惡性血液病33例細(xì)胞遺傳學(xué)分析

惡性血液病33例細(xì)胞遺傳學(xué)分析【摘要】目的：分析惡性血液病細(xì)遺傳學(xué)改變。方法：選擇臨床確診惡性血液病33例，采用直接法和培養(yǎng)法進(jìn)行染及體標(biāo)制備，及顯著技術(shù)進(jìn)行核型分析。結(jié)果：33例中12例發(fā)現(xiàn)明顯異常染色體核型，16例為正常核型。結(jié)論：染色體檢查在惡性血液病診斷分型中具有重要價值。

【關(guān)鍵詞】惡性血液??；染色體；細(xì)胞遺傳學(xué)

1資料與方法

一般資料33例中男19例,女14例；年齡27～90歲，中位年齡57歲；病程10天～8年，平均年。所有患者均經(jīng)血常規(guī)、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查，急性白血病行白血病免疫表型測定，骨髓增殖性疾病和骨髓增生異常綜合征、腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移行骨髓活檢，多發(fā)性骨髓瘤行免疫全套、骨骼平片及心電圖檢查等，按陳灝珠等[1]主編的《實用內(nèi)科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。33例中急性非淋巴細(xì)胞白血病8例，其中M11例，M22例，M32例，M41例，M52例；急性淋巴細(xì)胞白血病1例，慢性粒細(xì)胞白血病8例，慢性淋巴細(xì)胞白血病1例，多發(fā)性骨髓瘤4例，漿細(xì)胞白血病1例，骨髓增生異常綜合征6例，骨髓纖維化1例，真性紅細(xì)胞增多癥1例,骨髓轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤2例。

1．2儀器超凈臺，雙目顯微鏡，電熱恒溫培養(yǎng)箱，臺式自動平衡離心機(jī)，-20℃冰箱，不銹鋼正壓濾器，精密數(shù)顯酸度計等。

1．3細(xì)胞遺傳學(xué)分析染色體標(biāo)本制備采用直接法和培養(yǎng)法。用%肝素濕潤之針筒抽取骨髓2ml左右,注入取樣瓶,在超凈室內(nèi)抽取標(biāo)本計數(shù)有核細(xì)胞,按×106/ml無菌接種于1640培養(yǎng)基內(nèi)。37℃恒溫箱放置16小時。加入長春花堿或秋水仙胺應(yīng)用液使終濃度為μg/ml,37℃溫箱1小時。離心：1000rpm×10min，棄上清液。加入預(yù)溫至37℃的mol/L氯化鉀液8ml,輕輕打勻,置37℃30min。加入1ml固定液輕輕打勻,離心1000rpm×10min。離心后3次固定。再離心1000rpm×10min，棄上清,加適量固定液配成細(xì)胞懸液,置4℃保存;氣干法制片后，10%Giemsa染色后鏡檢。全部標(biāo)本用熱變性姬姆薩R顯帶技術(shù)進(jìn)行核型分析。核型異常的描述按人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制[ISCN]。

2結(jié)果

33例中17例發(fā)現(xiàn)明顯的異常染色體核型，16例為正常核型，見表1。CML8例中有7例出現(xiàn)典型Ph易位即t(9,22)，1例出現(xiàn)2Ph染色體。MM4例中有3例分別累及x、1號、5號、10號、13號、14號、21號、22號染色體的增加、缺失或易位。AL9例中有3例初發(fā)白血病出現(xiàn)異常染色體。1例MDS轉(zhuǎn)變?yōu)锳NLL出現(xiàn)染色體的增加；1例M5出現(xiàn)3號、11號、13號、19號染色體缺失、增加及超3倍體易見；1例ALL出現(xiàn)Ph染色體。2例M2、2例M3、1例M4、1例M5處于完全緩解期未發(fā)現(xiàn)異常染色體。MDS6例中有1例RAEB出現(xiàn)10號染色體缺失。骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤2例出現(xiàn)1號、9號、14號、19號染色體增加。

3討論

正常人的體細(xì)胞染色體數(shù)目為46條，并有一定的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。染色體異常是指染色體的數(shù)目不正常和結(jié)構(gòu)畸變，如染色體斷裂、缺失、倒位、易位等。惡性血液病的發(fā)生與染色體異常密切相關(guān)。隨著細(xì)胞遺傳學(xué)研究的不斷進(jìn)展，染色體分析在CML、AL、MDS、MM等診治中起著重要作用。盡管大多數(shù)CML只需臨床表現(xiàn)和血液學(xué)檢查即可診斷，但有時與類白血病反應(yīng)及其它骨髓腫瘤鑒別非常困難，Ph染色體的發(fā)現(xiàn)使CML診斷更準(zhǔn)確。謝新報道CML患者95%為Ph且在臨床血液學(xué)已經(jīng)緩解時Ph染色體仍持續(xù)存在。CML急變時除Ph染色體外，70%的病例常出現(xiàn)額外的染色體改變，最多見的改變?yōu)?Ph，+8和i(17q)。本組8例CML中5例處于血液學(xué)緩解期，均Ph；3例急變中2例Ph，1例為2Ph。

大約50%～93%的ANLL和90%ALL有克隆性染色體異常，60%ANLL和66%ALL屬于特異性染色體重排，不僅在ANLL和ALL之間明顯有別，而且在它們的各自亞型間也互不相同，因此成為白血病可靠分型標(biāo)志。薛永權(quán)等報道72%M3有t(15;17),50%M2有t(8;21),71%M4EO有inv(16)。ANLL還有10余種和白血病FAB亞型不相關(guān)的染色體異常，主要為數(shù)目異常：+8、-5、7q-,5q-,-Y、+11、+13、+21、9q-、i(17q)、20q-、+22等。ANLL的染色體異常于病情緩解時消失，復(fù)發(fā)時又再現(xiàn)。本組9例AL中6例處于血液學(xué)緩解期，未發(fā)現(xiàn)染色體異常，1例MDS轉(zhuǎn)變?yōu)锳NLL表現(xiàn)為47,xx,+M(?+16)，1例M5超3倍體易見，1例ALL出現(xiàn)Ph染色體。

MDS克隆性染色體畸變可見于40%～70%的原發(fā)性MDS和95%左右的治療相關(guān)性MDS[3，4]。MDS染色體畸變類型十分復(fù)雜，主要以染色體缺失和數(shù)目異常為主，特別是+8、-7/del(7q)、del(5q)、del(20q)和-Y這5種最常見，而染色體易位則較少見。本組6例MDS中僅檢出1例MDS有染色體異常，表現(xiàn)為10號染色體缺失，故認(rèn)為與MDS分型有關(guān)，發(fā)現(xiàn)MDS染色體異常檢出率低。

文獻(xiàn)報道MM初診時染色體異常克隆的檢出率為18%～35%，疾病進(jìn)展期的檢出率40%～60%。MM常涉及多條染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常，異?？寺《嘁猿扼w和亞二倍體形式存在，整二倍體很少見，最具特征的數(shù)目改變?yōu)槌霈F(xiàn)三體或單體染色體，以三體

[1]陳灝珠，主編.實用內(nèi)科學(xué)[M].第11版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001：2095-2199.

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Debes-MarumCS,De