臨床耐多粘菌素CRE菌株的分子流行病學研究

Superbug：超級細菌MRSA碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細菌（carbapenem-resistantEnterobacteriaceae，CRE）本文檔共27頁；當前第1頁；編輯于星期二\9點23分Superbug：超級細菌本文檔共27頁；當前第2頁；編輯于星期二\9點23分Superbug：超級細菌一位49歲的婦女2016年4月因尿路感染癥狀在賓夕法尼亞州的部隊醫(yī)院求醫(yī)，分離到一種能夠抵抗多種藥物的大腸桿菌菌株，攜帶有15種不同的耐藥基因，集中在兩種能在細菌之間輕松移動的質(zhì)粒上。一個質(zhì)粒含有CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；另外一個就是含有新發(fā)現(xiàn)的可怕的mcr-1基因（導致多粘菌素抗藥性的基因）。本文檔共27頁；當前第3頁；編輯于星期二\9點23分Superbug：超級細菌美國現(xiàn)首例“超級細菌”全球無任何抗生素可治！ColistinResistance1、多粘菌素之所以能堅挺到現(xiàn)在，是由于它從抗生素早期開始就是一種毒性藥物，由于副作用的緣故而很少被列入處方之中；正因為其很少被使用，細菌才沒能適應(yīng)它。2、在此之前，許多細菌已經(jīng)能夠耐受幾乎所有的抗生素，而多粘菌素則是我們最后的防線。3、而MCR-1之所以這么麻煩，是因為它為細菌提供了抵抗多粘菌素的能力。本文檔共27頁；當前第4頁；編輯于星期二\9點23分1、

WalterReed陸軍研究所的Patrick和WalterReed國家軍事醫(yī)療中心的Kurt在報告中表示，這項發(fā)現(xiàn)“預(yù)示著真正的泛耐藥病原菌即將出現(xiàn)”。2、“我們有身處‘后抗生素世界’的風險”，美國疾病控制和預(yù)防中心(CDC)主任弗里登(TomFrieden)。3、美國疾控中心人畜共患傳染病研究部門主任BethBell表示，疾控中心已經(jīng)開始與賓夕法尼亞衛(wèi)生局合作研究：“這位女士是如何攜帶上這種有著高度耐藥性的細菌？”4、賓夕法尼亞州州長TomWolf聲明確認了這起病例，以及疾控中心參與聯(lián)合調(diào)查一事。本文檔共27頁；當前第5頁；編輯于星期二\9點23分[1]HancockRE,ScottMG.Theroleofantimicrobialpeptidesinanimaldefenses.ProcNatlAcadSciUSA,2000,97:8856-8861.細菌對多粘菌素耐受的傳統(tǒng)機制本文檔共27頁；當前第6頁；編輯于星期二\9點23分細菌對多粘菌素耐受的傳統(tǒng)機制本文檔共27頁；當前第7頁；編輯于星期二\9點23分Emergenceofplasmid-mediatedcolistinresistance

mechanismMCR-1inanimalsandhumanbeingsinChina本文檔共27頁；當前第8頁；編輯于星期二\9點23分veryseriousphenomenonthatoccursnowadays

Super-superbugEmergenceofthemcr-1colistinresistancegeneincarbapenem-resistantEnterobacteriaceae（CRE)?本文檔共27頁；當前第9頁；編輯于星期二\9點23分一、有沒有耐多粘菌素的腸桿菌科細菌？二、如有耐受菌是否同時又是CRE菌株？三、菌株是否保存？CRE

(碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細菌)+mcr-1的研究本文檔共27頁；當前第10頁；編輯于星期二\9點23分CRE+mcr-1的研究

對我院（蘇州大學附屬第二醫(yī)院）2011-2015年的多粘菌素耐受菌株進行了調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)：1、有4株分離自住院病人的腸桿菌科細菌攜帶MCR-1質(zhì)粒，其中2株為MCR-1質(zhì)粒整合與含NDM-5(NewDelhimetallo-β-lactamase-5)質(zhì)粒的CRE菌株；2、

整合MCR-1質(zhì)粒的CRE菌株表現(xiàn)出對包括多粘菌素、亞胺培南、美洛培南在內(nèi)的幾乎所有抗菌藥物均耐藥，感染該菌株的患者最終由于抗生素治療無效而導致死亡。

本文檔共27頁；當前第11頁；編輯于星期二\9點23分質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗大腸埃希菌J53AZ-RSZ03,SZ04+NaN3

+多粘菌素37℃過夜單菌落SZ03,SZ04大腸埃希菌J53AZ-R(1ml)LB+NaN3

(1ml)LB+多粘菌素37℃,250r/min16~18h鑒定各取100μl菌液(2ml)LB+NaN3+多粘菌素37℃,100r/min5~6h100μl菌液+NaN3+多粘菌素37℃過夜各取100μl菌液(2ml)LB+NaN3+多粘菌素37℃,100r/min5~6h100μl菌液+NaN3+多粘菌素37℃過夜成功獲得mcr-1的轉(zhuǎn)移結(jié)合子，證實了MCR-1質(zhì)粒能夠水平轉(zhuǎn)移至受體菌。

PCR質(zhì)粒復(fù)制子分型：MCR-1質(zhì)粒為IncI2和IncX4本文檔共27頁；當前第12頁；編輯于星期二\9點23分中科院JCR分區(qū)：一區(qū)影響因子：22.433本文檔共27頁；當前第13頁；編輯于星期二\9點23分相關(guān)評論本文檔共27頁；當前第14頁；編輯于星期二\9點23分本文檔共27頁；當前第15頁；編輯于星期二\9點23分

調(diào)查分析中國CRE菌株攜帶多粘菌素抗性基因mcr-1的臨床現(xiàn)狀本文檔共27頁；當前第16頁；編輯于星期二\9點23分中美CRE合作團隊1、高CRE流行地區(qū)（北部：北京；東部：蘇州；南部：廣州）2、低流行地區(qū)（西北：銀川和西南：成都）3、邊境地區(qū)的云南省昆明市。云南與緬甸、老撾、越南接壤，又靠近印度和孟加拉國（NDM高發(fā)病率）。6家三甲附屬醫(yī)院本文檔共27頁；當前第17頁；編輯于星期二\9點23分美國Rutgers大學公共衛(wèi)生研究院Kreiswirth教授紐約斯隆凱特林紀念醫(yī)院湯一葦教授中美CRE合作團隊本文檔共27頁；當前第18頁；編輯于星期二\9點23分菌株來源菌株來自2014~2015年中國北部（北京）、東部（蘇州）、南部（廣州）、西北部（銀川）、西南部（成都和昆明）的6家三甲醫(yī)院，共264株。本文檔共27頁；當前第19頁；編輯于星期二\9點23分CRE菌株耐藥基因分析

表達mcr-1基因的CRE菌株有3株大腸桿菌(CDA6,BJ10,BJ13)、2株肺炎克雷伯菌(SZ03,SZ04)碳青霉烯酶基因mcr-1KPC+NDM+IMP+VIM+多陽陰性菌株數(shù)1346918731595本文檔共27頁；當前第20頁；編輯于星期二\9點23分MCR-1菌株多位點序列分型（MLST）肺炎克雷伯菌管家基因(rpoB,gapA,mdh,pgi,phoE,infB,tonB)大腸桿菌管家基因(adk,fumC,gyrB,icd,mdh,purA,recA)

SZ03：ST25SZ04：ST25CDA6：ST167BJ10：ST156BJ13：ST457本文檔共27頁；當前第21頁；編輯于星期二\9點23分耐藥基因接合轉(zhuǎn)移藥敏試驗123CDA6、BJ10、SZ03和SZ04攜帶的NDM-5，與NDM-1相比，該變異株具有更高的碳青霉烯酶活性。BJ13的碳青霉烯酶基因檢測結(jié)果為陰性，但是它含blaCTX-M-15和blaCMY-2，并在孔蛋白基因ompC的303位氨基酸處有一個提前終止密碼子，可以解釋其碳青霉烯酶耐藥性。CDA6、BJ10、SZ03和SZ04的mcr-1基因可以通過接合轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)入J53(AZ-R)中，而BJ13的mcr-1基因難以轉(zhuǎn)移。

CDA6、BJ10、SZ03、SZ04菌株的blaNDM-5基因也可通過接合轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)入大腸桿菌J53(AZ-R)中。mcr-1基因的轉(zhuǎn)移僅與blaNDM-5整合的IncX3質(zhì)粒緊密相關(guān)？

所有的mcr-1轉(zhuǎn)移接合子都只對粘菌素耐藥，而對其他抗生素均敏感，表明mcr-1的質(zhì)粒上不含有其他耐藥基因;blaNDM-5轉(zhuǎn)移接合子都對除氨曲南以外的所有β-內(nèi)酰胺類耐藥。CRE+MCR-1菌株本文檔共27頁；當前第22頁；編輯于星期二\9點23分本文檔共27頁；當前第23頁；編輯于星期二\9點23分1、這種耐多粘菌素的MCR-1質(zhì)粒蔓延到了CRE菌株，產(chǎn)生泛耐藥株，提示我國CRE菌株的耐藥現(xiàn)狀異常嚴峻，若想打贏抗生素耐藥性這場仗，就迫切需要更好的監(jiān)測和管理。結(jié)論與展望2、MCR-1的表達調(diào)控仍不明確，