OLYMPUSI51倒置顯微鏡操作規(guī)程-廈門大學(xué)生物醫(yī)學(xué)儀器共享平臺(tái)

倒置熒光顯微鏡操作規(guī)程Olympus IX5廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院中心試驗(yàn)室黃靜茹202310月說(shuō)明：①透射光主開(kāi)關(guān)；②汞燈高壓電源開(kāi)關(guān)；③透射光光強(qiáng)把握鈕；④濾色片架；XY/微調(diào)焦旋鈕；⑨雙目觀看筒；⑩屈光度調(diào)整環(huán)；?聚光鏡高度調(diào)整鈕；?聚光鏡對(duì)中旋鈕；???〔SHUTTER；?熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤；?熒光減光閥一、開(kāi)機(jī)1〔白光〕主開(kāi)關(guān)①；21〔白光〕主開(kāi)關(guān)①；2〔汞燈高壓電源〕②；3、翻開(kāi)電腦，進(jìn)入cellSensStandard二、明場(chǎng)觀看〔BrightFieldBF〕1、正確放置標(biāo)本，BFHE2、轉(zhuǎn)動(dòng)熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤?到“6”的位置；4、將光路選擇桿⑤推動(dòng)去〔選擇目鏡觀看光路；4、將光路選擇桿⑤推動(dòng)去〔選擇目鏡觀看光路；粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕⑧聚焦觀看,依據(jù)需要調(diào)整瞳間距⑨和屈光度⑩；三、相襯觀看〔PhasecontrastPH)1、正確放置標(biāo)本，PH2、轉(zhuǎn)動(dòng)熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤?到“6”的位置；3、轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)盤⑦，選用適宜的物鏡；5、將光路選擇桿⑤推動(dòng)去〔選擇目鏡觀看光路；4、轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡轉(zhuǎn)盤?，使相襯光學(xué)元件與所用物鏡相匹配〔5、將光路選擇桿⑤推動(dòng)去〔選擇目鏡觀看光路；/細(xì)調(diào)焦旋鈕⑧進(jìn)展聚焦觀看,依據(jù)需要調(diào)整瞳間距⑨和屈光度⑩。物鏡4X10X、20X物鏡4X10X、20X40X相差元件PHLPH1〔PHC〕PH2四、熒光觀看1、假設(shè)需要，可先用明場(chǎng)觀看對(duì)標(biāo)本定位，再轉(zhuǎn)入熒光觀看；2BF至最低，將孔徑光闌向右撥至最小；3、轉(zhuǎn)動(dòng)熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤?，依據(jù)所用的熒光染料選擇匹配的熒光激發(fā)塊；2：熒光激發(fā)塊序號(hào)激發(fā)塊名稱放射光λ〔nm〕濾掉光λ〔nm〕1WU330-385420＜4002WB450-480515＜5003WG510-550590＜5704WBV400-440475＜4555WIY545-580610＜6006BF明場(chǎng)、相差5、將光路選擇桿⑤推動(dòng)去〔選擇目鏡觀看光路；4?5、將光路選擇桿⑤推動(dòng)去〔選擇目鏡觀看光路；/細(xì)調(diào)焦旋鈕⑧聚焦觀看，依據(jù)熒進(jìn)入光路的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路。五、CCD成像、cellSensStandard圖像更清楚；4、背景校準(zhǔn)：進(jìn)展明場(chǎng)和相差成像時(shí)執(zhí)行白平衡，熒光成像時(shí)執(zhí)行黑平衡，在樣品空白背景處畫(huà)一個(gè)小區(qū)域，軟件自動(dòng)以該處為背景對(duì)整幅圖像進(jìn)展調(diào)整，使所選區(qū)域顯示為白色或黑色；5、各成像參數(shù)設(shè)定完畢后，點(diǎn)擊拍照，儀器自動(dòng)成像；6、右鍵文檔工具欄窗口或在文件處進(jìn)展保存〔TIFJPG衡，在樣品空白背景處畫(huà)一個(gè)小區(qū)域，軟件自動(dòng)以該處為背景對(duì)整幅圖像進(jìn)展調(diào)整，使所選區(qū)域顯示為白色或黑色；5、各成像參數(shù)設(shè)定完畢后，點(diǎn)擊拍照，儀器自動(dòng)成像；六、關(guān)機(jī)1、試驗(yàn)完畢，先退出工作站；2、將透射光光強(qiáng)調(diào)整鈕③逆時(shí)針旋至最低，關(guān)閉透射光主開(kāi)關(guān)〔TH4〕①；30.5h，方能關(guān)閉汞燈高壓電源②；4、用無(wú)水乙醇擦拭鏡頭，并將物鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)至空位，清理載物臺(tái)及桌面；錄數(shù)據(jù)：放入全光盤，將數(shù)據(jù)發(fā)送至光盤，電腦右下角消滅刻錄提示，點(diǎn)擊該提示進(jìn)入，確認(rèn)待刻錄數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊“刻錄到光盤” 刻錄6、關(guān)電腦及顯示器。七、圖像處理1、標(biāo)尺：在工具欄上選擇正確的物鏡倍數(shù)，點(diǎn)擊“視圖標(biāo)尺，軟件自動(dòng)將標(biāo)尺加在圖像上，再點(diǎn)擊“圖像” 印入信息，保存即可。2、測(cè)量：點(diǎn)擊“測(cè)量” 測(cè)量工具，軟件左側(cè)顯示出測(cè)量工具欄，點(diǎn)擊選擇量結(jié)果可導(dǎo)出量結(jié)果可導(dǎo)出Excel：點(diǎn)擊測(cè)量工具欄圖標(biāo)。3、圖像疊加：翻開(kāi)擬疊加的圖“圖像----組合彩色圖像 “可用圖像”中選擇擬疊加的圖----√合并層 確認(rèn)。4、圖像拼接：按確定挨次拍攝圖像，相鄰兩張圖像的邊緣要局部重疊，4、圖像拼接：按確定挨次拍攝圖像，相鄰兩張圖像的邊緣要局部