色譜柱的正確使用與維護(hù)

色譜柱的正確使用與維護(hù)天美科技有限公司TECHCOMPLTD.1第一頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三很多情況下，高效液相色譜系統(tǒng)出現(xiàn)故障的根本原因在于色譜柱出現(xiàn)不正常的現(xiàn)象，而與儀器本身無(wú)關(guān)！天美科技有限公司TECHCOMPLTD.2第二頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三打開(kāi)新色譜柱的包裝打開(kāi)包裝，首先用“運(yùn)輸試劑”沖洗色譜柱1~2小時(shí)，流速0.5ml/min。大約相當(dāng)于10~20倍的柱體積。所謂“運(yùn)輸試劑”是指色譜柱出廠后柱管內(nèi)封存的試劑，每種柱子所用的試劑不相同。對(duì)于常用的C18柱，這種試劑采用甲醇即可。其它類型的色譜柱看其相應(yīng)說(shuō)明書(shū)而定。色譜柱如果長(zhǎng)期不用，沖洗干凈之后，也應(yīng)該用該種“運(yùn)輸試劑”充滿，然后用堵頭封好保存。天美科技有限公司TECHCOMPLTD.3第三頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱的測(cè)試新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試：使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上的測(cè)試條件和樣品來(lái)測(cè)定該色譜柱的柱效，看是否達(dá)到要求。并且，在以后的使用過(guò)程中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試，以隨時(shí)判斷其柱效好壞。注意記錄新柱子在常規(guī)分析條件下的操作壓力！天美科技有限公司TECHCOMPLTD.4第四頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱的平衡正式做實(shí)驗(yàn)之前，用流動(dòng)相平衡色譜柱，直到獲得穩(wěn)定的基線。緩沖鹽或離子對(duì)試劑濃度如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡。每天用足夠的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)！天美科技有限公司TECHCOMPLTD.5第五頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱的使用使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)天美科技有限公司TECHCOMPLTD.6第六頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱使用之后非常簡(jiǎn)單，但是非常重要：沖洗!對(duì)于常用的C18反相柱，如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相（含有酸、堿、鹽的流動(dòng)相），應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢后用水將柱子沖洗干凈，然后保存于甲醇或乙腈之中。天美科技有限公司TECHCOMPLTD.7第七頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱堵塞的原因（1）溶劑中的不溶物

應(yīng)使用色譜純?nèi)軇?，膜過(guò)濾（孔徑不超過(guò)0.45μm）樣品中的不溶物

應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行膜過(guò)濾（孔徑不超過(guò)0.45μm）泵、進(jìn)樣器等中的不溶物

在泵和進(jìn)樣器之間、進(jìn)樣器和柱子之間安裝在線過(guò)濾器天美科技有限公司TECHCOMPLTD.8第八頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱堵塞的原因（2）由于溶劑的不互溶而產(chǎn)生的柱內(nèi)不溶物沉淀

用能溶解沉淀物的溶劑沖洗色譜柱在不互溶溶劑中由于進(jìn)樣而產(chǎn)生的柱內(nèi)不溶物沉淀

檢查樣品溶液和流動(dòng)相是否互溶由于溫度的改變或固定相的干涸而產(chǎn)生的柱內(nèi)不溶物沉淀將色譜柱密封緊，并保持室溫恒定由于固定相對(duì)某些樣品的強(qiáng)烈吸附而在柱頭形成沉淀使用相近填料的預(yù)柱（保護(hù)柱），并定期更換天美科技有限公司TECHCOMPLTD.9第九頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱堵塞的修復(fù)（1）步驟1：使用含鹽緩沖液后（如離子對(duì)試劑）應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑（如水）進(jìn)行沖洗步驟2：先斷開(kāi)檢測(cè)器，使用對(duì)樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗。對(duì)于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等。在此條件下，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。天美科技有限公司TECHCOMPLTD.10第十頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱堵塞的修復(fù)（2）若經(jīng)過(guò)步驟1和步驟2后，壓力仍沒(méi)下降，進(jìn)行步驟3步驟3：斷開(kāi)檢測(cè)器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓（1）若壓力穩(wěn)定下降，進(jìn)行步驟4（2）若壓力不下降，進(jìn)行步驟5步驟4：保持色譜柱反方向連接，用低于0.5ml/min流速?zèng)_洗1~2小時(shí)，然后換回正常方向，重復(fù)步驟1、步驟2即可。天美科技有限公司TECHCOMPLTD.11第十一頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三色譜柱堵塞的修復(fù)（3）步驟5：若內(nèi)置過(guò)濾器被堵塞，應(yīng)沖洗或更換。但柱連接端的拆卸或重裝會(huì)導(dǎo)致柱效下降（有效塔板數(shù)下降和不對(duì)稱峰等）。若步驟5不能降低柱壓，進(jìn)行步驟6。步驟6：若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被徹底恢復(fù)，只能通過(guò)去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充，進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。在多數(shù)情況下，柱效將嚴(yán)重地下降。步驟7：若步驟6無(wú)法改善柱子性能，那么柱子已無(wú)法修復(fù)，只能更換新柱子。天美科技有限公司TECHCOMPLTD.12第十二頁(yè)，共十三頁(yè)，編輯于2023年，星期三其他注意的問(wèn)題在對(duì)-NH2改性的色譜柱（氨基柱）進(jìn)行再生時(shí)，由于-NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然