樣品的采集與管理

樣品的采集與管理第1頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月依據(jù)《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS293-2008《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細(xì)胞檢測質(zhì)量保證指南（試行）》（中國疾病預(yù)防控制中心，2006年2月）《HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南（試行）》（中國疾病預(yù)防控制中心，2008年2月）《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》，衛(wèi)生部第45號令2006年2月1日《病原微生物實驗室生物安全管理條例》中華人民共和國國務(wù)院令（第424號）2004年《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》2009年修訂版第2頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范4.1.1樣品的編碼和記錄4.1.2應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼（編號），保證其唯一性。第一章樣品的采集和處理樣本第3頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品種類及相應(yīng)的用途1、全血、血清、血漿、唾液、尿液以及DBS樣品可用于HIV抗體檢測。2、抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測定。3、血漿可用于HIV-1病毒載量、基因型及耐藥檢測。DBS樣品可用于HIV-1基因型及耐藥檢測。4、全血、血漿、淋巴細(xì)胞富集液、外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）及DBS樣品可用于HIV核酸的定性檢測。5、PBMC、全血、淋巴細(xì)胞富集液等可用于HIV-1分離培養(yǎng)。第4頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月要求1、如何采集合格的血樣？2、用什么容器收集血樣？3、采用何種方式運(yùn)輸？4、運(yùn)輸容器要求？5、如何儲存？第5頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月安排實驗采集血樣將樣品運(yùn)輸?shù)綄嶒炇以趯嶒炇医邮諛悠分苽湓囼炗脴悠穼悠愤\(yùn)輸?shù)介_展實驗的地點分析前期的透視圖樣本第6頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月這有關(guān)系嗎？70-85%的臨床決策均以實驗室檢驗結(jié)果為依據(jù)欠佳的實驗室流程會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性不準(zhǔn)確的檢驗結(jié)果會影響衛(wèi)生機(jī)構(gòu)為患者提供最佳臨床療效的能力實驗室誤差會對患者、臨床醫(yī)生、實驗室

和您的衛(wèi)生保健體系造成影響樣本第7頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣本采集前準(zhǔn)備物品第8頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月操作程序（采集血液樣品)1.

辨認(rèn)靜脈血管：a)

使用非扎針采血的手的食指b)

用“按壓－釋放”的動作分辨血管或結(jié)締組織c)

確定柔軟而有彈性的靜脈血管的位置2.

觸摸檢查靜脈血管：a)

同樣使用非扎針采血的兩根手指，一般用食指和中指b)

從不同側(cè)面觸摸檢查靜脈血管c)

估定血管滑動的程度3.

消毒皮膚：a)

用70%乙醇擦拭皮膚b)

讓皮膚在空氣中干燥4.

取組合器械：a)

戴上兩只新手套b)

用拇指、食指和中指握住針頭固定器的上部c)

用無名指和小指拿住采血管d)

握住針頭固定器，保持水平狀態(tài)e)

針頭的斜面必須向上5.牽拉皮膚：a)用拇指緊緊地向下拉皮膚以固定血管。b)拇指應(yīng)該放置在扎針部位下方1～3英寸處。c)緊緊地向下拉皮膚可以把血管固定在適當(dāng)?shù)牟课弧?.

把針頭插入血管并采血7.

血液采集：當(dāng)血液采集到相應(yīng)的血液采集管（一支或多支）中后：a)

從針頭上取下血液采集管b)

把干棉球放到采血的穿刺部位c)

從皮膚中抽出針頭d)

緊緊地壓住采血的穿刺部位e)

輕輕的搖動血液采集管f)

把已污染的針頭扔到銳器容納器中g(shù))

摘除并扔掉手套h)

在研究對象面前標(biāo)記血液采集管i)

標(biāo)記實驗室采樣表格j)

洗手第9頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月采集病原微生物樣本應(yīng)當(dāng)具備下列條件

(一)具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護(hù)水平相適應(yīng)的設(shè)備；(二)具有掌握相關(guān)專業(yè)知識和操作技能的工作人員(三)具有有效的防止病原微生物擴(kuò)散和感染的措施(四)具有保證病原微生物樣本質(zhì)量的技術(shù)方法和手段。(五)采集高致病性病原微生物樣本的工作人員在采集過程中應(yīng)當(dāng)防止病原微生物擴(kuò)散和感染，并對樣本的來源、采集過程和方法等作詳細(xì)記錄?！恫≡⑸飳嶒炇疑锇踩芾項l例》第10頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月靜脈血的采集第11頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月抽血過程中注意事項①避免溶血。器皿不清潔，不干燥；凝血時間長；損傷組織過多；抽血太快；注血時未取下針頭或產(chǎn)生大量氣泡；過分振蕩；離心速度過高均可導(dǎo)致。②抽血前應(yīng)檢查針頭是否鋒利或帶鉤，是否接牢，有無阻塞和漏氣。③抽血時進(jìn)針不要過深，以免造成皮下血腫。④抽血時，只能外抽不能內(nèi)推，以免形成氣栓，造成嚴(yán)重后果。⑤采血后發(fā)生眩暈，可讓其平臥休息片刻即可恢復(fù)，也可拇指掐人中和合谷穴。⑥吸取血清時必須用一次性吸管，否則易發(fā)生交叉污染。⑦用于HIV抗體篩查和確認(rèn)試驗送檢的血清量以１～2ml為宜，最低不應(yīng)少于100ul，否則無法進(jìn)行正常檢測。第12頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月采集樣本的注意事項保障工作人員、病人和環(huán)境的安全保證樣品的質(zhì)量（避免溶血、及時分離血清、合理的存放）樣本的正確標(biāo)示（編號與登記表一致）職業(yè)暴露的預(yù)防第13頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月針頭處理針頭收集器正確的取針頭方式第14頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月錯誤的取針頭方式第15頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月血液標(biāo)本采集過程中的注意事項:止血帶結(jié)扎過久

靜脈持續(xù)高壓1分鐘：開始升高3-5分鐘：升高5%10-15分鐘：升高15%總蛋白、膽固醇、鐵濃度升高也可使纖維蛋白溶解活性增強(qiáng)，而影響凝血指標(biāo)的結(jié)果樣本第16頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月壓力增加引起的血流阻塞水及小分子從毛細(xì)管壁滲出蛋白，酶等大分子濃度錯誤升高樣本第17頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月抽血時病人攥拳的影響肌肉組織是代謝最活躍的組織，病人握拳加速鉀從細(xì)胞溢出的速率握拳一分鐘，血清鉀濃度增加1～1.5毫摩爾/升，可由正常的血清鉀濃度（如4.0毫摩爾/升）升高到5.5毫摩爾/升為高鉀血癥。樣本第18頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月最好使血液達(dá)到試管的填充線處確保保持正確的血液:抗凝劑比例+/-10%填充量的差異是可接受的1完成試管填充樣本第19頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月抗凝劑對實驗結(jié)果的影響當(dāng)血液與EDTA-Na2抗凝劑的比例為1∶4以上時不影響,當(dāng)血液與EDTA-Na2抗凝劑的比例不恰當(dāng)時對抗-HIVELISA實驗結(jié)果影響頗大.提示EDTA-Na2抗凝劑可促使OD值讀數(shù)升高,其中可能原因是抗凝劑中的枸櫞酸鈉或EDTA-Na2與酶結(jié)合物的Fe絡(luò)合的結(jié)果樣本第20頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月抗凝劑對實驗結(jié)果的影響抗凝劑又與纖維蛋白中的Ca結(jié)合,這樣導(dǎo)致結(jié)合的大分子(酶-Fe-抗凝劑-Ca+-纖維蛋白)與微板結(jié)合力增強(qiáng),導(dǎo)致檢測OD數(shù)值升高當(dāng)EDTA濃度達(dá)2.5毫克/毫升，嗜中性粒細(xì)胞腫脹，核分葉溶解，影響細(xì)胞的分析；血小板腫脹、崩解、產(chǎn)生正常血小板大小的碎片，使血小板計數(shù)假性升高。建議盡量不用肝素抗凝劑樣本第21頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月血液凝固原因①血流不暢，造成血液在血管內(nèi)或注射器內(nèi)凝固②抗凝劑量不夠或失效，血液和抗凝劑比例要適宜③血樣和抗凝劑沒有完全混合好（尤其是固體抗凝劑），或工作人員工作失誤忘記混合，應(yīng)緩慢顛倒混合幾次，不可用力震蕩④止血帶使用時間過長，加速凝血因子凝固活性。樣本第22頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月某醫(yī)院樣本常見錯誤（n=350樣本/天）溶血：2%血量不足：10%錯貼標(biāo)簽：2%試管不適當(dāng)2%樣品凝固：6%運(yùn)輸延遲：10%樣品遺失：2%醫(yī)囑錄錄入不當(dāng)11%缺少請求：2%樣本制備不當(dāng)：4%樣本錯誤的樣本導(dǎo)致錯誤的結(jié)果！第23頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月案例某病人血糖檢測結(jié)果：

10mg/dl(0.56mmol/L),醫(yī)生投訴，病人生命正常，沒有昏迷，檢驗科做錯了。措施：從新采樣-檢測-血糖正常原因：標(biāo)本前1天采集，第2天送檢解決方案：添加采樣時間、接收時間；添加氟化鈉、草酸鉀-抑制糖酵解第24頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月應(yīng)用單位可采取的編碼原則

及編碼順序

例如:有些單位還可以有樣品編號規(guī)則：（1）年月+科室編號+組別編號+流水號；（2）固定字符+科室編號+組別編號+流水號；（3）年+科室編號+組別編號+流水號；（4）樣品類別+年+月+日+流水號；（5）年月日+樣品條形碼+流水號；等等?？偨Y(jié):一個編號可以由5個部分組成：固定字段、獨(dú)立可變字段、受控固定字段、受控可變字段、順序碼字段五類。第25頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月唯一性編碼“P20030609A2P1001”，“P”代表樣品類型“2003”代表年份“0609”代表日期“A”表示輪換位置“2”：表示類型“P1”代表樣品采集地點“001”序列號。樣本第26頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月省疾控采用的唯一性編碼樣品號：2008A02500011、2008-年代標(biāo)示2、A樣本狀態(tài)標(biāo)示3、025檢測項目編號4、0001樣品序列號

----要有技術(shù)文件規(guī)范支持唯一性編號??！樣本第27頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣本第28頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月選擇合適的容器樣本條碼機(jī)第29頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣本第30頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月實現(xiàn)病人安全目標(biāo):

必須要做的?

更應(yīng)該做好!

這不是一根管子的問題，面對的是對病患的責(zé)任！Specimen

樣本第31頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月例：第一次HIV抗體檢測結(jié)果2002年5月23日ELISA快速法WB何××，大學(xué)生，男22歲（+）（+）gp160,gp120,p66,p51,gp41,p24,p17曹××，教師，男40歲（+）（+）gp160,gp120(±）p66(±),p51(±),p24魏××，中專生，女18歲（+）（+）gp160(±),p24,p17(±)樣本第32頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月

第2次HIV抗體檢測結(jié)果2002年5月26日ELISA快速法WB診斷何××（+）（+）gp160,gp120,p66,p51,gp41,p24,p17抗HIV-1（+）曹××（-）（-）抗HIV（-）魏××（-）（-）抗HIV（-）樣本第33頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月送檢單的要求（1）2人填寫（2）項目填全（3）微機(jī)打?。?）格式要統(tǒng)一第34頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月送檢單第35頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月送檢單常見問題1、手寫不清晰9、標(biāo)示一致2、空項太多3、鄉(xiāng)、鎮(zhèn)、村分不清4、未蓋章5、未填聯(lián)系方式6、未填第幾次送檢（2次應(yīng)注明確證單位和時間）7、接收單位填錯8、樣本與送檢單混放第36頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的運(yùn)送1、應(yīng)符合生物安全要求；要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送。2、應(yīng)采用三層容器對樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。第37頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的運(yùn)送3、第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。4、第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第38頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月5、第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”等字樣，還應(yīng)易于消毒。6、用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送。用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測定的樣品應(yīng)在室溫下（18～25℃）或4℃（特殊要求時）運(yùn)送。用于病毒載量檢測的樣品應(yīng)在-20℃以下運(yùn)輸。DBS樣品應(yīng)在室溫下（18～25℃）運(yùn)送。每一件包裝的體積以不超過50mL為宜。樣品的運(yùn)送第39頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月7、運(yùn)送樣品必須有記錄。

8、特殊情況下經(jīng)有關(guān)部門批準(zhǔn)可以用特快專遞郵寄樣品，但必須按三層包裝，將樣品管包扎好，嚴(yán)禁使用玻璃容器。樣品的運(yùn)送第40頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣本的包裝第41頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月送檢單應(yīng)與樣品分開放置第42頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的運(yùn)送中華人民共和國衛(wèi)生部令第45號《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》已于2005年11月24日經(jīng)衛(wèi)生部部務(wù)會議討論通過，現(xiàn)予以發(fā)布，自2006年2月1日起施行。部長高強(qiáng)二○○五年十二月二十八日第43頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸包裝標(biāo)識1.高致病性病原微生物危險標(biāo)簽

高致病性病原微生物制冷劑：

請勿自行打開如有破損、滲漏或遺失請立即通知當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門聯(lián)系人：聯(lián)系電話：2.高致病性病原微生物運(yùn)輸?shù)怯洷?/p>

3.外包裝放置方向標(biāo)識

第44頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月安全運(yùn)送：無損壞，不傾倒，無泄漏。及時運(yùn)送：按時送到，不失時效必要條件：保證適宜溫度，不受污染，無失誤：無地址人名不清，造成錯送或延誤。

感染性樣本的運(yùn)輸要求第45頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月CD4淋巴細(xì)胞檢測樣本一定要常溫送檢！注意第46頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的接收1、樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實驗室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣、戴口罩、防護(hù)眼鏡的工作人員在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時進(jìn)行消毒。2、核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告實驗室負(fù)責(zé)人和上一級實驗室技術(shù)人員。第47頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的接收3、檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如果污染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受，應(yīng)將樣品安全廢棄。并將樣品情況立即通知送樣人。4、接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。5、不合格樣本可拒收。第48頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月接收樣本的設(shè)備第49頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月個人防護(hù)第50頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月1.手套的選擇：生物安全實驗室一般使用乳膠橡膠或聚腈類或聚氯乙烯手套用于對強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑和生物危害物質(zhì)的防護(hù)

2.手套的檢查：在使用手套前應(yīng)該檢查手套是否退色、穿孔（漏損）或有裂縫?？梢酝ㄟ^充氣試驗，將其浸入水中觀察是否有汽泡來檢查手套的質(zhì)量乳膠手套

聚脂手套

實驗室防護(hù)用品手套第51頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月一次性帽子、口罩等

a、安全鏡b、安全護(hù)目鏡警告：不得戴眼鏡防護(hù)裝備離開實驗室區(qū)域！第52頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月接收的樣品

（1）核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家。（2）檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如果污染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即通知送樣人。受理樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。（3）不合格樣本可拒收。第53頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的管理保證病人、工作人員安全保證樣本安全保證周圍環(huán)境安全按照規(guī)定要求運(yùn)輸樣本溯源樣本第54頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣本的保存分離血清即時檢測的樣品（1-2天內(nèi)），可存放于2-8℃冰箱，最長時間一周。如需長期保存，應(yīng)將分離的血清或血漿存放于-20℃冰箱內(nèi)。選擇合適的凍存管。第55頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的管理做好登記分離血清即時檢測的樣品（1-2天內(nèi)），可存放于2-8℃冰箱，最長時間一周。如需長期保存，應(yīng)將分離的血清或血漿存放于-20℃冰箱內(nèi)。選擇合適的凍存管。標(biāo)示一定要清晰編號一定要規(guī)范，唯一性編號！！艾滋病篩查實驗室不能保存陽性血清第56頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月第57頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的保存1、用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于2～8℃，一周以上應(yīng)存放于-20℃以下。2、用于核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于4℃，3個月以內(nèi)應(yīng)存放于-20℃以下。3個月以上應(yīng)置于-70℃以下。第58頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品的保存3、艾滋病檢測篩查實驗室檢測的篩查陽性樣品應(yīng)及時送確證實驗室，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存1～2個月。特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。4、艾滋病檢測確證實驗室收到的篩查陽性樣品，無論確證結(jié)果如何，均應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年，特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。第59頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月國家參比室保存樣本第60頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月唾液樣本

使用試劑盒提供的容器收集唾液樣品。存放時間和是否凍存以試劑盒說明書為準(zhǔn)。用一次性采樣環(huán)收集約5μl血樣用采樣盤沿上/下牙床外表面采樣一周

將樣本轉(zhuǎn)入小瓶中攪動第61頁，課件共66頁，創(chuàng)作于2023年2月