第三章 動物細(xì)胞工程（背誦版）【 核心知識每日必背 】高二生物 提升必背（浙科版2019選擇性必修3）

動物細(xì)胞工程第三章動物細(xì)胞工程【動物細(xì)胞培養(yǎng)】①動物細(xì)胞培養(yǎng)原理：細(xì)胞增殖②動物細(xì)胞生長特點(diǎn)：貼壁生長、存在接觸抑制（離體）、液體懸浮培養(yǎng)（搖床的轉(zhuǎn)速和溫度可以調(diào)節(jié)）③動物細(xì)胞培養(yǎng)基：添加動物血清/雞胚浸出液（天然成分）、葡萄糖；添加抗生素（確保無菌條件）CO2培養(yǎng)箱（CO2調(diào)節(jié)PH——5%CO2+95%空氣）；④動物細(xì)胞克?。骸獊碓磫渭?xì)胞—克隆后的細(xì)胞群是一個純系，遺傳性狀均一、基因型一致、表現(xiàn)的性狀相似。⑤動物細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)：原代培養(yǎng)+傳代培養(yǎng)（傳代一次——細(xì)胞會分裂很多很多次）⑥細(xì)胞系：有限細(xì)胞系連續(xù)細(xì)胞系：連續(xù)傳代的細(xì)胞——包括良性細(xì)胞系（保留接觸抑制）和惡性細(xì)胞系惡性細(xì)胞系能無限增殖，具有不死性，無接觸抑制等特性⑦細(xì)胞株一般具有恒定的染色體組型，在連續(xù)傳代中可能會發(fā)生遺傳物質(zhì)的改變，使遺傳性狀難以保持穩(wěn)定1個祖細(xì)胞——經(jīng)過克隆培養(yǎng)——細(xì)胞株（遺傳物質(zhì)均一的細(xì)胞群）⑧動物細(xì)胞懸液/單個動物細(xì)胞的制備：胰蛋白酶/膠原蛋白酶—動物細(xì)胞間存在膠原纖維（蛋白質(zhì)）⑨胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)——添加動物血清+飼養(yǎng)層細(xì)胞（胚胎成纖維細(xì)胞：全能性高于體細(xì)胞）【例】可以通過液體懸浮培養(yǎng)/克隆培養(yǎng)獲得特定細(xì)胞系以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn)?！纠慨?dāng)細(xì)胞發(fā)生貼壁和接觸抑制現(xiàn)象時(shí),加入胰酶可使其脫壁分散,處理一段時(shí)間后添加血清以終止酶解反應(yīng)?！纠靠蒲腥藛T通過大量培養(yǎng)特定的細(xì)胞系實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因矮牽牛中重要次生代謝產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn)?！纠?含有“敲入”序列的豬胚胎成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng),為提高克隆成功率,可向培養(yǎng)基中添加血清和飼養(yǎng)層細(xì)胞、激素(寫2點(diǎn)),貼滿瓶壁的細(xì)胞常用胰蛋白酶消化處理,以便進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(5)將含有“敲入”序列的豬胚胎成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核導(dǎo)入去核的卵母細(xì)胞,在此之前,需要對豬胚胎成纖維細(xì)胞做特殊處理營養(yǎng)限制性培養(yǎng),以提高實(shí)驗(yàn)成功率?！締慰寺】贵w的制備】①最大優(yōu)點(diǎn)：純度高、可大量制備，②應(yīng)用時(shí)具有的特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高的制備B淋巴細(xì)胞懸液——不用加胰蛋白酶（因?yàn)榱馨图?xì)胞在體內(nèi)懸浮生長）過程：B淋巴細(xì)胞(選自小鼠脾臟)+骨髓瘤細(xì)胞(經(jīng)過毒性篩選，缺少DNA輔助途徑的瘤細(xì)胞)動物細(xì)胞融合技術(shù)（滅活的仙臺病毒/聚乙二醇）第一次篩選:利用HAT選擇培養(yǎng)基（自然選擇）（瘤瘤、瘤B、BB、多細(xì)胞聚合體等細(xì)胞中）A:氨基蝶呤：葉酸的拮抗劑，阻斷瘤細(xì)胞合成DNA雜交瘤細(xì)胞第二次篩選：抗原—抗體雜交（需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)+抗體檢測（可多次檢測））產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)（不加動物血清——成分復(fù)雜）或小鼠注入腹腔（抽取腹水）體內(nèi)培養(yǎng)（小鼠需要注射免疫抑制劑：why？小鼠易于接納雜交瘤細(xì)胞，避免免疫排斥）體外培養(yǎng)法：將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，雜交瘤細(xì)胞合成并分泌單克隆抗體，收集上清液，離心去除細(xì)胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。單克隆抗體（效應(yīng)B細(xì)胞分泌）【例】人體內(nèi)抗體種類繁多，且抗體基因在細(xì)胞內(nèi)一般成簇存在。獲取人抗體基因可從效應(yīng)B細(xì)胞中提取出相應(yīng)全部mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成;或通過設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)獲得。(6)途徑一利用胚胎干細(xì)胞作為受體細(xì)胞，原因是胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性特點(diǎn)。為讓抗體基因只在嵌合鼠乳汁中表達(dá)，可將抗體基因與小鼠乳清酸性蛋白基因的啟動子部位結(jié)合，構(gòu)建出乳腺特異性表達(dá)載體。(7)途徑二將小鼠抗體基因剔除的目的小鼠自身的抗性基因不表達(dá)，只表達(dá)人的抗體是獲得的抗體比途徑一的抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高優(yōu)點(diǎn)?！九咛スこ獭渴芫ň炎R別依賴于細(xì)胞膜表面的特異性相互識別的糖蛋白）：體內(nèi)受精發(fā)生于輸卵管優(yōu)良品種雌性（超數(shù)排卵技術(shù)——促性腺激素）（場所：輸卵管、子宮角）獲得次級卵母細(xì)胞（培養(yǎng)到中期II）與獲能處理的精子（精子不能直接使用）受精作用受精卵胚激活胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)—不同胚胎發(fā)育階段需要不同營養(yǎng)物質(zhì)（目前無全體外胚胎培養(yǎng)技術(shù)）早期胚胎（囊胚期）——胚胎分割（獲得更多相同胚胎）胚胎移植技術(shù)（一般不會引起免疫排斥反應(yīng)）場所：子宮一般品種的受體雌性（同期發(fā)情處理——孕激素）妊娠——妊娠率和產(chǎn)仔率受代孕母體的影響個體妊娠率和產(chǎn)仔率影響因素：代孕母體的發(fā)情特征明顯、營養(yǎng)狀況、激素水平、子宮內(nèi)部的環(huán)境、疾病，胚胎移植時(shí)，胚胎要盡可能分散移植到兩側(cè)的輸卵管或子宮角，使得胚胎均勻分布【判斷】內(nèi)細(xì)胞團(tuán)可以發(fā)育成成體的所有組織和器官？對（拓展）胚胎發(fā)育過程中，囊胚期開始分化形成內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層試管動物涉及的技術(shù)：體外受精+胚胎體外培養(yǎng)+胚胎移植（拓展）早期胚胎的來源受精作用2.試管受精3.胚胎分割（切割針——切割囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)——酶解法：胰蛋白酶——但是不能對囊胚使用）【胚胎分割】胚胎分割——切割囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)——切割時(shí)期：8細(xì)胞時(shí)期、囊胚期（受精卵、原腸胚不可切割）——酶解法處理內(nèi)細(xì)胞團(tuán)——囊胚不能酶解法【胚胎干細(xì)胞核移植】胚胎干細(xì)胞—具有發(fā)育的全能性—取自囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)核移植：胚胎干細(xì)胞（顯微操作儀）核移植到去核卵細(xì)胞中（卵細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中也有遺傳物質(zhì)），經(jīng)過胚激活、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植——受體——克隆動物【蛋白質(zhì)工程】根據(jù)蛋白質(zhì)功能—設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)——推測其氨基酸序列——根據(jù)中心法則逆推基因的核苷酸序列——利用基因工程技術(shù)改變DNA上特定位點(diǎn)的核苷酸序列——將改造的基因?qū)胧荏w細(xì)胞表達(dá)【干擾素】干擾素——大腸桿菌、酵母菌、白細(xì)胞、t淋巴細(xì)胞均可以產(chǎn)生干擾素——間接殺死病毒【例】“篩選”是生物學(xué)研究中常用的技術(shù)手段。下列敘述錯誤的是(A)A.單倍體育種中，需要通過表現(xiàn)型對單倍體植株進(jìn)行篩選B.利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，需要在重組質(zhì)粒上設(shè)計(jì)不同的標(biāo)記基因?qū)r(nóng)桿菌和植物細(xì)胞進(jìn)行篩選C.制備單克隆抗體時(shí)，第一次和第二次篩選的目的和原理都不同D.用鑒別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基對微生物進(jìn)行篩選時(shí)，有時(shí)需要加入特定的化學(xué)物質(zhì)【例】為更好地研究新冠患者的病癥及治療辦法,我國科學(xué)家成功研發(fā)了新冠病毒小鼠模型。已知新冠病毒通過識別人肺部細(xì)胞表面的受體