染色體畸變分析培訓(xùn)課程課件

染色體畸變分析

（ChromosomeAberrationAnalysis)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室任銳毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課化學(xué)毒物致突變類(lèi)型?復(fù)習(xí)染色體畸變?nèi)旧w數(shù)目改變基因突變堿基置換移碼突變轉(zhuǎn)換顛換毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課

復(fù)習(xí)遺傳學(xué)終點(diǎn):基因突變?nèi)旧w畸變?nèi)旧w組畸變DNA原始損傷Ames實(shí)驗(yàn)微核實(shí)驗(yàn)染色體畸變分析染色體畸變分析分子生物學(xué)方法毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析試驗(yàn)毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課1.學(xué)習(xí)動(dòng)物骨髓細(xì)胞標(biāo)本制作。2.了解動(dòng)物體內(nèi)染毒及染色體畸變類(lèi)型。一、目的毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對(duì)生物體產(chǎn)生潛在性的遠(yuǎn)期危害。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。二、原理毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課三、器材與試劑見(jiàn)教材。毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課動(dòng)物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。染毒與取樣時(shí)間一般染毒一次或多次，多次更為合理。末次染毒后24h處死動(dòng)物，收獲細(xì)胞。劑量最高劑量最大耐受劑量或，1/3~1/8LD50；最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；陰性對(duì)照給予溶劑。4.給藥途徑原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課1.注射秋水仙素2.骨髓細(xì)胞的制備3.低滲4.固定5.制片6.干燥7.染色五、操作步驟毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課注射秋水仙素骨髓細(xì)胞制備：取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細(xì)胞，1500r/min，離心10min，棄去上清。

低滲：0.4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標(biāo)記染色：Giemsa染色15min水沖干燥，閱片毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課低倍鏡、高倍鏡和油鏡。計(jì)數(shù)100個(gè)分裂中期相細(xì)胞。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。六、染色體分析閱片毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課低倍鏡、高倍鏡和油鏡。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。染色：Giemsa染色15min最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；了解動(dòng)物體內(nèi)染毒及染色體畸變類(lèi)型。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。了解動(dòng)物體內(nèi)染毒及染色體畸變類(lèi)型。了解動(dòng)物體內(nèi)染毒及染色體畸變類(lèi)型。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對(duì)生物體產(chǎn)生潛在性的遠(yuǎn)期危害。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院動(dòng)物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對(duì)生物體產(chǎn)生潛在性的遠(yuǎn)期危害。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。七、結(jié)果評(píng)價(jià)毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課八、組織分工毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課八、總結(jié)毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課掌握正常小鼠的骨髓染色體數(shù)目和形態(tài)。毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課低滲時(shí)間十分重要，時(shí)間太短則染色體分散不開(kāi)，無(wú)破裂，染色體丟失。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。毒理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院低滲時(shí)間十分重要，時(shí)間太短則染色體分散不開(kāi)，無(wú)破裂，染色體丟失。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。染毒與取樣時(shí)間一般染毒一次或多次，多次更為合理。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。動(dòng)物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。骨髓細(xì)胞制備：取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細(xì)胞，1500r/min，離心10min，棄去上清。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對(duì)生物體產(chǎn)生潛在性的遠(yuǎn)期危害。動(dòng)物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。每只小鼠分析100個(gè)骨髓細(xì)胞。掌握正常小鼠的骨髓染色體數(shù)目和形態(tài)。陰性對(duì)照給予溶劑。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。學(xué)習(xí)動(dòng)物骨髓細(xì)胞標(biāo)本制作。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。染色體畸變分析

（ChromosomeAberrationAnalysis)因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析試驗(yàn)?zāi)┐稳径竞?4h處死動(dòng)物，收獲細(xì)胞。染色：Giemsa染色15min哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；染色：Giemsa染色15min陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；染毒與取樣時(shí)間一般染毒一次或多次，多次更為合理。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；末次染毒后24h處死動(dòng)物，收獲細(xì)胞。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。骨髓細(xì)胞制備：取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細(xì)胞，1500r/min，離心10min，棄去上清。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標(biāo)記制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對(duì)生物體產(chǎn)生潛在性的遠(yuǎn)期危害。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標(biāo)記染毒與取樣時(shí)間一般染毒一次或多次，多次更為合理。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標(biāo)記固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院陰性對(duì)照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；低倍鏡、高倍鏡和油鏡。動(dòng)物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。給藥途徑原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。動(dòng)物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。染毒與取樣時(shí)間一般染毒一次或多次，多次更為合理。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。了解動(dòng)物體內(nèi)染毒及染色體畸變類(lèi)型。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；低倍鏡、高倍鏡和油鏡。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細(xì)胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細(xì)胞懸液，使細(xì)胞自然分散。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。了解動(dòng)物體內(nèi)染毒及染色體畸變類(lèi)型。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。給藥途徑原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，稱(chēng)為染色體畸變。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變分析實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動(dòng)物體細(xì)胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強(qiáng)弱。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。劑量最高劑量最大耐受劑量或，1/3~1/8LD50；每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；學(xué)習(xí)動(dòng)物骨髓細(xì)胞標(biāo)本制作。染毒與取樣時(shí)間一般染毒一次或多次，多次更為合理。每次離心后棄上清時(shí)應(yīng)仔細(xì)，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時(shí)剩余的細(xì)胞數(shù)過(guò)少。染