其余的特點均與RPR相同第78頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月79定性試驗

(1)加樣：吸取50微升血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中。

(2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原。

(3)反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘[(100±5)轉(zhuǎn)/分鐘]，立即在亮光下觀察結(jié)果第79頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月80凝集反應(yīng)強度分級：3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的黑色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的黑色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁?！簣A圈內(nèi)僅見黑色集中于中央一點或均勻分散。第80頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月81操作步驟孔號12345678稀釋倍數(shù)

原倍1:21:41:81:161:32陽性K

陰性K生理鹽水(ul)-50.050.050.050.050.0--樣品(ul)50.0

50.050.050.050.050.0棄50.0-

-陽性血清(ul)------50.0-陰性血清(ul)-------50.0抗原懸液(ul)16.716.716.716.716.716.716.716.7第81頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月82第82頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月83第83頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月84確保非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗質(zhì)量的關(guān)鍵點按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPs）進行操作推薦使用評價特性較好的試劑*按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)報告結(jié)果開展實驗室質(zhì)控（QC）和參加室間能力驗證（PT）*由中國疾病預(yù)防控制中心性病中心國家參比實驗室提供第84頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月85梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗檢測梅毒螺旋體抗原特異性抗體可用于確認非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗的陽性結(jié)果，排除其假陽性。陽性結(jié)果可持續(xù)存在，即使治療后仍可為陽性。*梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗與疾病的活動度無關(guān)，不能用于鑒別現(xiàn)癥感染還是既往感染，也不能用于判斷療效。*一期梅毒治療病人中，15%-25%可在2-3年后轉(zhuǎn)為血清學(xué)陰性第85頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月86TPPA基本原理：用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒，其致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集。第86頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月87操作步驟1.試劑準(zhǔn)備：試驗前將試劑和待檢標(biāo)本恢復(fù)到室溫。

2.加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。3.樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。4.加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。5.混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒。6.反應(yīng)：置有蓋濕盒，孵育2h，或放4℃冰箱過夜觀察結(jié)果。

第87頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月88結(jié)果判斷1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗。2.觀察凝集反應(yīng)強度：分級如下。

4+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊。

3+：顆粒光滑覆蓋大部分孔底。

2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。

1+：

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)。

±：顆粒沉集孔底，中央形成一小點。

一：顆粒緊密沉積孔底中央。第88頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月89第89頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月90RPR與TPPA的關(guān)系RPR(初篩）TPPA(確證試驗）關(guān)系RPR是為TPPA排除是既往感染還是現(xiàn)癥感染；TPPA是為RPR排除是試驗假陽性還是現(xiàn)癥感染；兩者互為現(xiàn)癥梅毒的確認試驗。第90頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月91妊娠期梅毒檢測所有孕產(chǎn)婦應(yīng)進行梅毒篩查檢測：孕期盡早（如果可能，在孕早期時）以及如果在分娩前/臨產(chǎn)時沒有篩查檢測結(jié)果，在分娩時檢測。所有篩查檢測結(jié)果陽性的孕產(chǎn)婦都應(yīng)用另外一類檢測方法進行復(fù)檢確認是否為現(xiàn)癥梅毒所有產(chǎn)婦及所生嬰兒出院前，產(chǎn)婦梅毒檢測結(jié)果都應(yīng)記錄在病歷中，以確保需要時給予治療第91頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月92孕產(chǎn)婦梅毒檢測流程非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗孕產(chǎn)婦治療后，隨訪監(jiān)測非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗每3個月進行非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗如果需要進行治療報告：非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陰性報告：兩種檢測均陽性治療病人報告：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陰性報告：非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陽性梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陰性報告：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陽性非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陰性陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)陰性反應(yīng)陽性反應(yīng)陽性反應(yīng)或第92頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月93第93頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月94HIV感染病人的梅毒血清學(xué)試驗一些HIV感染病人，其梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果不典型，包括：滴度超常高或超常低；滴度不斷變動。如果臨床表現(xiàn)提示早期梅毒，而血清學(xué)試驗結(jié)果與此不一致，考慮：病灶活檢或暗視野顯微鏡檢查注意：對于大多數(shù)HIV感染病人而言，梅毒血清學(xué)試驗是診斷梅毒感染、隨訪觀察療效準(zhǔn)確、可靠的檢測方法第94頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月95梅毒血清學(xué)試驗報告方式如果RPR陽性，要做稀釋滴度。報告：RPR為陽性（如滴度1：32）如TPPA陽性：報告TPPA陽性如ELISA陰性:報告ELISA陽性第95頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月96梅毒血清學(xué)檢測結(jié)果的解釋非梅毒螺旋體試驗梅毒螺旋體試驗臨床參考意義+

-RPR假陽性–考慮其他醫(yī)學(xué)狀況*+

+可能為現(xiàn)癥梅毒-

+①既往感染②極早期梅毒③部分晚期梅毒-

-①排除梅毒感染

②

窗口期

③由于免疫缺陷，也可發(fā)生于艾滋病晚期備注：*包括結(jié)核、瘧疾、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或妊娠。以上診斷標(biāo)準(zhǔn)不適宜診斷胎傳梅毒和神經(jīng)梅毒檢驗結(jié)果要結(jié)合病史、臨床癥狀，才能作出正確診斷第96頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月97梅毒實驗室檢測的特點臨床表現(xiàn)取材部位檢查方法

一期梅毒潰瘍淋巴結(jié)病原學(xué)檢查 血液 血清學(xué)檢查二期梅毒皮損淋巴結(jié) 病原學(xué)檢查 血液 血清學(xué)檢查 潛伏梅毒血液血清學(xué)檢查三期梅毒血液 血清學(xué)檢查神經(jīng)梅毒血液 血清學(xué)檢查腦脊液 細胞、蛋白量檢查、VDRL等第97頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月98二、暴露嬰兒的梅毒檢測第98頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月99梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測

因母體非梅毒螺旋體和梅毒螺旋體IgG抗體可通過胎盤，所以應(yīng)謹慎地對嬰兒梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果進行解釋。嬰兒需要接受預(yù)防性治療還是規(guī)范的抗梅毒治療應(yīng)根據(jù)：母親確診梅毒感染母親治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實驗室檢查或x線檢查結(jié)果母親及嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗滴度水平的比較（盡可能在同一個實驗室使用相同的試驗方法）第99頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月100先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一：任何先天梅毒臨床表現(xiàn)；暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽性（+）；梅毒螺旋體IgM抗體陽性；RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍及以上；RPR/TRUST監(jiān)測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升；滿18月齡后，TPPA檢測陽性。*嬰兒RPR檢測不能使用臍帶血，因其易被母體血液污染，從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。第100頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月101第三部分乙肝實驗室檢測第101頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月102乙肝病原學(xué)乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)是由一個不完全雙鏈DNA組成，約3200個氨基酸。乙型肝炎病毒基因結(jié)構(gòu)可分為四組可編碼蛋白基因。即：

S基因：編碼外膜蛋白。

C基因：編碼核心抗原和e抗原。

P基因：編碼DNA聚合酶。

X基因：編碼X蛋白。

第102頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月103乙肝病原學(xué)

S基因區(qū)可分為三段：前S1區(qū)、前S2區(qū)、和S區(qū)。乙型肝炎病毒為嗜肝DNA病毒，感染對象為肝細胞。HBV的抵抗力較強，但65℃10小時、煮沸10分鐘或高壓蒸氣均可滅活。環(huán)氧乙烷、戊二醛、過氧乙酸和碘伏也有較好的滅活效果。對干燥、紫外線均有耐受性。第103頁，課件共112頁，創(chuàng)作于2023年2月104乙肝傳播途徑血液、體液（唾液、精液、陰道分泌物、乳