非小細胞肺癌文獻一篇

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LiquidChromatography/MassSpectrometryMethodsforMeasuringDipeptideAbundanceinNon-SmallCellLungCancer褚曉芳使用液相色譜-質(zhì)譜技術分析非小細胞肺癌患者組織中二肽豐度的變化主要內(nèi)容肺癌簡介實驗流程樣品處理LC/MS分析MS/MS分析MS數(shù)據(jù)分析質(zhì)量控制統(tǒng)計分析主要內(nèi)容實驗結(jié)果肺癌相關二肽數(shù)據(jù)庫產(chǎn)生肺癌組織中二肽的識別MS/MS二肽譜圖不同分析條件下二肽的識別肺癌組織中二肽的靶標分析結(jié)論驗證研究意義及不足肺癌簡介在美國，肺癌死亡率在所有癌癥中最高，2012年共有165000死于肺癌。在全世界范圍內(nèi)，估計肺癌影響超過100萬人。肺癌中80%是非小細胞肺癌目前，肺癌早期及進展階段仍沒有靈敏度高的診斷手段肺癌相關的代謝組學研究較少肺癌相關研究肺癌早期的代謝組學研究表明在腫瘤樣本中有許多代謝物發(fā)生表達的改變在不同化療耐藥性的肺癌細胞系中，膽堿、脂肪、乳酸、甘氨酸水平有明顯的改變在埃羅替尼治療或進行切除手術的患者中，同側(cè)細支氣管肺泡癌發(fā)生病變在肺癌患者血清和組織樣本的混合物中，有48種代謝物在組織和肺癌不同進展階段有明顯改變二肽對真核生物的作用二肽在蛋白質(zhì)營養(yǎng)、增長及發(fā)展中其重要作用二肽水平通過肽轉(zhuǎn)運體中的膜蛋白調(diào)節(jié)肽轉(zhuǎn)運體廣泛存在于大腦、胰腺、腸、腎臟等器官中主要內(nèi)容實驗流程樣品處理LC/MS分析MS/MS分析MS數(shù)據(jù)分析質(zhì)量控制統(tǒng)計分析樣品處理Testingset:9名確診為肺癌惡性腺瘤的男性樣本:

①有代表性的肺癌組織切片

②與腫瘤組織相鄰的正常組織切片

③距原發(fā)腫瘤＞3cm處的正常組織切片樣品處理Validationset10名確診為肺癌惡性腺瘤的男性樣本:

①有代表性的肺癌組織切片②距原發(fā)腫瘤＞3cm處的正常組織切片樣品狠處理Va事li智da煉ti缺on叼s均et6名確饅診為封肝癌恢的患律者目的:證明綠在非陳小細除胞肺斗癌患逃者中介找到席的代碌謝物須標志物邪具有病特異描性所有瞇樣品郵在分吹離后呀快速抱冷凍30貴-6胸0m練in，處箱理前測在-8揀0℃保雖存樣品鄉(xiāng)豐處理組織更提?、賹⒈I分離瞎的組叔織稱有重后嫁用不湯銹鋼雁珠同根質(zhì)化梁，頻禍率為20次/s，持源續(xù)30攝s②加遺入標目準溶汁劑混趁合物賭重復4次同料質(zhì)化頓過程③用僻蒸汽袍離心愉蒸發(fā)預濃縮百器干詞燥氯附仿-甲醇-水層叼中的次極性泥代謝蘋物④將技干燥田后的桂樣品撫復溶對于水樣品銹處理⑤衍件生化笨：50μL極性萬代謝個提取織物+2投5μL0毒.1柜M的四究硼酸襖鈉緩堵沖液+5脫0μL嘴20憶mM丹磺面酰氯(乙腈欣為溶蒼劑)，渦跟旋混聯(lián)勻丹酰環(huán)衍生躁化目暈的:提高媽代謝兩物檢款測敏漫感性10杠-1濃00邁0倍提高裁極性偽代謝旦物在村液相窄色譜肝柱上疫的保相留和娛分離⑥室渡溫孵遵育30欄mi障n，加貨入50μL鉤0.盼5%甲酸陡停止放反應⑦將鍛反應存混合守液上謀層清鬧液轉(zhuǎn)推移至爆自動泰采樣衡瓶主要佩內(nèi)容實驗湯流程樣品摔處理LC饒/M倍S分析MS滅/M潔S分析MS數(shù)據(jù)屈分析質(zhì)量籍控制統(tǒng)計個分析LS蓄/M拖S工作茂原理局：通過栽液相魂色譜滅分離誕化合抹物(主要雞是沸叛點高躍、極杠性強咳、熱訴穩(wěn)定賴性差即的化螺合物)，再微通過端電噴志霧電術離產(chǎn)控生樣漲品離付子，爪進入嚇質(zhì)譜褲儀后竭按質(zhì)王荷比睬分離誓，然饒后測宇定各私種離新子譜絕峰的愚強度曾而實志現(xiàn)分威析目餓的。梯度栗洗脫叛裝置:利用場兩種揚或兩錢種以惕上溶塘劑，暫按照采一定簽的時醒間順碼序連泄續(xù)或再階段償改變栗溶劑粘比例換，從磚而改疲變流按動相紛的極西性、拍離子緣瑞強度置和PH值，這使樣俱品的州各組潮分在享最佳參容量蛾因子偽值范脆圍內(nèi)購流出牲色譜收柱，啦改善艦分離薪效果質(zhì)譜瞧解析廳一般河步驟:核對逼獲得結(jié)的譜碎圖，梯扣除圈本底佩等因階素引蠅起的耗失真盡可店能判播斷分脫子離覽子，歉即確婦定分掠子質(zhì)妄量;譜圖粱中往連往有呢很多粒碎片杰離子爆，這兇些碎懶片離喘子是贊由準渴分子緊離子霞裂解給產(chǎn)生假設掠和排懲列可鏟能的廉結(jié)構億歸屬戴，高袖質(zhì)量蔥離子朋顯示鹽的M-股1，M-堂15，M-障18膛……即表致示失倦去H、CH3、H2O…堅…推出搭可能浩的分壓子結(jié)崇構，棟以標鐮準譜基圖對諒比，澆確定絮分子涌結(jié)構LC蛇/M繁S分析儀器擾：安再捷倫65炒20系列撤四極坊桿飛月行時喝間串閑聯(lián)質(zhì)象譜儀(帶有哨安捷抬倫12遞90超高公效液哈相色耐譜系蒸統(tǒng))方法A：Zo肝rb回ax罰C18液相扭分析麥柱流動異相流疫動速臂率5μL澇/m緞in洗脫勁液B:升5%殼-9乞5%濃度冤梯度洗脫斜時間:3宏0m迅in，95盜%B時維崇持5m誘inLC傻/M然S分析溶劑A:叨HP豈LC水+0禾.1陵%水溶劑B:寫LC鮮/M贈S級乙秒腈+0紀.1覺%甲酸毛細冤管溫率度:3勤25℃m/鋒z1茅0-舟10肌00之間剛進行匆全譜午掃描常用蒙固定鴿相:硅膠搶、氨雷基、啄二醇逢基等常用淡流動約相:水、惡乙腈弟、異別丙醇LC書/M美S分析方法B:Ph瞞en耽om憶en父ex宗K甲in搖et去ex銷C18液相惕分析磚柱流動缸速率0.社5m昌l/堂mi駕n進行坑洗脫洗脫券液B:夠5%另-9球5%濃度門梯度T(min)B(%)0.5520.5602595309555LC湊/M何S分析方法C:Ki不ne風te賢x液相看分析殘柱流動太速率0.旬5m惜l/覽mi萄n進行燙洗脫洗脫偷液B:材10版%-漠95昨%濃度掘梯度T(min)B(%)0.5102.52017.560189555主要監(jiān)內(nèi)容實驗醬流程樣品因處理LC凝/M跳S分析MS腫/M神S分析MS數(shù)據(jù)畏分析質(zhì)量兩控制統(tǒng)計速分析MS刻/M植S分析儀器奇：安惜捷倫65躁20系列肝四極米桿飛素行時異間串礙聯(lián)質(zhì)瓶譜儀靶向MS貸/M編S分析:保留夠時間:0回.6米mi丑n離子診碰撞亞能量:2懶6V躬(質(zhì)量六大的紐奉分子:3斯2V鞭)分離嗓寬度:4竄m/賣z為何磁在用LS窄/M冒S分析憲后，命還要勁采用MS蛾/M肉S分析茶？LS眾/M乓S譜圖號中樣木品的性準分勻子離舊子峰鉛豐度狠較高述，碎故片峰僵則少添而弱身，因紹此主裝要給磨出與刃樣品翻的分挺子質(zhì)娘量相州關的魂信息飾，而災很少勾給出誦與樣詠品結(jié)銜構有獻關的社信息懲，采霜用多脾級質(zhì)政譜MS浪/M浴S可以艦彌補夜這一險缺陷哄。主要地內(nèi)容實驗碰流程樣品捐處理LC湖/M急S分析MS凝/M參S分析MS數(shù)據(jù)際分析質(zhì)量啊控制統(tǒng)計景分析MS數(shù)據(jù)泥分析非靶昨向數(shù)囑據(jù)分豈析:使用帆代謝慚組學鋤分析失軟件丸提取晝保留腳時間幫一致查的峰暖，用億最小屯二乘畜法檢積測非飼靶向敞代謝償物的獨特征鳴，比股對特沸征分撞析數(shù)唉據(jù)庫持識別貌評估安的結(jié)熊果。靶向筋二肽弱數(shù)據(jù)燭分析:使用險二肽傾數(shù)據(jù)擦庫和私特征足分析抹數(shù)據(jù)撇庫進粉行比碌對MS數(shù)據(jù)榴分析為什計么要倒進行柔峰對線齊？為了襯利用圖色譜刮圖中償所有覺可以心識別算的峰喊的信洞息，蓋必須戚對譜掠圖進飄行峰搜匹配賽，不笑同樣洪本中壁同一招代謝犧產(chǎn)物苦在生秤成的淡數(shù)據(jù)血矩陣幸中必醋須由寄同一備變量益來表捆示，艦這樣荷各個勇樣本狂間的兄數(shù)據(jù)底才可漿以比腸較。對數(shù)尤據(jù)的賴要求葉：①召有相應同數(shù)葬目的組變量暗描述管②每作個變句量在罵樣本噴中均翠出現(xiàn)詞③所勺有樣齒本中樸的變?nèi)柿看贡淼某室饬x過相同主要密內(nèi)容實驗觸流程樣品擺處理LC稻/M培S分析MS墳/M雄S分析MS數(shù)據(jù)疾分析質(zhì)量短控制統(tǒng)計估分析質(zhì)量算控制進樣例前后糞分析概經(jīng)過跨衍生察化的26種氨申基酸觸標準甲混合質(zhì)物目的:保證思衍生驚化作缸用有雷效進息行檢驗鋪儀器院性能肚狀態(tài)帝的良星好保證隔能夠紋獲得題連續(xù)窩的保溪留時本間主要更內(nèi)容實驗竭流程樣品伴處理LC首/M鉛S分析MS雜/M殺S分析MS數(shù)據(jù)竹分析質(zhì)量壁控制統(tǒng)計離分析統(tǒng)計迷分析非參液數(shù)秩滅和檢重驗:評估姻腫瘤瓜組織晉與兩菊種正太常組貧織中瞇檢測堅的二購肽水死平有腐無明稼顯變鋸化結(jié)果:沒有躲相關守的二夜肽有癥顯著自性差真別二項售分布:在檢申測的33率4種二天肽中捆有10秤5種有蠅統(tǒng)計舟學意水義因3個樣帖本來播自同委一個計體，鏈故需坦分析任樣本避大小揀對代棚謝物禍檢測課結(jié)果齊的影刮響主要墨內(nèi)容實驗當結(jié)果肺癌守相關培二肽械數(shù)據(jù)雜庫產(chǎn)鈴生肺癌丑組織擾中二膨肽的刻識別MS穴/M漁S二肽扔譜圖不同沈分析侄條件賽下二板肽的乖識別肺癌態(tài)組織白中二腐肽的慕靶標伙分析結(jié)論裁驗證研究叮意義屈及不甘足肺癌如相關笨二肽爹數(shù)據(jù)晨庫標準荒品二勿肽合或成:基于恢組合智合成歲法的胡陣列袋及包勻含組蜻氨酸買的二灘肽，漂不能逗合成慮的二容肽通葵過Aa要ns另pe呀c脂In營t公司性獲得混合盛物配單置:將7-寄30毫微妨升具富有相批同C羧基街端的18種二通肽混啦合并事用50怒%乙腈榨和水肆稀釋攀成10μM，丹為酰衍停生化響后，法采用LC方法B及MS全譜熟掃描肺癌謊相關原二肽蓮數(shù)據(jù)刑庫氨基部酸是后生物什樣本誓中唯殿一分稼析物萌，故練用氨題基酸紐奉作為魔標準渡品氨基香酸保貍留時稱間的狹多項掩對齊隙是對胳齊二催肽保掘留時匪間最延好的縫方法肺癌呈組織從中二濤肽的盛識別36魄1種二堅肽中敵只有16圾1種有勞獨特廊的化糞學分遲子式差，只達有17種是墨單一閃的異域構體(A漁A)同分今異構焦體二焦肽的慢識別欠需要欺仔細盯比較虎其滯寺留特循性合并昂腫瘤杜樣本霉再分秘析得勞到27壘9種二忠肽，觸其中23緒4種二誤肽的陷質(zhì)量逮精度鐵＜5p糞pm，45種＜10啟pp粗m，將27崖9種二歉肽保現(xiàn)留時奇間與自數(shù)據(jù)裝庫比浙對，鉆大部藍分二旬肽保倆留時酒間在0.溜1m前in內(nèi)，勞但有且精氨貧酸的澇二肽拾標準筑品和莫樣品擱有明浪顯不叔同MS俘/M掘S二肽隙譜圖丹酰遣化二率肽的MS芹/M族S譜圖逗通常挑不提須供信葵息，忍而主推要以末丹酰神離子添為主由丹莫酰分他離出州來的C12H12N陽離結(jié)子在翠大部津分丹溪酰化南二肽巖譜圖繞中產(chǎn)愚生基株峰，m/蘇z為17短0.緩09攏6495遙%測量純值與稿真實抹值相勝比降馳低(精度繡誤差這小于13桿pp昂m)根據(jù)誼測量濱值得盛到的稻化學蒜分子躁式精雹度誤注差都矩在13守pp毅m以內(nèi)MS糟/M著S二肽默譜圖MS馳/M很S二肽喚譜圖其他史丹酰賄特征搶的離碑子還該包括:m/扯z工23秒4.睬05漠9綱(C12H12NS且O2)在單源一帶莖電離乞子中袖普遍督存在贈且變到異較影大；m/凝z烈25鼓2.摘06薦9該(C12H14NS略O3)在含傍氧二寫肽中意普遍謎存在?。籱/責z揉18稅6.誕09女2扶(C12H12NO劉)離子說也很云普遍MS列/M鐮S二肽炮譜圖丹酰桂化二枝肽分過裂處(經(jīng)典僻離子)MS臂/M高S二肽熱譜圖丹酰掏化二居肽分塊裂特群征碎源片MS擇/M然S二肽儲譜圖MS杜/M指S二肽虛譜圖炕其他乞明顯醫(yī)特征槽：由氨偉基酸I/鍵L/終V/示A組成保的二益肽在淺位1或位2有經(jīng)配典的I離子色氨廁酸的I離子懶會發(fā)沙生中鉗性分矩子的障喪失園，產(chǎn)拐生m/導z1膽44和13鼻0的特招征性請碎片二肽佳通過始中性肌丟失(焦谷北氨酸忽鹽)使c離子任增加帶有鏈氨基揀酸R、K、H的二總肽有覽復雜應的特泄征二肽XR、RX使m/釀z為15燒6/裁15言7碎片防增多MS溫/M侄S二肽病譜圖賴氨網(wǎng)酸二尾肽經(jīng)瘦常帶裁雙電恥荷，m/濱z3遭17碎片烘顯著學，還壩有m/濟z8封4經(jīng)典等碎片組氨擴酸二塑肽也控經(jīng)常共帶雙向電荷少，I1和I2碎片遺離子防較多HX雙電導荷二橋肽與NX、MX有相刺同的m/侮z2圖61的碎悟片離籌子蛋氨次酸二推肽在m/修z3份37發(fā)生伐多次鹿分裂練，產(chǎn)印生不接同碎齒片離纖子不同婦分析脊條件他下二膜肽的后識別氨基瓶酸作文為內(nèi)壓標可襯以使浙來自桐不同厘實驗舞室的樹代謝冬組數(shù)星據(jù)具鴿有可腦比性本地遷散點節(jié)平滑坊估計(L故OE爽SS壁)是最間好的簡校準屋二肽符保留港時間免的方舟法肺癌孤組織黑中二占肽的撈靶標北分析采用蹦最小坡二乘混法比哥較腫頃瘤組核織與彼正常微組織悠中豐菠度變?yōu)E化明濾顯的費二肽有25梳7種二掩肽至哪少在堤一種貧組織取中被吐檢測沖到，法其中25染3種在答腫瘤察組織認中檢典測到在腫倡瘤組喂織中秘檢測囑到90種二嫩肽豐執(zhí)度與緊正常黨組織逗相比糞有明莫顯的蚊增加(倍數(shù)魚＞2