基因工程的原理和技術(shù)

基因工程的原理和技術(shù)選修3現(xiàn)代生物科技專題第一章基因工程問題1：限制性核酸內(nèi)切酶的作用特點(diǎn)？問題2：載體－質(zhì)粒需要具備什么條件？問題3：如何構(gòu)建重組DNA分子？

前回課顧目的基因載體重組DNA分子重組DNA分子的構(gòu)建如何讓大腸桿菌生產(chǎn)人的生長激素？步驟03010204獲取目的基因?qū)⒅亟MDNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞目的基因的表達(dá)05形成重組DNA分子

第一部分獲取目的基因PART0101獲得目的基因的方法：已知序列未知序列化學(xué)方法合成利用PCR技術(shù)擴(kuò)增從基因文庫獲得人工合成基因的方法反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列目的基因

基因DNA文庫的構(gòu)建

將總DNA經(jīng)過酶解，分離不同長短的DNA片段。包含的基因片段分別克隆在質(zhì)粒或噬菌體載體上，轉(zhuǎn)入細(xì)菌或體外包裝到噬菌體顆粒上便構(gòu)成了該生物的基因文庫。循環(huán)變性退火延伸目的基因的擴(kuò)增呈指數(shù)形式擴(kuò)增（2n）PCR技術(shù)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)?？梢垣@得大量的目的基因。

第二部分形成重組DNA分子PART0202重組DNA分子的形成：質(zhì)粒DNA分子同種限制酶一個切口兩個粘性末端兩個切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）思考：目的基因、運(yùn)載體質(zhì)粒經(jīng)DNA連接酶處理，兩兩結(jié)合可能有幾種產(chǎn)物？1、目的基因與目的基因結(jié)合；2、質(zhì)粒與質(zhì)粒結(jié)合；3、目的基因與質(zhì)粒結(jié)合。思考：如何避免自身連接（自身環(huán)化）？

第三部分將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞PART0303思考：常用的受體細(xì)胞？導(dǎo)入方法？導(dǎo)入過程？將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增受體細(xì)胞：細(xì)菌CaCl2細(xì)胞壁的通透性增大重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞顯微注射技術(shù)提純基因表達(dá)載體體外顯微注射入受精卵受精卵移植

第四部分篩選含有目的基因的受體細(xì)胞

PART0404抗四環(huán)素基因重組DNA四環(huán)素生長被抑制正常生活四環(huán)素

作業(yè)本試題：如下圖是將人的生長激素基因?qū)爰?xì)菌B細(xì)胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖篩選菌落的方法—影印法

第四部分目的基因的表達(dá)

PART05051、特定性狀的產(chǎn)生2、產(chǎn)生特定的產(chǎn)物遺傳信息的傳遞過程（信息流）——DNA（基因）mRNA轉(zhuǎn)錄翻譯遺傳信息性狀蛋白質(zhì)中氨基酸排列順序蛋白質(zhì)DNA中脫氧核糖核苷酸的排列順序RNA中核糖核苷酸的排列順序逆轉(zhuǎn)錄中心法則遺傳密碼課堂小結(jié)123基因工程目的基因的獲取形成重組DNA分子將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞基本操作程序45篩選含有目的基因的受體細(xì)胞目的基因表達(dá)期待下一節(jié)課！思考：干擾素是一種抗病毒藥物，其化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，假如現(xiàn)在要用大腸桿菌來生產(chǎn)抗病毒干擾素，如何操作？(畫圖講解)目的基因？載體？受體細(xì)胞？

從人的淋巴細(xì)胞中提取干擾