第二紅細(xì)胞血型檢測(cè)演示文稿

第二紅細(xì)胞血型檢測(cè)演示文稿本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分優(yōu)選第二紅細(xì)胞血型檢測(cè)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分學(xué)習(xí)要求1.輸血前檢查主要包括哪些內(nèi)容？2.受血者標(biāo)本接受時(shí)的注意事項(xiàng)有哪些？3.ABO血型和RhD血型鑒定時(shí)的注意事項(xiàng)有哪些？4.抗體篩選的目的和意義是什么？5.交叉配血試驗(yàn)的影響因素有哪些？6.抗球蛋白試驗(yàn)的臨床應(yīng)用有哪些方面？7.微柱凝聚試驗(yàn)技術(shù)的原理是什么？8.常見的吸收放散試驗(yàn)的方法有哪些？9.紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要有哪些？本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分輸血是臨床上作為治療或輔助治療的手段，但不適當(dāng)?shù)难褐破份斪⒃斐刹涣己蠊?，?yán)重者可危急生命。因此在輸血前，嚴(yán)格按照相關(guān)程序?qū)κ苎吆凸┭叩难哼M(jìn)行準(zhǔn)確的輸血前血型血清學(xué)檢查才能保證受血者的安全。第一節(jié)輸血前免疫學(xué)檢查本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分目的：

輸入的血液成分在受血者的體內(nèi)發(fā)揮其有效作用.

在正常情況下，輸入的紅細(xì)胞在受血者體內(nèi)不溶血，輸入的的血漿成分不破壞受血者的紅細(xì)胞，即輸入的血液與受血者血液在免疫血液學(xué)方面“相容”，才能使受血者獲益。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分主要程序：1、受血者血液標(biāo)本的處理；2、ABO血型和RhD血型定型；3、紅細(xì)胞同種抗體篩查和鑒定；4、交叉配血試驗(yàn)；5、血小板輸注前的抗體檢查和配合試驗(yàn)；6、不規(guī)則抗體的篩選和鑒定；7、交叉配血結(jié)果的報(bào)告和發(fā)血等。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分一、受血者標(biāo)本的處理（一）標(biāo)本的采集輸血除了需要達(dá)到預(yù)期的治療效果外，必須確保輸血安全。血樣由臨床護(hù)士完成，應(yīng)嚴(yán)格遵守一次只能為一位受血抽取標(biāo)本，標(biāo)本不得從輸液管或輸液側(cè)靜脈中抽取。（二）標(biāo)本的接收輸血科技師接收血樣標(biāo)本時(shí)，應(yīng)認(rèn)真核對(duì)受血者的相關(guān)信息，盡可能了解受血者有無輸血史、藥物史、妊娠史等情況。如果有輸血史，這有必要進(jìn)一步了解最后一次輸血的日期，若3個(gè)月內(nèi)輸過血，那么供血者的紅細(xì)胞沒有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，導(dǎo)致血型定型試驗(yàn)中出現(xiàn)混合凝集的結(jié)果。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分（三）標(biāo)本的要求1.對(duì)輸血前檢查的血液標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格要求能代表受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀況，標(biāo)本還需經(jīng)鑒定和標(biāo)記，保證其準(zhǔn)確無誤地來自受血者和供血者，應(yīng)和血液申請(qǐng)單上的內(nèi)容一致。2.防止受血者血液標(biāo)本稀釋和（或）溶血，若采集過程中發(fā)生溶血?jiǎng)t不能使用。3.受血者配血試驗(yàn)對(duì)的血液標(biāo)本必須是輸血前3天采集的4.若受血者使用右旋糖酐、聚乙酰吡咯烷酮等治療，應(yīng)注意洗滌被檢紅細(xì)胞。5.每次輸血后，受血者和供血者的標(biāo)本必須保存于2~8℃至少7天。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分二、受血者和供血者ABO和Rh定型本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分上述兩種試驗(yàn)可以互相驗(yàn)證，如果兩個(gè)結(jié)果不符，應(yīng)通過進(jìn)一步試驗(yàn)確認(rèn)血型。新生兒和出生后6個(gè)月之內(nèi)的嬰兒由于血液中無ABO抗體或抗體很弱，該人群可只做正定型。新生兒血漿中可能存在來自母體的抗體，應(yīng)注意鑒別。ABO定型有時(shí)會(huì)出現(xiàn)異常結(jié)果，其主要原因有技術(shù)和操作失誤，還有受血者方面的因素。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分1.ABO定型最適的反應(yīng)溫度為4℃，但在室溫反應(yīng)良好，所以常規(guī)的ABO定型試驗(yàn)僅在室溫進(jìn)行。(1)定型方法：正、反定型的試管離心方法目前仍被認(rèn)為是最可信賴的ABO定型方法。1)定型試劑：有些ABO血型診斷試劑是以人的血清匯聚而制成的，但必須具備以下條件：第一，高效價(jià)(1：128)的IgM抗A或抗B。第二，具較好的親和性并不含冷凝集素。第三，必需具有檢測(cè)A2，A2B血型的能力。第四，血清必須通過HIV，HCV，HBV等檢查或經(jīng)病毒滅活。另外一些ABO定型試劑是由來自培養(yǎng)細(xì)胞株的單克隆抗體所制成。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分正反定型不符分析的基本程序1、出現(xiàn)正反定型不符時(shí)，首先重復(fù)試驗(yàn)；2、重新采集血液標(biāo)本；3、查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等；4、多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞或試劑紅細(xì)胞，應(yīng)換用新開啟的確定為無細(xì)菌污染的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞；5、應(yīng)用抗-AB、抗-A1或抗-H檢測(cè)紅細(xì)胞；6、分析O型篩選細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果，確定是否是同種異型或冷自身抗體干擾正反定型結(jié)果。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分ABO正反定型的臨床應(yīng)用1、實(shí)施輸血治療的首要步驟；2、組織器官移植；3、母、子ABO系統(tǒng)血型不合造成的新生兒溶血病的篩查。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分ABO血型正反定型的意義：1、反定型能夠復(fù)檢正定型血型結(jié)果的準(zhǔn)確性，糾正漏檢、誤報(bào)；2、發(fā)現(xiàn)正定型時(shí)難以發(fā)現(xiàn)的具有弱抗原的亞型；3、能夠糾正某些患者因疾病原因造成的紅細(xì)胞抗原減弱而造成的血型錯(cuò)誤；4、能夠排除獲得性抗原（如類B抗原）和冷凝集現(xiàn)象對(duì)紅細(xì)胞定型的干擾；5、發(fā)現(xiàn)一些亞型中的不規(guī)則抗體。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分

2)ABO亞型的鑒定：1、常見亞型A亞型有：A2、A3、AX、AM、AY

B亞型有：B2、B3、BX、BM

AB亞型有：A2B、A3B、AXB、AB2、AB3、CISAB2、ABO亞型的鑒定通常使用下列試劑抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AB、A1紅細(xì)胞、A2紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞。有些工作者在定型試驗(yàn)中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗AB抗血清，以避免錯(cuò)誤地把弱反應(yīng)性A或B型紅細(xì)胞分類為O型。一般抗AB試劑對(duì)Ax型紅細(xì)胞可增加凝集反應(yīng)的強(qiáng)度。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分(一)ABO定型試驗(yàn)中的常見問題：造成這種正反定型不一致的原因主要有：1)技術(shù)和管理錯(cuò)誤：這是ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果的主要原因，包括：標(biāo)本或試劑搞錯(cuò)；器材不潔；試劑污染或失效；離心過度或不足；陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別；漏加試劑；結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤；細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)。2)血清異常：血清蛋白引起緡錢狀形成，影響反定型結(jié)果3)紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。4)異?；蛐停篈BO亞型的檢查中，A、B抗原可能為弱抗原，難以檢出。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分5)近期輸血：試驗(yàn)前曾輸入過其它ABO血型不一致的血液，使血液標(biāo)本成為混合血型的紅細(xì)胞懸液，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。6)嵌合體血型：這種血型者體內(nèi)有兩類血型紅細(xì)胞群體，定型時(shí)可以出現(xiàn)“混合外觀凝集”現(xiàn)象。7)疾病因素導(dǎo)致抗原減弱：某些白血病患者和難治性貧血患者中，ABO血型系統(tǒng)的抗原性可受到抑制，檢出困難。8)紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。9)獲得性B：由于革蘭陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分10)血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血型物質(zhì)的濃度很高，可中和抗A和抗B定型試劑，要得到正確的正定型結(jié)果，必須洗滌紅細(xì)胞多次。11)近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療：由于使用大量的非同型的血漿作置換治療，標(biāo)本血清中含有所輸供體提供的抗A或抗B抗體，造成反定型錯(cuò)誤。12)異常的血漿蛋白：受檢者血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。13)不規(guī)則抗體的存在：受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，與試劑紅細(xì)胞上其他血型抗原系統(tǒng)的抗原起反應(yīng)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分14)低丙種球蛋白血癥：低丙種球蛋白血癥(丙種球蛋白量減低)病例，可能會(huì)因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時(shí)不凝集或弱凝集反應(yīng)。15)藥物等因素：藥物、右旋糖醉及靜脈注射某些造影劑可引起紅細(xì)胞凝集或類似凝集。16)年齡因素：免疫系統(tǒng)尚未健全的嬰兒、由母親被動(dòng)獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常的結(jié)果。17)防腐劑因素：患者體內(nèi)可能含有對(duì)防腐劑中的成分或?qū)鞈医橘|(zhì)的抗體，導(dǎo)致ABO定型差錯(cuò)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分（二）Rh(D)定型和定型試驗(yàn)中應(yīng)注意的問題：Rh定型主要鑒定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。

Rh系統(tǒng)是最為復(fù)雜得多一個(gè)系統(tǒng)，抗原達(dá)50多種，涉及臨床的主要有D、C、c、E、e五個(gè)抗原，其中D抗原的免疫原性最強(qiáng)，僅次于A或B抗原。D>E>c>C>e1、Rh定型血型鑒定方法有：玻片法、試管法、微量板法、微柱凝膠法等。目前大部分醫(yī)院都使用微柱凝膠卡式血型鑒定，方法簡(jiǎn)便快捷，準(zhǔn)確度較高。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分(1)導(dǎo)致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因：1)受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本血清中含有引起紅細(xì)胞凝集的因子。2)受檢細(xì)胞與抗血清孵育的時(shí)間過長(zhǎng)，含高蛋白的定型試劑會(huì)引起緡錢狀形成。3)標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或小的纖維蛋白凝塊，誤判為陽(yáng)性。4)定型血清中含有事先未被檢測(cè)的其它特異性抗體，造成假陽(yáng)性定型結(jié)果。5)多凝集細(xì)胞造成定型的假陽(yáng)性。6)鑒定用器材或抗血清被污染，造成假陽(yáng)性。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分(2)可能出現(xiàn)假陰性的原因1)受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清比例失調(diào)。2)漏加或錯(cuò)加定型血清。3)定型血清的使用方法錯(cuò)誤，沒有按說明書進(jìn)行。4)離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過度，搖散微弱的凝集。5)抗血清保存不當(dāng)，導(dǎo)致失效。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分(三)弱D型(Du型)血型及其鑒定：Du型抗原是RhO(D)的弱抗原，這種抗原通常與大部分鹽水抗D試劑不產(chǎn)生直接凝集反應(yīng)，而與部分的IgG抗D血型用間接抗球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)陽(yáng)性。因此當(dāng)我們初次得到Rh陰性結(jié)果時(shí)，必須進(jìn)行作Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn)，即用三種不同批號(hào)的IgG抗D定型，如果全部陰性方可認(rèn)為該被檢者為Rh陰性，否則，只要有一批為陽(yáng)性，則可認(rèn)為是Du型。弱D人群作為獻(xiàn)血者按照RhD陽(yáng)性對(duì)待，其血液只能給Rh陽(yáng)性受血者輸注；作為受血者按照RhD陰性對(duì)待，只能接受RhD陰性血液。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分三、不規(guī)則抗體篩選和鑒定一、概念：1、不規(guī)則抗體：是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗體，也稱意外抗體。不規(guī)則抗體包括同種抗體和自身抗體。2、自身抗體：受血者體內(nèi)產(chǎn)生的抗體，針對(duì)自己本身的紅細(xì)胞抗原這類抗體不僅僅與自身紅細(xì)胞凝集，通常也與多數(shù)紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)。3、同種抗體：不是針對(duì)自身抗原，而是與同種異基因的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，即與某些獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)。

本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分二、不規(guī)則抗體的篩查方法抗體篩選試驗(yàn)的原則是讓受檢的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37℃中有反應(yīng)的抗體1.鹽水介質(zhì)法：主要用于IgM類抗體的篩查。優(yōu)點(diǎn)是：方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)單、成本低廉。缺點(diǎn)是：靈敏度低2.聚凝胺法：優(yōu)點(diǎn)：與水鹽介質(zhì)法比靈敏度有所提高。3.抗球蛋白試驗(yàn)：缺點(diǎn)：操作繁瑣、工作量大、耗時(shí)等4.酶法：能暴露隱蔽抗原，增強(qiáng)一些稀有抗原檢測(cè)。但可能會(huì)破壞有些抗原，影響檢測(cè)。目前臨床是已不用5.微柱凝膠卡式檢測(cè)法本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分三、不規(guī)則抗體的鑒定抗體篩選試驗(yàn)用的試劑篩選紅細(xì)胞，通常是2或3個(gè)人份的O型紅細(xì)胞成為一套試劑，每套試劑篩選紅細(xì)胞中至少有以下常見的抗原：D、C、E、c、e、M、N，條件不足的實(shí)驗(yàn)室不一定具備Lua、V、Cw、Kpa、Jsa類的抗原。一旦抗體被檢出，應(yīng)作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性?？贵w鑒定實(shí)驗(yàn)包含以下主要內(nèi)容：(1)自身細(xì)胞檢查：觀察患者(受者)的血清與患者(受者)自身細(xì)胞的反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體或自身抗體和同種抗體二者同時(shí)存在。(2)譜紅細(xì)胞：使用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞，應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)，檢測(cè)患者的血清，確定其抗體的特異性。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分抗體鑒定試驗(yàn)結(jié)果的解釋及處理：1.與譜細(xì)胞反應(yīng)明顯，確定為單一抗體或無法確定為單一抗體，應(yīng)加以鑒別。2.與譜細(xì)胞呈弱反應(yīng)，結(jié)果不明確（1）分析結(jié)果：①是否符合劑量效應(yīng)②是否有某些個(gè)體差異抗原的抗體譜細(xì)胞是否新鮮（2）改變?cè)囼?yàn)方法:①使用高靈敏度的方法重復(fù)試驗(yàn)②添加試劑后重復(fù)實(shí)驗(yàn)③帶抗體增強(qiáng)后重復(fù)試驗(yàn)④適當(dāng)增加血清與紅細(xì)胞比例，適當(dāng)增加孵育時(shí)間本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分3.與所有譜細(xì)胞反應(yīng)，自身細(xì)胞陰性（1）強(qiáng)度不一致：可能存在混合抗體（2）強(qiáng)度一致：抗體可能為專于O細(xì)胞反應(yīng)的抗體（如：抗-I、抗-H、抗-HI）可能針對(duì)高頻抗原的抗體可能針對(duì)譜細(xì)胞的抗體4.與所有譜細(xì)胞反應(yīng)，自身細(xì)胞陽(yáng)性（1）存在自身抗體（2）同種和自身抗體同時(shí)存在（3）冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集紅細(xì)胞本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分（4）假凝劑：在干擾因子的作用下一可造成紅細(xì)胞假凝集（5）酶引起的多凝集（6）補(bǔ)體的影響5.與譜細(xì)胞不反應(yīng)，自身細(xì)胞陽(yáng)性

可能是自身抗體或C?陽(yáng)性本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分四、抗體篩查和鑒定的影響因素1.抗體篩查和鑒定細(xì)胞的質(zhì)量

篩查細(xì)胞不包括低頻率抗原，不能檢出低頻率抗原。譜細(xì)胞：用于抗體鑒定的試劑紅細(xì)胞。在選擇不規(guī)則抗體篩查或鑒定細(xì)胞時(shí)，應(yīng)符合本地區(qū)不規(guī)則抗體分布的特點(diǎn)。2.試驗(yàn)方法

IgM抗體在4℃，凝集強(qiáng)度明顯大于室溫，37℃會(huì)有減弱3.抗體的特異性抗體篩查試驗(yàn)為陰性，并不意味著被檢血清中一定沒有抗體篩查細(xì)胞漏檢ABO亞型抗體（如抗-A?）本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分五不規(guī)則抗體鑒定時(shí)遇見的的問題1.不規(guī)則抗體篩查陰性，輸血后發(fā)現(xiàn)溶血（1）交叉配血假陰性（2）抗球蛋白試驗(yàn)不規(guī)則抗體篩查假陰性試劑保存不當(dāng)洗滌不充分實(shí)驗(yàn)操作④紅細(xì)胞濃度過高造成凝集減弱或紅細(xì)胞濃度過低造成凝集不易被觀察到2.不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性，抗體特異性難以鑒定（1）抗體篩查假陽(yáng)性：①離心不當(dāng)②試管污染③硅膠管引起的凝集（2）譜細(xì)胞單一：應(yīng)采用3個(gè)以上不同供應(yīng)商的譜細(xì)胞系，排查抗體的特異性。

本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分四、交叉配血試驗(yàn)（一）要求和內(nèi)容交叉配血的要求：主側(cè)配血要求：絕對(duì)不可以有凝集或溶血現(xiàn)象。次測(cè)配血要求：供血者血清加受血者紅細(xì)胞在允許范圍內(nèi)，可以有凝集現(xiàn)象，但不可以有溶血。凝集不凝集本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分

交叉配血試驗(yàn)的內(nèi)容患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)主側(cè)配血用患者血清與供者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)次測(cè)配血供血者血清與患者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分交叉配血的目的交叉配血試驗(yàn)是輸血前必要的步驟，主要是檢查受血者血清中有無能破壞供血者紅細(xì)胞的抗體。主要目的是為了防止輸血后產(chǎn)生溶血性反應(yīng)。盡可能確保對(duì)人和一個(gè)病人來說，輸了供血者的血不會(huì)引起有害反應(yīng)，并且使紅細(xì)胞在輸注后能保持最長(zhǎng)的存活時(shí)間。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分（二）結(jié)果的解釋及處理1.抗體篩查陰性，交叉配血相容：絕大部分標(biāo)本抗體篩查陰性，交叉配血也是相容的。2.抗體篩查陰性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽(yáng)性（1）復(fù)查血型（2）主側(cè)凝集類B抗原（3）血清中可能含有一種ABO抗體，必要時(shí)可以做ABO亞型鑒定（4）受血者血清中含有同種抗體本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分3.抗體篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽(yáng)性（1）自身對(duì)照試驗(yàn)陰性：受血者體內(nèi)有同種不規(guī)則抗體。（2）自身對(duì)照試驗(yàn)陽(yáng)性：受血者血清內(nèi)可能有自身抗體或同時(shí)存在不規(guī)則抗體。（三）影響因素

①離子干擾②溫度③操作不規(guī)范④離心不當(dāng)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分第二節(jié)鹽水介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)常用于血型鑒定、血清中IgM類抗體的篩查和鑒定、鹽水介質(zhì)的交叉配血等?；痉椒?.平板法用于ABO血型和RhD抗原的定型特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速，但易污染環(huán)境。2.試管法為定型試驗(yàn)方法，也可于半定量試驗(yàn)。是輸血前檢驗(yàn)最常用的試驗(yàn)方法。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、易學(xué)，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。3.微孔板法為定性試驗(yàn)方法。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分

鹽水介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分第三節(jié)酶處理實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理：在酶的作用下切斷帶有負(fù)電荷的羧基基團(tuán)的唾液酸，降低Zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間的距離。增強(qiáng)IgG抗體對(duì)紅細(xì)胞的凝集。常用對(duì)的酶：菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分酶介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)主次側(cè)均加酶酶上海市血液中心血本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分37℃水浴30分鐘37℃離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分結(jié)果的判斷（1）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管凝集，被檢管凝集為陽(yáng)性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。（2）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，實(shí)驗(yàn)失敗分析原因，重新實(shí)驗(yàn)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分第四節(jié)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)技術(shù)一、基本原理抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs實(shí)驗(yàn)）主要用于檢測(cè)血清中的不完全抗體如：IgG、IgA和（或）補(bǔ)體如：C3、C4。在鹽水介質(zhì)中，不完全抗體只能致敏紅細(xì)胞，而不能使紅細(xì)胞出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)，加入抗球蛋白試劑后，抗球蛋白分子的Fab片段與紅細(xì)胞表面的受體結(jié)合，而產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集，因此采用此方法可以檢測(cè)出血清中是否存在不完全抗體。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分抗球蛋白試驗(yàn)原理圖本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分

二、分類及應(yīng)用

抗球蛋白試驗(yàn)直接間接致敏紅細(xì)胞的不完全抗體、補(bǔ)體血清中的不完全抗體應(yīng)用HDN的診斷、AIHADE的診斷、藥物誘發(fā)型溶血病的診斷交叉配血及血型鑒定、器官移植、等本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分

抗球蛋白配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)37℃37℃水浴30分鐘三洗

本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分抗球蛋白配血方法加抗球蛋白抗球蛋白試劑上海市血液中心血離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分三、結(jié)果的判斷直接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽(yáng)性。（2）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管不凝集，須做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果。（3）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，結(jié)果不可信不能發(fā)出報(bào)告，分析原因后重做試驗(yàn)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分間接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽(yáng)性對(duì)照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對(duì)照管不呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽(yáng)性結(jié)果，表示被檢者血清中含有抗體。（2）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管出現(xiàn)凝集，實(shí)驗(yàn)失敗，分析原因重做試驗(yàn)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分

四、注意事項(xiàng)（一）直接抗球蛋白試驗(yàn)1.抗球蛋白血清應(yīng)按說明書使用最適稀釋度，避免出現(xiàn)前帶現(xiàn)象而誤判為陰性。2.結(jié)果判讀時(shí)應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)拖拉，細(xì)胞扣搖散后，如肉眼未見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物涂于玻片上，在在顯微鏡下觀察確認(rèn)陰性。3.被檢標(biāo)本需用EDTA抗凝，避免出現(xiàn)假陽(yáng)性；標(biāo)本不宜久置，防止紅細(xì)胞上已致敏的抗體游離到血漿中，造成假陰性或陽(yáng)性程度降低。4.紅細(xì)胞表面存在蛋白質(zhì)就會(huì)與抗球蛋白結(jié)合。因此受檢紅細(xì)胞一定要充分洗滌，除去血清蛋白，避免假陰性的產(chǎn)生。5.如需進(jìn)一步分析體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的免疫球蛋白的類型，可以分別以抗IgG、抗C3單價(jià)抗球蛋白血清進(jìn)行試驗(yàn)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分（二）間接抗球蛋白試驗(yàn)1.紅細(xì)胞洗滌過程中不宜中途停止，每次加生理鹽水前要是紅細(xì)胞完全懸?。幌礈爝^程中防止交叉污染；應(yīng)充分洗滌，避免殘留抗體部分中和抗球蛋白試劑而產(chǎn)生假陰性。2.振搖試管不宜用力過大，避免將松散紅細(xì)胞凝塊搖散，使強(qiáng)陽(yáng)性結(jié)果誤判為弱陽(yáng)性結(jié)果，弱陽(yáng)性結(jié)果誤判為陰性，對(duì)于弱陽(yáng)性結(jié)果觀察細(xì)胞扣是否出現(xiàn)缺口來判讀。3.離心后應(yīng)立即看結(jié)果，不宜久置。4.致敏時(shí)間：30-60分鐘，不超過90分鐘

本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分三、抗球蛋白實(shí)驗(yàn)的影響因素一、親和力親和力常數(shù)越高，抗原抗體反應(yīng)致敏階段的抗體水平越高二、孵育時(shí)間和溫度37℃孵育30-60分鐘三、離子強(qiáng)度在單純的離子強(qiáng)度溶液中，可增強(qiáng)抗體的結(jié)合作用，孵育時(shí)間將縮短到15～30分鐘四、抗原、抗體的比例2滴血清對(duì)1滴2％～5％的紅細(xì)胞懸液五、洗滌應(yīng)盡量去除上清液，降低未結(jié)合的免球蛋白。六、體外補(bǔ)體致敏七、紅細(xì)胞自身凝集本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

聚凝胺實(shí)驗(yàn)技術(shù)是一種快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)紅細(xì)胞不完全抗體的方法，可用來檢測(cè)IgG抗體，但I(xiàn)gG抗體的抗-K抗體除外。一、實(shí)驗(yàn)原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子云，促進(jìn)血清（漿）中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價(jià)陽(yáng)離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會(huì)因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會(huì)分散。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)室溫放置1分鐘主次側(cè)均加聚凝胺Polybrene上海市血液中心血本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引起紅細(xì)胞非特異性凝集重懸液上海市血液中心血主次側(cè)均加重懸液看結(jié)果陽(yáng)性陰性本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分二、應(yīng)用范圍

血型鑒定、抗體篩查及交叉配血試驗(yàn)三、特點(diǎn)靈敏、速度快、準(zhǔn)確、操作要求高。四、注意事項(xiàng)1.不能用含有枸櫞酸鈉和肝素抗凝標(biāo)本?。?！2.用聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)交叉配血，出現(xiàn)不配合時(shí)，要用抗球蛋白試驗(yàn)重做，結(jié)果不一致時(shí)，以抗球蛋白試驗(yàn)為主。3.聚凝胺只能是正常紅細(xì)胞發(fā)生凝集，對(duì)缺乏唾液酸的細(xì)胞（如：T細(xì)胞及B細(xì)胞）無作用。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)原理

凝膠具有分子篩效應(yīng)和親和效應(yīng)，在微柱凝膠介質(zhì)中紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合，利用凝膠的空間位阻經(jīng)低速離心，凝集的紅細(xì)胞懸浮在凝膠的上層，而未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠的底部（管底尖部）。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分一、微柱凝膠試驗(yàn)原理

將紅細(xì)胞和抗血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央，證明發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)性,游離的紅細(xì)胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部，證明未發(fā)生凝集判斷陰性.

操作及結(jié)果的判定本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分二、應(yīng)用1.抗球蛋白試驗(yàn)直接抗球蛋白試驗(yàn)和間接抗球蛋白試驗(yàn)。2.ABO血型鑒定可做單純正定型，也可同時(shí)做正反定型。3.其他血型系統(tǒng)檢測(cè)如Rh其他抗原（CcEe）定型三、特征及優(yōu)點(diǎn)1.簡(jiǎn)便2.準(zhǔn)確結(jié)果清晰明確，可重復(fù)性強(qiáng)。3.敏感4.結(jié)果保存時(shí)間長(zhǎng)5.標(biāo)本用量少6.標(biāo)準(zhǔn)化7.安全本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第61頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分四、微柱凝集試驗(yàn)中可能存在的問題1.抗凝劑不足或不含抗凝劑的血漿標(biāo)本常出現(xiàn)假陽(yáng)性。2.實(shí)驗(yàn)室溫度較低時(shí)，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。3.抗原、抗體過少、過弱；抗原、抗體比例不當(dāng)時(shí)易出現(xiàn)假陰性。4.離心力過大時(shí)，容易使弱陽(yáng)性成為陰性格局。5.溶血反應(yīng)：

①反應(yīng)液是低滲溶液②溫度過冷或過熱③紅細(xì)胞或抗體被污染

④其他可使紅細(xì)胞破壞的理化因素本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第62頁(yè)；編輯于星期二\19點(diǎn)49分第七節(jié)吸收放散試驗(yàn)一、概念1.吸收試驗(yàn):抗原與抗體的結(jié)合是特異性的，因此具有抗體活性的血清加入相應(yīng)抗原后，抗體的活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗(yàn)。2.放散試驗(yàn)是抗原與抗體的結(jié)合是可逆的，在物理?xiàng)l件改變時(shí)，抗體又會(huì)從抗原抗體復(fù)合物上分離下來，將抗體由抗原抗體復(fù)合物上分離下來的試驗(yàn)稱為放散試驗(yàn)本