毛細(xì)管電泳技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

毛細(xì)管電泳技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

Summary綜述了毛細(xì)管電泳法（CE）在藥物分析中的應(yīng)用，敘述了各種分離模式和檢測(cè)方法，分析藥物及其代謝產(chǎn)物等，與質(zhì)譜聯(lián)用具有廣闊的應(yīng)用前景。Keys毛細(xì)管電泳；電化學(xué)檢測(cè)法；藥物分析毛細(xì)管電泳法（CE），又稱“高效毛細(xì)管電泳HPCE”，是90年代發(fā)展最快的分離手段之一，是新型高效、快速的分離、分析方法，是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分的不同遷移速度來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的液相分離技術(shù)。在化學(xué)藥品、抗生素、手性藥物和中藥、中藥指紋圖譜及生物技術(shù)產(chǎn)品等藥物和制劑的分離、鑒定和分析中，顯示了高效、快速的特點(diǎn)，益發(fā)受到重視。本文綜述了毛細(xì)管電泳法在藥物分析中的應(yīng)用概況。CE的特點(diǎn)采用電化學(xué)檢測(cè)器，最低檢測(cè)限可達(dá)10-19mol高靈敏度每米理論塔板數(shù)為幾十萬(wàn)，高者可達(dá)幾百萬(wàn)甚至幾千萬(wàn)高效

特點(diǎn)通常的分析時(shí)間不超過(guò)30min高速只需nL(10-9L)級(jí)樣品用量少只需少量(幾毫升)流動(dòng)相，在價(jià)格低廉的毛細(xì)管柱中進(jìn)行低消耗

無(wú)機(jī)物、有機(jī)物、生物、中性分子，生物大分子等應(yīng)用范圍廣圖1CE的特點(diǎn)實(shí)驗(yàn)流程和步驟一般流程：預(yù)平衡、進(jìn)樣、分離、檢測(cè)和數(shù)據(jù)處理典型的實(shí)驗(yàn)步驟:將運(yùn)行緩沖液充滿毛細(xì)管移去進(jìn)樣端緩沖液池,用樣品池代替用電動(dòng)或壓力進(jìn)樣方式進(jìn)樣將進(jìn)樣端緩沖溶液放回毛細(xì)管兩端操作電壓進(jìn)行電泳分離分離樣品遷移至檢測(cè)窗檢測(cè),記錄數(shù)據(jù)和處理圖2實(shí)驗(yàn)步驟3.毛細(xì)管電泳的分類(按分類模式）依據(jù)為溶質(zhì)在自由溶液中的淌度差異可用于解離的或離子化合物、手性化合物及蛋白質(zhì)、多肽等毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)依據(jù)為溶質(zhì)分子大小與電荷/質(zhì)量比差異用于蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子電泳型毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)電泳型分離依據(jù)為等電點(diǎn)差異應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多肽毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF)(CIEF)毛細(xì)管電泳的分類電滲流驅(qū)動(dòng)的色譜分離機(jī)制應(yīng)用范圍同HPLC色譜型毛細(xì)管電色譜(CEC)色譜型依據(jù)為溶質(zhì)在膠束與水相間分配系數(shù)的差異用于中性或強(qiáng)疏水性化合物、核酸、多環(huán)芳烴、結(jié)構(gòu)相似的肽段膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC)電泳/色譜型電泳譜型微乳液電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MEECC)電滲流驅(qū)動(dòng)、電泳和色譜綜合作用可以同時(shí)分離水溶性、脂溶性、帶電或不帶電的物質(zhì)圖2毛細(xì)管電泳的分類(按分類模式）4.CE的檢測(cè)器紫外可見(jiàn)光譜法（UV）檢測(cè)器最常用的方法，通用性好，特別是蛋白質(zhì)的適應(yīng)性強(qiáng)

可獲得時(shí)間-波長(zhǎng)-吸光值三維電泳圖，多波長(zhǎng)信號(hào)檢測(cè)、峰純度測(cè)定、峰的定性，未分離峰定量二極管陣列檢測(cè)器

CE的檢測(cè)器熒光檢測(cè)器（激光誘導(dǎo)熒光）靈敏度最高，光強(qiáng)度大，單色性、相干性好，可檢測(cè)單細(xì)胞，通用性差，適合DNA檢測(cè)，樣品衍生化電導(dǎo)檢測(cè)器（ECD）

無(wú)機(jī)離子和較小有機(jī)離子檢測(cè)

具有氧化-還原性質(zhì)的物質(zhì)電化學(xué)檢測(cè)器（EC）儀器復(fù)雜可獲得結(jié)構(gòu)信息質(zhì)譜檢測(cè)器圖4CE的檢測(cè)器5.毛細(xì)管電泳在藥物分析中的應(yīng)用5.1化學(xué)藥品及其制劑分析

孫彤等[1]采用反向電壓下場(chǎng)放大進(jìn)樣富集技術(shù)，建立4種磺胺類藥物的毛細(xì)管區(qū)帶電泳分析方法。確立了優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件，4種磺胺類藥物在該方法條件下檢出限可達(dá)10-9-10-10mol/L水平。李興華等[2]建立了高效毛細(xì)管電泳-紫外檢測(cè)法快速分離測(cè)定10-羥基喜樹(shù)堿（10-Hydroxycamptothecin,10-HCPT）、6-巰基嘌呤（6-mercaptopurine,6-MP）、5-氟尿嘧（5-Fluorouracil,5-Fu）三種抗腫瘤藥物方法?？疾炝藱z測(cè)波長(zhǎng)、分離電壓、進(jìn)樣時(shí)間、緩沖液的pH值及離子強(qiáng)度對(duì)分離效果的影響。整個(gè)試驗(yàn)沒(méi)有使用有機(jī)溶劑，方法用于尿樣、血樣樣品的測(cè)定，結(jié)果滿意，為臨床對(duì)10-HCPT、6-MP、5-Fu3種抗腫瘤藥物的用藥監(jiān)測(cè)提供了更加簡(jiǎn)單快速的分析方法。5.2抗生素藥物分析李享等[3]基于萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素對(duì)Ag（Ⅲ）配合物-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系的抑制作用，建立了毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光法測(cè)定人血清中萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的新方法。優(yōu)化了毛細(xì)管電泳分離與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)條件。采用固相萃取法處理血清樣品,測(cè)得萬(wàn)古霉素的回收率為94.5%-102.1%,去甲萬(wàn)古霉素的回收率為83.3%-95.8%。李敏等[4]建立了[Bmim][BF4]以離子液體為背景，電解質(zhì)高效毛細(xì)管電泳同時(shí)測(cè)定注射用頭孢噻肟（CTX）、頭孢唑啉（CFZ）、頭孢曲松（CRO）以及頭孢米諾（CMN）四種頭孢類藥物的方法。該方法用于分析注射用頭孢藥物，回收率在98.12-101.88%。離子液體經(jīng)CH2Cl2萃取回收，可重復(fù)使用。5.3手性藥物分析劉建華等[5]用毛細(xì)管電泳法拆分抗膽堿類手性藥物托吡卡胺。利用毛細(xì)管電泳法，篩選托吡卡胺溶液質(zhì)量濃度、波長(zhǎng)、緩沖液濃度等條件，添加磺酸化β-環(huán)糊精聚合物（S-β-CDP），對(duì)托吡卡胺拆分，能夠?qū)崿F(xiàn)良好拆分。趙凌國(guó)等[6]采用5種β受體阻滯劑（普萘洛爾、美托洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾和卡拉洛爾）為手性分離對(duì)象，以羧甲基-β-環(huán)糊精（CM-β-CD）為手性選擇劑進(jìn)行毛細(xì)管電泳分離研究，系統(tǒng)考察CM-β-CD濃度、分離電壓、pH值、緩沖液種類對(duì)拆分效果的影響。建立簡(jiǎn)便、快速的拆分方法，分離度良好，適用于手性分離β受體阻滯劑。楊思文等[7]建立了在毛細(xì)管電泳中以三甲基羥乙基雙三氟甲磺酰亞（HOEtN1,1,1NTF2）離子液體和羧甲基-β-環(huán)糊精（CM-β-CD）聯(lián)用，分離氟西汀對(duì)映體的毛細(xì)管電泳新方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，氟西汀對(duì)映體在11min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了基線分離，分離度為2.33。該方法操作簡(jiǎn)便、分析快速、分離效果好，適用于分離氟西汀對(duì)映體。5.4生物樣本的藥物及代謝產(chǎn)物分析潘婷婷[8]建立了高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）同時(shí)分析測(cè)定鹽酸二甲雙胍（Metforminhydrochloride,MET）、鹽酸羅格列酮（Rosiglitazonehydrochloride,RLZ）、瑞格列奈（Repaglinide,RGN）和格列美脲（Glimepiride,GLM）等4種降糖藥的方法，并對(duì)其6種不同制劑進(jìn)行了含量測(cè)定。HPCE方法的建立為4種降糖藥在體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究提供新思路，拓展了分析方法的選擇性。5.5中草藥分析郭靜[9]建立了簡(jiǎn)單、高效的有機(jī)溶劑改性的膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法，分離測(cè)定了苦玄參中的4種有效成分，并成功用于苦玄參藥材及其制劑中4種有效成分的含量測(cè)定。為苦玄參藥材及其制劑的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。建立快速、靈敏、有效的分離分析7種異黃酮的毛細(xì)管電泳方法，為葛根藥材及相關(guān)制劑中7種異黃酮的分析提供方法依據(jù)。郭海濤[10]建立了簡(jiǎn)單、高效的膠束毛細(xì)管電泳法，分離了雷公藤中3種萜類和4種生物堿類成分，應(yīng)用于雷公藤藥材及3種不同制劑中7種有效成分的含量測(cè)定。該法為雷公藤藥材及其制劑的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)，有助于雷公藤制劑臨床應(yīng)用的有效性和安全性。袁哲[11]通過(guò)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)曲面法，借助Design-Expert8.0軟件優(yōu)化了中草藥刺五加成分的萃取分離條件和旋覆花、通經(jīng)草、羅布麻成分的毛細(xì)管電泳分離條件，并對(duì)樣品中的部分成分進(jìn)行了含量測(cè)定，為其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了新方法。該方法方便、快速、成本低，可用于上述幾種中藥質(zhì)量分析。5.6中藥指紋圖譜研究孫姍[12]通過(guò)毛細(xì)管電泳技術(shù)分析手段建立了白車(chē)軸草，苦瓜，苣荬菜，車(chē)前草等幾種藥用植物的毛細(xì)管電泳指紋圖譜，為其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了新方法。方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。不同來(lái)源的同種藥材在化學(xué)成分種類方面具有較好的一致性，但不同生態(tài)環(huán)境差異會(huì)影響含量。張政等[13]用未涂層彈性熔融石英毛細(xì)管柱（93cm×0.75μm），有效柱長(zhǎng)79cm；二極管陣列檢測(cè)器；50mbar壓力進(jìn)樣10s；運(yùn)行電壓-30kV;柱溫為20℃；運(yùn)行時(shí)間60min；考察不同檢測(cè)波長(zhǎng)、pH、緩沖溶液種類、濃度等對(duì)色譜峰的影響，并對(duì)10批樣品做了相似度評(píng)價(jià)。建立了高效毛細(xì)管電泳指紋圖譜法來(lái)檢測(cè)全蝎酶解液中蛋白類成分（>10kDa）的分析方法。6.結(jié)語(yǔ)CE作為新型高效的分離技術(shù)，給現(xiàn)代藥物分析提供了強(qiáng)有力的分離分析手段。近年來(lái)毛細(xì)管電泳在藥物分析中的應(yīng)用得到迅速的發(fā)展。CE的多種分離模式給樣品分離提供了不同的選擇機(jī)會(huì)，尤其是分離來(lái)源復(fù)雜的生物樣品，更為有利。隨著CE的發(fā)展和完善，將在中藥分析、食品分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。Reference：孫彤,張營(yíng),翁前鋒.反向電壓下場(chǎng)放大進(jìn)樣毛細(xì)管電泳分析磺胺類藥物[J].廣州化工.

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