分解尿素的細(xì)菌分離與計(jì)算

專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)算課時(shí)重難點(diǎn)【重點(diǎn)】對(duì)土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制。【難點(diǎn)】對(duì)分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)。典型例題：1．下列關(guān)于分解尿素的細(xì)菌，說法正確的是（）A．以尿素作為唯一碳源B．能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C．環(huán)境中含有大量的尿素誘導(dǎo)該細(xì)菌產(chǎn)生了分解尿素的特性D．以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細(xì)菌后不會(huì)使酚紅指示劑變紅2．原油含有大量致癌的“多環(huán)芳烴”，分子結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，有些細(xì)菌可以利用原油中的多環(huán)芳烴為碳源，在培養(yǎng)基中形成分解圈。某小組以如何篩選出能降解原油的菌株并投入除污為課題設(shè)計(jì)了有關(guān)實(shí)驗(yàn)。有關(guān)說法正確的是A．用于篩選目的菌株的培養(yǎng)基其主要特點(diǎn)是以原油（多環(huán)芳烴）為唯一碳源B．培養(yǎng)基配制完成之后需進(jìn)行消毒處理C．在選擇培養(yǎng)基上形成的菌落，即為能分解多環(huán)芳烴的目的菌種D．篩選出目的菌種后，可用平板劃線法在培養(yǎng)基上進(jìn)行接種和計(jì)數(shù)3．關(guān)于生物技術(shù)實(shí)踐中的有關(guān)檢驗(yàn)，不正確的是（）A．在果酒制作實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)要檢驗(yàn)是否有酒精產(chǎn)生，正確的操作步驟是先在試管中加入適量的發(fā)酵液，然后再加入硫酸和重鉻酸鉀的混合液B．在微生物培養(yǎng)中，檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否被污染的方法是用一組不接種或接種無菌水的培養(yǎng)基與接種培養(yǎng)物的培養(yǎng)基一起培養(yǎng)C．檢驗(yàn)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)是否分離出了分解尿素的細(xì)菌，方法是在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，則說明分離成功D．檢驗(yàn)胡蘿卜素純度的方法是紙層析法，原理是不同的色素分子在層析液中的溶解度不同，故隨層析液在濾紙上擴(kuò)散的速度不同，若樣品中有雜質(zhì)，則會(huì)出現(xiàn)不同的色素點(diǎn)（帶）4．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制選擇培養(yǎng)基時(shí)（）A．葡萄糖在培養(yǎng)基中越多越好B．尿素分解菌有固氮能力，故培養(yǎng)基中只需無機(jī)氮C．尿素在培養(yǎng)基中越少越好D．尿素分解菌無固氮能力，故培養(yǎng)基中的尿素為化合態(tài)氮5．下列生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作，能夠順利達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡氖茿．將果泥和果膠酶分裝在不同試管中恒溫處理后再混合，以探究果膠酶的最適溫度B．洗滌紅細(xì)胞時(shí)，需要加入五倍體積的蒸餾水C．土壤浸出液接種于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上以篩選出能分解尿素的細(xì)菌D．根據(jù)SDS—凝膠電泳的結(jié)果可判斷蛋白質(zhì)的分子量大小6．下列有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐的敘述，不正確的是A．制作果醋時(shí)應(yīng)不斷通入無菌空氣B．在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)采用平板劃線法C．通過比色法來檢測(cè)亞硝酸鹽含量需要制備標(biāo)準(zhǔn)顯色液D．饑餓時(shí)，胰高血糖素分泌量上升，促進(jìn)肝糖原和肌糖原分解7．下列是以酵母菌為材料進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚藍(lán)檢測(cè)產(chǎn)生的CO2B．用酵母菌發(fā)酵釀制果酒，選擇酸性重鉻酸鉀檢測(cè)產(chǎn)生的酒精C．探究酵母菌種群數(shù)量變化，應(yīng)設(shè)空白對(duì)照排除無關(guān)變量干擾D．用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計(jì)數(shù)，應(yīng)選擇有30～300菌落數(shù)的平板8．【生物—選修1：生物技術(shù)實(shí)踐】有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。（2）純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即和。（3）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力。（4）通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、和。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。9．人和哺乳動(dòng)物的尿中含有尿素，大量尿素的存在會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源。現(xiàn)對(duì)土壤中的這類細(xì)菌進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答下列問題：（1）分離培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)必須進(jìn)行無菌操作，包括培養(yǎng)基和各種器皿都必須是無菌的，培養(yǎng)基常用的滅菌方法有。（2）將樣液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)。在稀釋土壤溶液的過程每一步都要在〖思考1〗在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是，提供氮源的的是，瓊脂的作用是。〖思考2〗該培養(yǎng)基對(duì)微生物（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是。3．在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是。除此之外，也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。【補(bǔ)充】顯微鏡直接計(jì)數(shù)是測(cè)定微生物的方法。公式：觀察到的紅細(xì)胞平均數(shù)∶觀察到的細(xì)菌平均數(shù)＝紅細(xì)胞含量∶細(xì)菌含量4．采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于。通過統(tǒng)計(jì)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)?！妓伎?〗從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是?！妓伎?〗利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是?！妓伎?〗第位同學(xué)的結(jié)果接近真實(shí)值。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)的操作是。5．統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，平板上觀察到的只是菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用來表示。6．設(shè)置對(duì)照的主要目的是。7．對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了的條件外，其他條件都的實(shí)驗(yàn)。滿足該條件的稱為組，未滿足該條件的稱為組。（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的內(nèi)容包括、、和等。2．根據(jù)圖示2－7填寫以下實(shí)驗(yàn)流程：菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)配制土壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)3．土壤微生物主要分布在距地表cm的近中性土壤中，約為細(xì)菌。4．分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是，其目的是保證獲得的平板。細(xì)菌稀釋度為，放線菌稀釋度為，真菌稀釋度為。5．培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌一般在℃培養(yǎng)1～2d，放線菌一般在℃培養(yǎng)5～7d，霉菌一般在℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。6．在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。點(diǎn)評(píng)：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養(yǎng)時(shí)間要充足，使得每個(gè)菌體都能形成肉眼可觀察到的菌落。7．菌落的特征包括等方面?！妓伎?〗土壤微生物種類最多、數(shù)量最大的原因是什么？8．實(shí)驗(yàn)過程(1)取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。(2)應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。將稱好的土樣倒入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。(3)在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。(5)為了提高效率，在操作時(shí)更加有條不紊，應(yīng)當(dāng)事先規(guī)劃時(shí)間。（三）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1．對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助的方法。2．在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的將尿素分解成了。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性，PH。因此，我們可以通過檢測(cè)培養(yǎng)基變化來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。3．在以