抗精子抗體（ASAB）檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

抗精子抗體(ASAB)檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號:XXX生效日期：共頁第頁1.目的規(guī)范檢測抗精子抗體(ASAB)的流程，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。2.原理2．1·間接免疫熒光法：將稀釋患者樣本與載片反應(yīng)區(qū)中生物薄片上的精子涂片反應(yīng)。如果樣本是陽性的，特異性IgA、IgG和IgM抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與熒光素標(biāo)記的抗人抗體反應(yīng)，然后在熒光顯微鏡下觀察特異性熒光模型。2．2·酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)：以特異性精子可溶性膜抗原包被反應(yīng)板微孔，待測血清中如存在ASAB可與之結(jié)合，再加入酶標(biāo)記抗人IgG抗體和酶底物／色原溶液，出現(xiàn)呈色反應(yīng)。呈色強(qiáng)度可反映ASAB水平。3.標(biāo)本要求3．2·樣品收到后立即分離血清，不能及時(shí)測定的血清應(yīng)于2~8℃保存。4.試劑與儀器性和陽性對照，熒光顯微鏡。5.操作步驟ml (PBS)吐溫緩沖液；待測血清樣本用PBS吐溫緩沖液按說明書稀釋。5．1．2加樣：將加樣板放在泡沫板上，將25μl稀釋后的血清樣本加至加樣板的每一反應(yīng)區(qū)上，應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。5．1．3溫育：將生物載片有生物薄片的一面朝下，蓋在加樣板的凹槽里，室溫(18~PBS泡至少5min。5．1．5加樣：將20μlFITC標(biāo)記的抗人IgG(熒光二抗)加至潔凈加樣板的反應(yīng)區(qū)上。：從洗杯中取出生物載片，用吸水紙擦去背面和邊緣的水分后，立即蓋在加樣板的凹槽里，室溫(18~25℃)溫育30min。玻片直接放在泡沫板的凹槽里。滴加封片介質(zhì)至蓋玻片，每一反應(yīng)區(qū)約10μl。從洗杯中取出一張生物載片，用吸水紙擦干背面和邊緣的水分。將生物載片有生物薄片的一面朝下放在已準(zhǔn)備好的蓋玻片上。。5．2．2將待測血清按樣本稀釋液(500＋25)μl稀釋，再把稀釋后的樣本、陰性與陽性對照加至相應(yīng)孔中，每孔100μl。37℃40min。洗3次，在吸水紙上拍干。n標(biāo)儀適當(dāng)波長測吸光度值。6.校準(zhǔn)定期對加樣槍、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀進(jìn)行保養(yǎng)和校準(zhǔn)。關(guān)鍵部件更換或者維修后也需校準(zhǔn)。7.質(zhì)控在控規(guī)則：陰性質(zhì)控物必須陰性，陽性質(zhì)控物結(jié)果在上下1個(gè)滴度(稀釋度)內(nèi)。規(guī)則質(zhì)控分析法判斷在控或失控。8.結(jié)果判斷·間接免疫熒光法：熒光模型(陽性反應(yīng))：ASAB可與精子的各個(gè)部位結(jié)合，最常見的結(jié)合部位在精子的尾部，但在精子的頭部和中間部位也可出現(xiàn)陽性反應(yīng)。視野中所有精子都出現(xiàn)清晰可見的陽性反應(yīng)，才能判為陽性，熒光模型與陽性對照必須基本一致。9.生物參考區(qū)間健康人血清或血漿中ASAB為陰性。10.性能參數(shù)性血清的結(jié)果特異性熒光強(qiáng)度基本一致，陰性血清結(jié)果為陰性。10．1．3批間差異：用2份特征性血清對不同批號的產(chǎn)品進(jìn)行檢測，陽性血清的結(jié)果特異性熒光強(qiáng)度基本一致，陰性血清結(jié)果為陰性。為陰性和陽性。11.臨床意義在免疫性不孕不育時(shí)，可在精液、宮頸液和血清中檢出ASAB。在輸精管切除術(shù)后或泌尿生殖感染時(shí)，ASAB也可出現(xiàn)陽性。在不孕時(shí)，男性和女性中均可出現(xiàn)抗精子抗體，在不孕的男性中，ASAB