艾滋病檢測(cè)方法及規(guī)范操作

HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)操作中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)中心艾滋病檢測(cè)的方法HIV抗體檢測(cè)HIV抗體初篩檢測(cè)HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)〔免疫印跡試驗(yàn)〕HIV核酸檢測(cè)?核酸序列依賴(lài)性擴(kuò)增〔NASBA〕?HIV定量逆轉(zhuǎn)錄PCR系統(tǒng)〔RT－PCR〕?HIVRNA定量檢測(cè)的分支測(cè)定法〔bDNA)艾滋病檢測(cè)方法的意義HIV抗體檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)?間接法?直接法〔雙抗原夾心法〕?抗體競(jìng)爭(zhēng)法明膠顆粒凝集試驗(yàn)〔PA〕快速法HIV/AIDS的篩查，但初篩陽(yáng)性結(jié)果不能做為艾滋病診斷依據(jù)，需將該標(biāo)本送地區(qū)篩查中心實(shí)驗(yàn)室用兩種方法進(jìn)行復(fù)核，仍為陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)那么須送省確認(rèn)中心。

艾滋病檢測(cè)方法的意義HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)〔免疫印跡試驗(yàn)〕HIV/AIDS診斷的唯一依據(jù),省CDC確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)全省監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)以及常規(guī)檢測(cè)中陽(yáng)性及可疑標(biāo)本確實(shí)認(rèn)和省內(nèi)HIV初篩實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理.另外,省檢疫系統(tǒng)有一個(gè)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室,設(shè)在省檢疫局保健中心.艾滋病檢測(cè)方法的意義HIV核酸檢測(cè)?輔助診斷：在特殊情況下，如出現(xiàn)某些非典型的抗體反響，特別是不確定反響時(shí)，RNA的測(cè)定可提供有用的證據(jù)。?感染早期：在HIV感染的窗口期，無(wú)法使用抗體檢測(cè)進(jìn)行診斷，此時(shí)RNA的測(cè)定具有特殊的意義，提示是否有感染的可能，但仍需追蹤檢測(cè)HIV抗體，最終根據(jù)抗體的檢測(cè)情況做出診斷。?病程監(jiān)控：幫助確定疾病開(kāi)展的階段。?指導(dǎo)治療方案及療效測(cè)定?預(yù)測(cè)疾病進(jìn)程國(guó)家對(duì)HIV抗體檢測(cè)試劑的要求◆初篩試劑

篩查試劑必須是HIV1+2混合型的、經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢合格、臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑?！舸_認(rèn)試劑

必須經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)。我國(guó)常用的HIV抗體檢測(cè)試劑?HIV抗體篩查試劑?酶聯(lián)免疫：初篩實(shí)驗(yàn)室的常用根本試劑。?明膠顆粒凝集?其它快速診斷試劑：在尚未建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的偏遠(yuǎn)地區(qū)由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的技術(shù)人員在規(guī)定的場(chǎng)所使用。?HIV抗體確認(rèn)試劑?免疫印跡試劑快速檢測(cè)試劑的優(yōu)缺點(diǎn)硒標(biāo)記法和金標(biāo)記法與ELISA相比?優(yōu)點(diǎn)所需時(shí)間短操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備。試劑貯存于室溫。?缺點(diǎn)特異性和敏感性與ELISA有差距。費(fèi)用較高。HIV抗體檢測(cè)程序及流程圖1、篩查試驗(yàn)標(biāo)本驗(yàn)收合格后，用篩查試劑進(jìn)行檢測(cè)，如呈陰性反響，報(bào)告為HIV抗體陰性；對(duì)呈陽(yáng)性反響的標(biāo)本須進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。2、重復(fù)檢測(cè)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠(chǎng)家的試劑重復(fù)檢測(cè)，如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反響，那么報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽(yáng)性反響，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。3、篩查試驗(yàn)的流程圖樣品篩查檢測(cè)篩查試劑陽(yáng)性反響重復(fù)檢測(cè)均陽(yáng)性反響一陰一陽(yáng)送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)均陰性反響陰性報(bào)告陰性反響原有試劑加另一種篩查試劑HIV抗體篩查結(jié)果的報(bào)告和處理?篩查試驗(yàn)呈陰性反響，出具HIV抗體陰性報(bào)告〔提示應(yīng)考慮窗口期的可能〕。?篩查試驗(yàn)呈陽(yáng)性反響，可出具“HIV待復(fù)查〞報(bào)告，不能出陽(yáng)性報(bào)告。同時(shí)盡快進(jìn)行以下處理：?填寫(xiě)HIV陽(yáng)性標(biāo)本送檢單，并隨標(biāo)本送至當(dāng)?shù)睾Y查中心實(shí)驗(yàn)室，或直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。?篩查中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡快用兩種試劑進(jìn)行復(fù)測(cè)，如結(jié)果均陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)，那么應(yīng)將該標(biāo)本和送檢單一并送至省艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。?陽(yáng)性標(biāo)本必須送省確認(rèn)中心，篩查實(shí)驗(yàn)室不能隨意處理。?做好檢測(cè)后的咨詢(xún)結(jié)果的解釋問(wèn)題:HIV抗體檢測(cè)結(jié)果陰性是否說(shuō)明未感染?對(duì)不確定結(jié)果如何解釋?怎么樣知道嬰兒是否感染了HIV?HIV抗體初篩檢測(cè)結(jié)果解釋陰性(1)未感染HIV(2)可能感染了HIV,但處于窗口期,或HIV-1/2抗體和HIV-1O亞型抗體低于檢測(cè)下限。(3)疾病晚期,免疫功能缺損,抗體可能呈陰性.確認(rèn)陽(yáng)性感染了HIV,樣品含有HIV-1/2抗體和HIV-1O亞型抗體(未滿(mǎn)18個(gè)月的嬰兒除外).不確定:建議追蹤檢測(cè).HIV抗體初篩檢測(cè)結(jié)果解釋什么是不確定結(jié)果？HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)時(shí),試驗(yàn)條帶上出現(xiàn)的蛋白帶型缺乏以判斷為HIV抗體陽(yáng)性,應(yīng)建議其3個(gè)月后復(fù)查.?如果復(fù)查結(jié)果陽(yáng)轉(zhuǎn),說(shuō)明受檢者已感染HIV;?如復(fù)查時(shí)條帶全部消失,那么為陰性結(jié)果;?如復(fù)查時(shí)條帶沒(méi)有變化或有變化但仍缺乏以判斷為陽(yáng)性,那么應(yīng)建議其3個(gè)月后再?gòu)?fù)查一次,如還不能判斷為陽(yáng)性結(jié)果,那么應(yīng)作為陰性對(duì)待.HIV抗體初篩檢測(cè)結(jié)果解釋造成檢測(cè)結(jié)果不確定的原因(1)處于窗口期,血清中還沒(méi)有形成典型的HIV抗體。(2)艾滋病進(jìn)展到終末期,人體免疫力缺陷,抗體水平下降。(3)與其他非病毒蛋白抗體有交叉反響.自身免疫性疾病、惡性腫瘤、懷孕、輸血或器官移殖等，此時(shí)，身體產(chǎn)生的一些抗體與Ｐ２４核心蛋白抗體相似。(4)以前接種過(guò)HIV疫苗。HIV抗體初篩檢測(cè)結(jié)果解釋如何判斷嬰兒是否感染了HIV？通過(guò)胎盤(pán)，感染了HIV的母親所生的嬰兒可能帶有來(lái)自母體的HIV抗體，此時(shí)HIV抗體檢測(cè)陽(yáng)性并不意味著已被感染。?建議在嬰兒9個(gè)月時(shí)進(jìn)行HIV初篩檢測(cè)如陰性，那么判定為未感染HIV。如陽(yáng)性，那么應(yīng)在嬰兒18個(gè)月時(shí)進(jìn)行復(fù)檢陰性：判定為未感染。陽(yáng)性：那么將血樣送至省CDC確認(rèn)中心進(jìn)行HIV抗體確實(shí)認(rèn)試驗(yàn)。HIV抗體初篩檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)〔enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA〕ELISA法中有間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。目前使用最多的是夾心法。

HIV抗體初篩檢測(cè)〔ELISA實(shí)驗(yàn)原理〕酶球〔酶標(biāo)記抗原〕抗體HIV抗體初篩檢測(cè)

ELISA夾心法

原理將HIV抗原包被到固相載體上，標(biāo)本中的HIV抗體與包被的HIV抗原結(jié)合形成復(fù)合物，利用抗體的多價(jià)性，又與酶〔HRP〕標(biāo)記的同類(lèi)HIV抗原也即酶標(biāo)板內(nèi)的球狀復(fù)合物，形成一個(gè)HIV抗原抗體酶標(biāo)記的HIV抗原復(fù)合物，最后參加底物，避光30分鐘，在酶作用下，產(chǎn)生顯色反響，加2N硫酸終止后呈黃色，在450/620nm雙波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，以判定標(biāo)本的結(jié)果。HIV抗體初篩檢測(cè)

材料標(biāo)本，試劑盒，酶標(biāo)儀和洗板機(jī)，其它試驗(yàn)根本材料。方法以荷蘭阿克蘇試劑盒為例⑴實(shí)驗(yàn)前試劑應(yīng)在室溫下放置30分鐘，使用后試劑放回2~8℃⑵配制洗液1×25洗液用蒸餾水1：25稀釋。稀釋后可在2~8℃穩(wěn)定2周。⑶TMB與尿過(guò)氧化物溶液等量混合準(zhǔn)備成TMB底物。因其穩(wěn)定性有限，所以應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。配制后的TMB底物為無(wú)色，在避光下可以穩(wěn)定6個(gè)小時(shí)。HIV抗體初篩檢測(cè)〔阿克蘇ELISA〕⑷每孔參加100ul血清稀釋液，注意不準(zhǔn)碰到孔內(nèi)的酶球。⑸在所確定的孔中參加50ul血清標(biāo)本或?qū)φ?；設(shè)3孔陰性、1孔HIV-1陽(yáng)性、1孔HIV-2陽(yáng)性對(duì)照。⑹混勻，蓋上貼膜放入37℃環(huán)境孵育1小時(shí)。孵育結(jié)束前5分鐘，準(zhǔn)備充足的TMB底物液。⑺撕去貼膜，用新配制洗滌液洗板〔洗板次數(shù)根據(jù)試劑盒要求〕。吸干，每孔參加100ulTMB底物液。⑻置室溫〔18~25℃〕閉光孵育30分鐘。⑼每孔參加100ul2N硫酸終止反響。⑽在450nm〔單波長(zhǎng)〕或450/620nm〔雙波長(zhǎng)〕讀取光密度值〔OD值〕〔應(yīng)在終止反響2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行讀數(shù)〕。HIV抗體初篩檢測(cè)〔阿克蘇ELISA〕結(jié)果判定⑴陰性對(duì)照〔NegativeControl,，NC〕的參考標(biāo)準(zhǔn)NC必須＜0.250，去除≥0.250的各孔；計(jì)算剩余NC的平均值〔NCx〕0.6NCx＜NC＜1.4NCX,如果有一個(gè)以上超出此范圍，去除后重新計(jì)算NCx。⑵判定實(shí)驗(yàn)有效性：至少有2個(gè)陰性對(duì)照OD值有效。PC1-NCx≥0.400〔PC1：HIV-1抗體陽(yáng)性對(duì)照值〕PC2-NCx≥0.400〔PC2：HIV-2抗體陽(yáng)性對(duì)照值〕HIV抗體初篩檢測(cè)〔阿克蘇ELISA〕⑶臨界值〔Cutoff〕如果實(shí)驗(yàn)有效，按照公式計(jì)算界限值：Cutoff=NCx+0.100⑷實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定如果OD值≥Cutoff值，那么樣品為陽(yáng)性；如果OD值＜Cutoff值，那么樣品為陰性。HIV抗體初篩檢測(cè)〔阿克蘇ELISA〕＊計(jì)算舉例NC=0.089；0.093；0.091PC1=1.155PC2=1.069NCx=0.091去除異常的質(zhì)控對(duì)照去除NC≥0.250，無(wú)去除去除NC＞1.4NCx1.4×0.091=0.127無(wú)去除去除NC＜0.6NCx0.6×0.091=0.055無(wú)去除確定以下條件滿(mǎn)足PC1-NCx≥0.4001.155-0.091=1.064通過(guò)PC2-NCx≥0.4001.069-0.091=0.987通過(guò)計(jì)算臨界值Cutoff=NCx+0.100=0.091+0.100=0.191HIV抗體初篩檢測(cè)〔阿克蘇ELISA〕本卷須知⑴超過(guò)有效期的試劑不能使用，樣品和試劑應(yīng)處于室溫，使用后試劑放回2-8℃。⑵為了防止污染，不要用手指或加樣器尖接觸酶標(biāo)板孔及孔內(nèi)的酶復(fù)合物。⑶所有的加樣步驟要精心準(zhǔn)確，試劑或樣品的交叉污染會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié)果，防止微生物或其它污染物污染。⑷去除酶標(biāo)板孔內(nèi)的氣泡，如果需要，輕輕拍打板架。⑸洗板機(jī)要經(jīng)常保養(yǎng)，防止交叉污染。HIV抗體初篩檢測(cè)〔阿克蘇ELISA〕⑹非重復(fù)有活性反響結(jié)果〔假陽(yáng)性〕可能屬于以下一個(gè)或多個(gè)技術(shù)問(wèn)題引起：①由于儀器或加樣器尖造成的交叉污染。②底物被金屬離子污染。③由于潮濕或試劑滴漏造成的交叉污染。④不充分的洗板或最后吸去不徹底。⑤讀數(shù)錯(cuò)誤，在酶標(biāo)板底部有水滴或在酶標(biāo)板孔內(nèi)有氣泡。HIV抗體檢測(cè)明膠顆粒凝集試驗(yàn)〔gelatinparticleagglutination,PA)以日本富士藥廠(chǎng)和珠海麗珠試劑廠(chǎng)生產(chǎn)的試劑盒為例原理經(jīng)HIV抗原致敏的明膠顆粒與血清中的抗體發(fā)生特異性抗原-抗體結(jié)合并產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集反響。優(yōu)點(diǎn)操作簡(jiǎn)便，快速，無(wú)需特殊儀器設(shè)備，適合門(mén)診少量標(biāo)本的檢測(cè)。HIV抗體檢測(cè)〔明膠顆粒凝集試驗(yàn)〕材料血清標(biāo)本,U型板,PA試劑盒(“A〞溶解用液,〞B〞血清稀釋液,〞C〞致敏顆粒,〞D〞非致敏顆粒,陽(yáng)性對(duì)照血清,專(zhuān)用滴管.方法(1)從4℃冰箱取出試劑盒,恢復(fù)至室溫后使用.(2)從1:4開(kāi)始做倍比稀釋.(3)用專(zhuān)用滴管,第二孔加1滴(25ul)非致敏顆粒〞D〞,第三孔加1滴(25ul)致敏顆粒〞C〞.(4)輕輕拍打微量板或在振蕩器上振蕩1分鐘混合后,室溫(20℃)靜置2小時(shí)后觀(guān)察結(jié)果.HIV抗體檢測(cè)〔明膠顆粒凝集試驗(yàn)〕結(jié)果判斷明膠顆粒沉積在孔底,周邊平滑,或形成致密圓圈者為陰性結(jié)果.(-)明膠顆粒沉積在孔底,中央形成致密小環(huán),周邊平滑為可疑反響.(+_)孔內(nèi)有清晰的寬環(huán)且外緣粗糙者,為陽(yáng)性結(jié)果.(+/++)孔內(nèi)凝聚顆粒形成均一的膜覆蓋在整個(gè)孔底者為強(qiáng)陽(yáng)性反響.(+++/++++)孔內(nèi)樣品與致敏和非致敏顆粒均產(chǎn)生凝集者,那么需作重吸收試驗(yàn)后進(jìn)一步檢測(cè).確認(rèn)試驗(yàn)的試劑

必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。

確認(rèn)試驗(yàn)方法

包括免疫印跡試驗(yàn)〔WB〕、條帶免疫試驗(yàn)〔LIATEKHIVⅢ〕、放射免疫沉淀試驗(yàn)〔RIPA〕及免疫熒光試驗(yàn)〔IFA〕。國(guó)內(nèi)常用確實(shí)認(rèn)試驗(yàn)方法是WB。HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)檢測(cè)流程

有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測(cè)，如果呈陰性反響，那么報(bào)告HIV抗體陰性；如果呈陽(yáng)性反響，那么報(bào)告HIV-1抗體陽(yáng)性；如果不滿(mǎn)足陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，那么判為HIV抗體檢測(cè)結(jié)果不確定。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反響，報(bào)告HIV-2抗體陰性；呈陽(yáng)性反響那么報(bào)告HIV-2抗體血清學(xué)陽(yáng)性,并將樣品送國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸序列分析。HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)流程免疫印跡法（WB，HIV-1/2混合型）HIV-1陽(yáng)性反應(yīng)不確定反應(yīng)出現(xiàn)HIV-2指示條帶報(bào)告HIV-1陽(yáng)性不確定反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)報(bào)告陰性每3個(gè)月隨訪(fǎng)1次，共2次，仍屬可疑，則報(bào)告陰性；如隨訪(fǎng)期間HIV抗體出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告陽(yáng)性。隨訪(fǎng)期間可根據(jù)需要，檢測(cè)病毒核酸和或P24抗原，作為輔助診斷。陰性反應(yīng)報(bào)告陰性篩查試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)樣品報(bào)告HIV-2血清學(xué)陽(yáng)性免疫印跡法（WB\HIV-2）艾滋病實(shí)驗(yàn)室診斷確認(rèn)試驗(yàn)

(蛋白印跡Western-Blot)試驗(yàn)原理病毒裂解物抗原經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)別離,然后將別離后的抗原轉(zhuǎn)移(印跡)到硝酸纖維薄膜上,采用類(lèi)似ELISA的技術(shù),當(dāng)樣品中含有HIV抗體時(shí),它和印跡在硝酸纖維薄膜上的病毒抗原相結(jié)合呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的特異性帶型.HIV-1型主要基因有:核蛋白帶gag(p17/18,p24,p55),酶蛋白帶pol(p31,p51,p66),外膜蛋白帶env(gp41,gp120,gp160)確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果的判定

下面是我國(guó)使用WB確認(rèn)HIV感染的判定標(biāo)準(zhǔn)和判定結(jié)果的根本原那么。在實(shí)際工作中還應(yīng)參照所用試劑盒說(shuō)明書(shū)綜合判定，遇疑難情況應(yīng)報(bào)上級(jí)實(shí)驗(yàn)室解決。

&HIV-1抗體陽(yáng)性〔+〕

至少有2條env帶〔gp41和gp160/gp120〕出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時(shí)出現(xiàn)。

&HIV-2抗體血清學(xué)陽(yáng)性〔+〕

同時(shí)符合以下2條標(biāo)準(zhǔn)可判為HIV-2抗體血清學(xué)陽(yáng)性：

〔1〕符合WHO陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少2條env帶〔gp36和gp140/gp105〕。

〔2〕符合試劑盒提供的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

&HIV抗體陰性〔-〕

無(wú)HIV抗體特異帶出現(xiàn)。

&HIV抗體不確定〔±〕

出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但缺乏以判定陽(yáng)性。

?HIV-1抗體特異帶包括：

env帶gp160/gp120、gp41；

gag帶p55、p24、p17〔或p18〕；pol帶p66〔或p65〕、p51、p31。

?HIV-2抗體特異條帶包括：

env帶gp140/gp105、gp36；

gag帶p56、p26、p16；

pol帶p68、p53、p34。

〔由于使用的毒株不同，HIV-2env帶也可為gp125/gp80、gp36〕。HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告

確認(rèn)試驗(yàn)由確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)檢測(cè)結(jié)果出具“HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)報(bào)告單〞〔附表3〕，報(bào)告HIV抗體陽(yáng)性〔+〕、HIV抗體陰性〔-〕及HIV抗體不確定〔±〕。

?符合HIV-1抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-1抗體陽(yáng)性〔+〕〞，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢(xún)、保密和疫情報(bào)告工作。

?符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性〔-〕〞。如果近期有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣病癥等情況，為排除因“窗口期〞而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果，建議高危行為后3個(gè)月時(shí)再做抗體檢測(cè)。也可進(jìn)行HIV-1P24抗原或HIV核酸檢測(cè)，作為輔助診斷。?符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定〔±〕〞，在備注中應(yīng)注明“3個(gè)月后復(fù)檢〞，同時(shí)進(jìn)行以下處理：

(1)隨訪(fǎng)復(fù)檢：每3個(gè)月隨訪(fǎng)復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個(gè)月。如果檢測(cè)時(shí)暴露時(shí)間已超過(guò)3個(gè)月，那么在3個(gè)月后隨訪(fǎng)1次即可。將前后2份樣品同時(shí)檢測(cè)，仍呈不確定或陰性那么報(bào)告HIV抗體陰性，如果在隨訪(fǎng)期間發(fā)生帶型進(jìn)展，符合HIV抗體陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)那么報(bào)告HIV-1或HIV-2抗體陽(yáng)性。

(2)必要時(shí)可做HIV-1P24抗原或HIV核酸測(cè)定，但檢測(cè)結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認(rèn)報(bào)告要依據(jù)血清學(xué)隨訪(fǎng)結(jié)果。

?發(fā)出確認(rèn)報(bào)告的同時(shí)要做好檢測(cè)后咨詢(xún)。

HIV抗體確認(rèn)報(bào)告由1名具有高級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱(chēng)的人員復(fù)核簽字，按原送檢程序反響。如確認(rèn)對(duì)象戶(hù)口不屬于本轄區(qū)，確認(rèn)報(bào)告應(yīng)同時(shí)抄送HIV感染者戶(hù)口所在地的省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室。其它系統(tǒng)確認(rèn)的地方人員〔包括本地和外地〕，也應(yīng)及時(shí)向當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門(mén)和省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室報(bào)告。

省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室難以確認(rèn)的樣品，送國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。同一受檢對(duì)象的樣品在不同實(shí)驗(yàn)室得到不一致確實(shí)認(rèn)結(jié)果時(shí)，由國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室和艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室審評(píng)及技術(shù)指導(dǎo)專(zhuān)家組予以仲裁。

HIV檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作要求

HIV檢測(cè)不同于其他病原微生物檢測(cè)，要求十分嚴(yán)格，任何錯(cuò)誤的診斷，包括假陽(yáng)性或假陰性，都會(huì)對(duì)被檢者產(chǎn)生十分重要的影響。因此，HIV檢測(cè)，必須嚴(yán)格按照國(guó)家制定的檢測(cè)工作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)有嚴(yán)格的質(zhì)量保證體系。HIV抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作要求?標(biāo)本的采集?血清樣品的采集用注射器抽出一定量靜脈血，室溫下自然放置1~2小時(shí)，待血液凝固后再用3000rpm離心15分鐘，吸出血清備用。?抗凝血標(biāo)本的采集用加抗凝劑的真空采血管或用消毒注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管，反復(fù)輕搖，別離血漿和血細(xì)胞。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽渤Ｓ肊DTA〕，如需進(jìn)行病毒RNA測(cè)定，應(yīng)在4~8小時(shí)以?xún)?nèi)別離標(biāo)本。?應(yīng)按臨床采血技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)要求，做好個(gè)人防護(hù)。HIV抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作要求?樣品的保存?用于抗體檢測(cè)的血清或血漿樣品應(yīng)存放于‐20℃以下，短期〔1周〕內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的樣品可存放于2-8℃。?用于抗原和核酸檢測(cè)的血漿和血細(xì)胞樣品，應(yīng)凍存于‐20℃以下，長(zhǎng)期保存〔3個(gè)月以上〕應(yīng)置于‐70℃。用于病毒載量測(cè)定的血漿標(biāo)本應(yīng)于采血后4-8小時(shí)內(nèi)置于‐70℃保存。HIV抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作要求?樣品的運(yùn)送?實(shí)驗(yàn)室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿。除特殊需要外，不能用全血。?管壁上有明顯的標(biāo)記〔編號(hào)或姓名〕，并附有陽(yáng)性送檢單。送檢單應(yīng)與標(biāo)本分開(kāi)，不能混放。?標(biāo)本應(yīng)置于帶有蓋帽的試管內(nèi)，防止碰碎，防止樣品流出，?路途較遠(yuǎn)或者氣候炎熱時(shí)，應(yīng)在2-8℃條件下運(yùn)送。用于抗體檢測(cè)的樣品可在短期內(nèi)〔48小時(shí)內(nèi)〕室溫遞送。?特殊情況下可以用特快專(zhuān)遞形式投寄，但應(yīng)保證不會(huì)破碎和溢漏。HIV抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作要求?樣品的接收

?含有感染性樣品的包裝應(yīng)進(jìn)行消毒。

?核對(duì)標(biāo)本與送檢單，檢查樣品管有無(wú)破損和溢漏，如發(fā)現(xiàn)溢漏，應(yīng)立即進(jìn)行相應(yīng)處理并報(bào)告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專(zhuān)家。

?檢查樣品的狀況，記錄有無(wú)嚴(yán)重溶血、微生物污染等情況。HIV抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作要求?樣品的檢測(cè)?嚴(yán)格按≤全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)≥要求進(jìn)行。?嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)操作，不得擅自更改。?嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程。?注意防止交叉污染。?檢測(cè)程序及流程圖?檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告與處理艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)?建立平安制度⒈實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備、建筑和設(shè)施的平安性應(yīng)通過(guò)專(zhuān)家的評(píng)審。實(shí)驗(yàn)室墻面、地面、臺(tái)面材料應(yīng)耐酸、耐堿、易清潔消毒、不滲漏液體；室內(nèi)應(yīng)有防蚊、防蠅、防鼠等設(shè)備；有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)裝有腳踏或感應(yīng)流水裝置，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)裝置恒溫設(shè)備，室溫保持在20-25℃。2.建立適用于現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件的平安標(biāo)準(zhǔn)操作程序。3.每年對(duì)平安標(biāo)準(zhǔn)程序及其實(shí)施情況進(jìn)行檢查。4制定意外事故處理預(yù)案，建立意外事故的記錄和報(bào)告制度。⒌及時(shí)對(duì)突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進(jìn)行調(diào)查、處理和報(bào)告。艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)?人員管理和培訓(xùn)?人員管理?對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行平安檢查。