講解腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展詳解演示文稿

講解腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展詳解演示文稿當前第1頁\共有108頁\編于星期一\15點（優(yōu)選）講解腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展當前第2頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制

腫瘤自身原因

外因內因無限增殖轉移空間資源

免疫監(jiān)控

攘外

安內同流和污視而不見

腫瘤免疫監(jiān)控失活功能喪失腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展當前第3頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展當前第4頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展LimitlessreplicativepotentialTissueinvasion&metastasisSustainedangiogenesisInsensitivitytoanti-growthsignalsSelf-sufficiencyingrowthsignalsEvadingapoptosis當前第5頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展Self-sufficiencyingrowthsignalsAutocrineloopsOver-expressionofreceptorReceptorisalways‘on’Downstreamsignals當前第6頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展ExternaltriggersIntracellulartriggersDeathreceptorsCaspasesSensors(8,9)Executioners(3)Evadingapoptosis當前第7頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展Insensitivitytoantigrowthsignals當前第8頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展SustainedangiogenesisVEGFFGF1/2ThrombospondinThalidomideAvastin當前第9頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展Tissueinvasionandmetastases當前第10頁\共有108頁\編于星期一\15點一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制1、腫瘤自身腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展LimitlessreproductivepotentialHayflickhypothesisLimitednumberofdoublingsTelomeremaintenanceTelomeraseNotalltumorcellshavethispotentialTumorstemcells當前第11頁\共有108頁\編于星期一\15點

(1)免疫監(jiān)視系統(tǒng)要素

識別力攻擊力組成分工快速反應特異反應

信息傳遞腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制2、免疫監(jiān)控失調當前第12頁\共有108頁\編于星期一\15點（1）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)識別特異反應抗原遞呈細胞腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制2、免疫監(jiān)控失調當前第13頁\共有108頁\編于星期一\15點（1）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)攻擊效應細胞腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制2、免疫監(jiān)控失調當前第14頁\共有108頁\編于星期一\15點（2）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生證據(jù)體內細胞突變隨時在發(fā)生，但腫瘤不是隨時發(fā)生。免疫缺陷與腫瘤發(fā)生免疫功能與腫瘤發(fā)展腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制2、免疫監(jiān)控失調當前第15頁\共有108頁\編于星期一\15點（2）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生腫瘤監(jiān)控失常原因識別問題腫瘤自身免疫細胞隱蔽抗原來源與正常細胞相同抗原遞呈功能缺失無視腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制2、免疫監(jiān)控失調當前第16頁\共有108頁\編于星期一\15點（2）、免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生腫瘤監(jiān)控失常原因殺傷問題腫瘤自身免疫細胞殺傷免疫細胞抑制因子功能異常抑制性免疫細胞腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制2、免疫監(jiān)控失調當前第17頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容診斷預后評估判定治療效果分子內容基因突變基因表達有無類型位置效應有無水平效應臨床應用檢測技術PCR基因測序蛋白芯片核酸雜交免疫化學當前第18頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容樣本內容與遺傳有關的基因突變檢測技術PCR基因測序蛋白芯片基因測序免疫化學血液腫瘤組織血漿DNA變化血漿變中癌基因表達檢測腫瘤標志物的檢測腫瘤細胞的基因突變腫瘤細胞的基因表達腫瘤細胞的蛋白表達PCR當前第19頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容腫瘤標志物的檢測

1978年Herberman在美國國立癌癥研究所召開的人類腫瘤免疫診斷會上提出的。由腫瘤組織和細胞產生的與腫瘤的形成、發(fā)生相關的物質,這些物質存在于腫瘤細胞的胞核、胞質、胞膜上或體液中；不存在于正常成人組織而見于胚胎組織,或在腫瘤組織中含量超過正常含量。存在于腫瘤患者的組織、體液和排泄物中，能夠用免疫學、生物學及化學的方法檢測。

當前第20頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容腫瘤標志物的檢測理想的TM

特異性高，對腫瘤與非腫瘤鑒別的準確性可100%。

敏感性高，能在極早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的存在，不漏診。

在體液中的濃度應與瘤體大小、臨床分期密切相關，并可據(jù)此判斷預后。

半衰期短，可根據(jù)其水平的升降監(jiān)測治療效果及腫瘤是否復發(fā)或轉移。

檢測方法靈敏可靠，操作簡便，價格低廉。當前第21頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容腫瘤標志物的檢測腫瘤標志物的測定：包括測定血液、尿液中蛋白質（包括多肽）、脂類，糖類、核酸物質。當前第22頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學：引領21世紀生物科學1、蛋白檢測蛋白組學代表著對有機生物、器官和細胞器中所有蛋白的特性、分子量、結構和生物化療、細胞功能加以明確同時了解這些特性在空間、時間或不同生理狀態(tài)下的變化當前第23頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學當前第24頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學在分子水平上描述蛋白和DNA的特性是理清基因功能的關鍵基因組學蛋白組學DNAmRNAt-RNAt-RNAt-RNAt-RNA核糖體()蛋白CHOPO4()翻譯后修飾XX具有活性的蛋白當前第25頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容2、蛋白組學當前第26頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學表面增強激光解吸離子化(SELDI)化學表面–蛋白表達譜:疏水性H50–C9鏈H4–C16鏈陽離子WCX2-羧酸鹽金屬離子親和層析金屬螯合物(Cu,Ni,Zn,Ga,Mn,…)常態(tài)NP20–SiO2陰離子SAX2–4O

銨鹽PS-10orPS-20蛋白耦合抗體–抗原受體–配體DNA–蛋白生物表面–蛋白相互作用檢測:當前第27頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容2、蛋白組學當前第28頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學通過比較蛋白圖譜可以容易地找出標志物SELDI技術比2DPAGE速度快，可重復性高這一技術用以發(fā)現(xiàn)多種疾病的生物標志物，如卵巢癌、乳腺癌、前列腺和膀胱癌當前第29頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容2、蛋白組學當前第30頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學FDA于2009年9月11日批準了OVA1試驗

首個FDA獲準的基于蛋白水平的體外診斷多因素指數(shù)檢測首個FDA獲準的用于卵巢癌術前和術后的預后檢測在血標本中檢測5個蛋白

SELDI技術篩選出β2-微球蛋白、轉鐵蛋白、載脂蛋白A1、甲狀腺素運載蛋白CA125預測良惡性可能當前第31頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容蛋白組學將生物標志物的發(fā)現(xiàn)從實驗室開拓到臨床應用中基于一項前瞻性雙盲的臨床研究，納入27個機構共516例患者269例患者只根據(jù)手術前信息進行評估247例患者根據(jù)手術前信息和OVA1結果進行評估OVA1檢測能識別出額外的潛在惡性腫瘤患者能夠在盆腔包塊中檢查出是否罹患卵巢癌，并確定是否需要手術治療，幫助病人和醫(yī)護人員確定屬于什么類型的手術，以及應該由誰負責實施。當前第32頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤的分子診斷內容2、核酸檢測

血漿DNA(plasmaDNA)

又被稱為循環(huán)DNA(circulatingDNA),是存在于循環(huán)血液中的細胞外DNA(cell-freeDNA),它可以以DNA-蛋白質復合物的形式存在,也可以游離DNA片斷形式存在。由于健康狀態(tài)下少量衰老死亡(壞死或凋亡)細胞的DNA的釋放,健康人血液中存在一定量的游離DNA。同時,由于健康狀態(tài)下,循環(huán)DNA的生成與清除處于動態(tài)平衡狀態(tài),因此對于健康人而言,血液中循環(huán)DNA的水平能夠維持在一個比較恒定的低水平。循環(huán)DNA能反映人體內新陳代謝的狀況,是健康評判的一個重要指標。近年來的研究表明,人外周血液中的血漿循環(huán)DNA量和質的改變與多種疾病(包括腫瘤、復合性嚴重外傷、器官移植、妊娠相關疾病、感染性疾病、器官衰竭等)關系密切,因此血漿DNA作為一種無創(chuàng)性檢測指標,有望成為某些疾病早期診斷、病程監(jiān)測、療效及預后評估的一種重要的分子標志物。

（1）、血漿DNA含量檢測當前第33頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（1）、血漿DNA含量檢測血漿DNA濃度檢測研究發(fā)現(xiàn)，正常健康人群循環(huán)系統(tǒng)游離DNA平均約為7ng/ml；腫瘤患者循環(huán)系統(tǒng)游離DNA水平明顯升高，可達到29ng/ml；術后游離DNA水平迅速下降至18ng/ml，并隨病情的好轉進一步下降。這種游離DNA的升高可發(fā)生在腫瘤早期，出現(xiàn)于臨床癥狀發(fā)生之前。由于血清標本來源方便和非侵入性等優(yōu)點，因此血液中游離DNA定量檢測可預測受檢者早期腫瘤的發(fā)生風險，從而采取有針對性的預防和治療措施。當前第34頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（1）、血漿DNA含量檢測當前第35頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（1）、血漿DNA含量檢測當前第36頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容血漿DNA基因檢測①檢測DNA甲基化包括P16基因、MGMT基因、DAPK基因、TMS1基因、RASSF1A基因。②檢測基因突變：K-RAS基因突變、P53基因突變、FHit基因突變。③微衛(wèi)星檢測：MSA-2,3,4,5,12,16檢測（1）、血漿DNA含量檢測當前第37頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容血漿RNA檢測

檢測HER2/NEU以及HNrnp-b-1基因，文獻報道聯(lián)合兩種基因可以發(fā)現(xiàn)100%肺癌患者。（1）、血漿DNA含量檢測當前第38頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（2）、基因組檢測

科學家們預計，當完成了人類基因組項目之后應該能夠發(fā)現(xiàn)一些與人體常見疾病和性狀相關的遺傳信息。但人類基因組圖譜公布之后大家突然發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)實與預期的完全不同，科學家們居然一無所獲。但我們真的就不能從人類基因組圖譜當中發(fā)現(xiàn)一點有價值的東西嗎？當前第39頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤的分子診斷內容4、基因組檢測當前第40頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（2）、基因組檢測Dual-specificityphosphatase6(DUSP6),monocyte-to-macrophagedifferentiationassociatedprotein(MMD),signaltransducerandactivatoroftranscription1(STAT1),v-erb-b2avianerythroblasticleukemiaviraloncogenehomolog3(ERBB3),lymphocyte-specificproteintyrosinekinase(LCK).結論五個基因指紋與非小細胞肺癌的無復發(fā)生存期和總生存期密切相關當前第41頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤的分子診斷內容4、基因組檢測根據(jù)五個基因指紋RT-PCR檢測的不同結果，用Kaplan-Meier法分析非小細胞肺癌患者的生存時間

Overallsurvivalandrelapse-freesurvivalareshownforthe101patientswithNSCLC(PanelAandPanelB,respectively)andforthe59patientswithstageIorIIdisease(PanelCandPanelD,respectively).Overallsurvivalisalsoshownfortheindependentcohortof60patients(PanelE),forthe42patientsinthiscohortwhohadstageIorIIdisease(PanelF),andforthe86patientsdescribedinanindependentsetofpublishedNSCLCmicroarraydata10(PanelG).當前第42頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容4、基因組檢測70個預后相關基因表達譜監(jiān)督分析van′tVeeretal.,Nature415,p.530-536,200270個與預后顯著相關的基因腫瘤標本當前第43頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展細胞增殖血管新生與細胞外基質的黏附局部侵犯進入血管內、存活、外滲細胞增殖與細胞外基質的黏附未知功能的基因

(25)70個預后相關基因與腫瘤細胞生物學各個方面均有關當前第44頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容4、基因組檢測良好預后組患者沒有一例復發(fā)MammaPrint:良好預后組 (n=23)不良預后組 (n=144)StraverMetal,BritCancerResTreat2009當前第45頁\共有108頁\編于星期一\15點如何評估乳腺癌患者的復發(fā)風險傳統(tǒng)病理學標準OncotypeDX基因組學時代的新工具…年齡腫瘤大小淋巴結狀態(tài)ER/PR

HER2腫瘤分期輔助化療

基于電腦模式當前第46頁\共有108頁\編于星期一\15點RS

=+

0.47xHER2指數(shù)

-0.34xER指數(shù)

+1.04x細胞增殖指數(shù)+0.10x細胞侵潤指數(shù)

+0.05xCD68-0.08xGSTM1-0.07xBAG1細胞增殖Ki-67STK15SurvivinCyclinB1MYBL2雌激素ERPRBcl2SCUBE2細胞侵潤Stromelysin3CathepsinL2HER2GRB7HER2BAG1GSTM1參考基因Beta-actinGAPDHRPLPOGUSTFRCCD68Paiketal,NEJM2004;351:2817-2616個腫瘤基因和5個參考基因構成了OncotypeDX基因組，根據(jù)這些基因的表達情況計算復發(fā)指數(shù)：OncotypeDX21-基因復發(fā)指數(shù)當前第47頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（2）、基因組檢測

低復發(fā)指數(shù)（RS）與最小化療獲益相關； 高復發(fā)指數(shù)（RS）與較好的化療獲益相關。

OncotypeDX復發(fā)指數(shù)提供了簡潔、定量的個體預后信息，是具有統(tǒng)計學意義、與患者年齡、腫瘤大小和腫瘤分期分級無關的獨立指標。OncotypeDX當前第48頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（3）、microRNA檢測當前第49頁\共有108頁\編于星期一\15點非編碼-RNA：曾經被認為是毫無意義的「多余物」tRNArRNAsnRNAtmRNARnasePRNAvRNAsgRNAsMRPRNASRPRNAs端粒酶RNA轉錄/染色體結構調節(jié)因子轉錄調節(jié)因子蛋白功能調節(jié)因子RNA/蛋白定位調節(jié)因子RNA轉錄調節(jié)RNA

miRNAsiRNA

piRNA

反義

RNA編碼蛋白的mRNA非編碼RNA轉錄核仁小RNAs管家

RNAs非編碼-RNA在復雜的基因組學中起重要作用當前第50頁\共有108頁\編于星期一\15點

microRNA（miRNA）是長度在18～25個核苷酸左右的內源性非編碼小分子RNA。miRNA在進化上高度保守，具有轉錄后基因調控功能。它由基因組DNA編碼，在RNA聚合酶II的作用下被轉錄。這些小分子通過RNA誘導的沉默復合體（RNA-inducedsilencingcomplex,RISC）靶向到達mRNA，進而行使阻遏翻譯或引導酶切的功能。最近有研究表明，miRNA具有多種生物學功能，如調節(jié)細胞發(fā)育、分化、增殖、凋亡等。腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容當前第51頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容MiRNA生物合成基本過程MiRNA調控基因表達兩種機制當前第52頁\共有108頁\編于星期一\15點當前第53頁\共有108頁\編于星期一\15點microRNAs腫瘤形成診斷預后miR-9神經母細胞瘤miR-10b乳腺癌miR-15,miR-15a白血病，垂體瘤miR-16,miR-16-1白血病，垂體瘤miR-17-5p,miR-17-92肺癌，淋巴瘤miR-20a淋巴瘤，肺癌miR-21乳腺癌，膽管癌，頭頸腫瘤，白血病胰腺癌miR-29,miR-29b白血病，膽管癌miR-31結直腸癌miR-34a胰腺癌神經母細胞瘤miR-96結直腸癌miR-98頭頸部腫瘤miR-103胰腺癌miR-107白血病，胰腺癌miR-125a,miR-125b神經母細胞瘤，乳腺癌miR-128膠質瘤miR-133b結直腸癌miR-135b結直腸癌miR-143結腸癌miR-145乳腺癌，結直腸癌miR-146甲狀腺癌當前第54頁\共有108頁\編于星期一\15點microRNAs腫瘤形成診斷預后miR-155,has-miR-155乳腺癌，白血病，胰腺癌肺癌miR-181,imR-181a,imR-181b,imR-181c白血病，膠質瘤，甲狀腺癌miR-183結直腸癌miR-184神經母細胞瘤miR-193胃癌miR-196a-2胰腺癌miR-221膠質瘤，甲狀腺癌胰腺癌miR-222甲狀腺癌miR-223白血病miR-301胰腺癌miR-376胰腺癌let-7,let-7a,let-7a-1,has-let-7a-2,let-7a-3肺癌，結腸癌

肺癌ChoWC.MicroRNAs:potentialbiomarkersforcancerdiagnosis,prognosisandtargetsfortherapy.IntJBiochemCellBiol2010.Cho

WC.OncomiRs:thediscoveryandprogressofmicroRNAsincancers.MolCancer2007;6:60.當前第55頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷當前第56頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷BRCA1andBRCA2arehumangenesthatbelongtoaclassofgenesknownastumorsuppressors.

Innormalcells,BRCA1andBRCA2helpensurethestabilityofthecell’sgeneticmaterial(DNA)andhelppreventuncontrolledcellgrowth.Mutationofthesegeneshasbeenlinkedtothedevelopmentofhereditarybreastandovariancancer.

ThenamesBRCA1andBRCA2standforbreastcancersusceptibilitygene1andbreastcancersusceptibilitygene2,respectively.

當前第57頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷Clonedin1995(Woosteret

al.)Mappedtochromosome13q12-1310,254kb(3,418aa)27exonsClonedin1995(Woosteretal.)Mappedtochromosome13q12-1310,254kb(3,418aa)27exons當前第58頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷當前第59頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷TypeofCancerGeneralPopulationThatWillDevelopDiseasePeopleWithBRCA1MutationWhoWillDevelopDiseasePeopleWithBRCA2MutationWhoWillDevelopDiseaseBreast12.5%55–85%33–86%Ovarian1.43%

28–44%10–30%Prostate4–6%12–18%

12–18%

Malebreastcancer

Lessthan1%6%4–14%Pancreatic

0.6%notapplicable6–7%當前第60頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷當前第61頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷ScreeningforBreastCancerMonthlybreastself-examClinicalbreastexamevery6months>25AnnualMammogram>25,Bi-annual>50Discuss+/-ofprophylacticmastectomywithMDScreeningforOvarianCancerAtleastannualrectovaginalpelvicexamCA125andtransvaginalultrasoundProphylacticbilateraloophorectomybyage35當前第62頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷當前第63頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷乳腺癌基因檢測的意義

降低風險，安全更放心

保乳手術的術式選擇：BRCA突變攜帶者乳腺癌復發(fā)或對側乳腺癌風險可高達70%-80%，因此基因突變攜帶者不宜做保乳手術，還是以乳腺切除術為好。某些婦女可預防切除另一側乳腺。

關心自己，更關愛家人

遺傳性乳腺癌并非不可預知，關鍵在于加強監(jiān)測、早期診斷、早期治療。如果檢出BRCA突變，可盡早采取有效的防治措施，降低癌癥危險度，保障健康人生，同時，可以告知家族成員接受BRCA檢測，了解自身癌癥風險。當前第64頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容（4）腫瘤分子遺傳學診斷乳腺癌遺傳檢測適宜人群(如果有以下因素，強烈建議接受乳腺癌BRCA檢查)

一個或多個直系親屬有乳腺癌史，如母親或姐妹

家族成員里有早發(fā)乳腺癌患者，發(fā)病年齡早于40歲

家族成員里兩代以上出現(xiàn)乳腺癌患者

家族成員有雙側乳腺癌患者

家族成員里有卵巢癌患者

家族成員有男性成員乳腺癌患者

一個或多個家族成員攜帶BRCA基因突變，即遺傳檢測陽性當前第65頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展二、腫瘤的分子診斷內容9種預防癌癥的生活方式

1、盯住你的身體質量指數(shù)BMI：亞洲人最好將身體質量指數(shù)（BMI）控制在18.5至22.9之間。BMI計算方式為《體重（公斤）》÷《身高（公尺）平方》。

2、每天流汗30分鐘：這是最經濟實惠的防癌方法。運動可以調整血液中睪固酮與雌激素，保護女性對抗與荷爾蒙相關的癌癥。

3、喝綠茶或咖啡：綠茶含有兒茶素及維生素A、C等抗氧化劑因此有防癌功效，咖啡也可以降低某些癌癥發(fā)生率。

4、新鮮蔬果：建議青少年及成年人，應每天攝食9份蔬果。蔬菜類1份約為生重100公克，水果類約為150公克。

5、跳開脂肪誘惑：美國國家科學院報告指出，所有飲食構成要素中，脂肪與癌癥關系最強烈，特別是乳癌、大腸癌。

6、多吃雞、魚，少量吃豬；戒煙、戒酒、戒檳榔

7、少鹽、不喝含糖飲料：每天攝取的鹽不超過6公克，少喝含糖分飲料，喝白開水最理想，天然果汁每天不超過150㏄，并且不吃發(fā)霉的谷類及豆類。

8、保持輕松的情緒減少壓力：心情郁卒容易誘發(fā)癌癥，許多罹癌的人回顧發(fā)病前兩、三年，常是身心處于壓力的狀態(tài)。

9、喂母乳：建議母親至少喂6個月母乳。研究指出，喝母乳的寶寶將來罹患血癌風險比較低，媽媽則可得到降低乳癌風險的好處。

當前第66頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控1、靶向治療

隨著人類基因組學、藥物基因組學及腫瘤分子生物學研究的不斷深入和發(fā)展，腫瘤治療性藥物的開發(fā)從傳統(tǒng)的廣譜藥向特異性更強的靶向藥發(fā)展。與此同時，傳統(tǒng)的標準治療、同病同治也正逐漸向個體化治療轉變。個體化治療已經成為腫瘤臨床治療的發(fā)展方向和最有效的手段。大量的臨床研究和試驗結果表明：特異腫瘤分子標志物（靶標）是識別患者個體差異的重要依據(jù)，實現(xiàn)對這些腫瘤靶標的檢測是個體化治療的前提和基礎。對癌癥患者檢測相關基因的表達狀態(tài)，已成為靶向治療藥物治療腫瘤的必要前提。當前第67頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控1、靶向治療腫瘤種類靶向藥物檢測基因檢測方法非小細胞肺癌易瑞沙（吉非替尼）特羅凱（厄洛替尼）EGFRK-RASBRAFALK基因測序突變大腸癌西妥昔單抗/愛必妥K-RASBRAF基因測序突變乳腺癌曲妥珠單抗/赫賽汀HER2FISH檢測基因含量黑色素瘤PLX4032

BRAF（v600e)基因測序突變胃間質瘤伊馬替尼/格列衛(wèi)c-kit基因測序突變以及基因檢測表達當前第68頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測當前第69頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控

臨床試驗表明易瑞沙和特羅凱僅對10-30%的NSCLC病人有顯著療效。研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與NSCLC靶向治療的療效具有相關性，絕大多數(shù)攜帶EGFR基因突變的病人療效顯著。

突變可以增強腫瘤細胞對TKI的敏感性，并且可作為TKI治療的有效預測指標。因此，檢測EGFR基因突變對于指導NSCLC病人臨床用藥具有重要的參考價值。

《2010年NCCN非小細胞肺癌臨床實踐指南》明確指出：當K-ras基因如果發(fā)生了突變，則不建議病人使用特羅凱（Tarceva/厄洛替尼/Erlotinib）進行分子靶向治療。因此在應用靶向肺癌治療之前進行EGFR、K-RAS基因突變檢測十分必要當前第70頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控當前第71頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控當前第72頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR18基因外顯子核苷酸序列檢測圖譜當前第73頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR基因19外顯子核苷酸序列檢測圖譜當前第74頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR基因20外顯子核苷酸序列檢測圖譜當前第75頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控EGFR基因21外顯子核苷酸序列檢測圖譜當前第76頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測棘皮動物微管相關蛋白樣4（EML4）編碼蛋白N-末端部分融合至間變淋巴瘤激酶(ALK)的細胞內酪氨酸激酶結構域，重排為EML4-ALK，導致異常酪氨酸激酶表達。2007年Soda首次在非小細胞肺癌患者術后標本中檢測到EML4-ALK重排融合。此后，美國、日本、韓國及中國香港均有報道，但在未經選擇的NSCLC中，EML4-ALK陽性檢出率較低，約1.5-6.7%。初步的分組研究表明,在滿足：1、EGFR陰性，2、不吸煙或少吸煙，3、肺腺癌的條件中,EML4-ALK融合基因陽性率相對較高，可達到13%-23%。

EML4-ALK陽性者的某些特征與EGFR突變者相似，但前者不能從EGFR-TKI靶向治療中獲益，因而對這部分患者的治療策略需要轉變。在剛剛落幕的第46屆ASCO年會上，Bang等報告了Crizotinib（PF02341006）治療晚期NSCLC的臨床試驗結果，針對ALK基因的小分子抑制劑Crizotinib在Ⅰ期臨床試驗中就顯示出良好療效。研究者認為，對于攜帶EML4-ALK融合基因的MSCLC患者，Crizotinib治療的緩解率高，且安全性良好。目前，Crizotinib相關的多項臨床試驗正在進行中，我們期待分子靶向治療的又一新成員早日面世。

當前第77頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測非小細胞肺癌臨床腫瘤分子研究的最新結果，表明EML4-ALK是對NSCLC基因變異分步檢測的進一步豐富和完善，根據(jù)針對非小細胞肺癌所開展的靶向治療EGFR、K-RAS檢測項目，結合EML4-ALK融合基因分子檢測，對擬行TKI治療的患者，可以首先檢測KRAS突變狀態(tài)，排除陽性后對KRAS陰性者進行EGFR突變檢測；若EGFR突變陽性，選擇TKI治療，陰性則繼續(xù)行EML4-ALK檢測；若EML4-ALK陽性者，可嘗試針對ALK的靶向治療。本中心希望在非小細胞肺癌人群分子分型不斷完善的基礎上，具備不同分子特征的患者得以接受最個體化的治療。

當前第78頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控K-RAS、BRAF基因突變檢測不能應用靶向藥物EGFR檢測突變無突變突變應用靶向藥物Eml4-ALK基因檢測無突變陰性陽性靶向ALK分子治療當前第79頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控非小細胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測當前第80頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控大腸癌靶向治療敏感性基因檢測

針對晚期結直腸癌的分子靶向藥物貝伐單抗、西妥昔單抗、帕尼單抗已被批準用于臨床，比傳統(tǒng)藥物更有效，且副作用更小，有效地延長了轉移性結直腸癌患者的生存期。

2007年及2008年多項Ⅲ期臨床研究的回顧性分析顯示，西妥昔單抗或帕尼單抗無論單藥或聯(lián)合化療僅對K－RAS基因野生型的結直腸癌患者有效。K－RAS基因成為第一個結直腸癌靶向治療的重要分子標志物。

2008年10月，K－RAS基因檢測被寫入最新版(2008年第3版)《美國國立癌癥綜合網(wǎng)絡(NCCN)結直腸癌臨床實踐指南》。新指南傳遞給廣大醫(yī)師和患者兩條重要的信息:一是所有轉移性結直腸癌患者都應檢測K－RAS基因狀態(tài)；二是只有K－RAS野生型患者才建議接受EGFR抑制劑，如西妥昔單抗和帕尼單抗(包括單藥或與化療聯(lián)合)治療。

當前第81頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控大腸癌靶向治療敏感性基因檢測

目前在歐美等發(fā)達國家，K-RAS基因檢測已經成為大腸癌患者治療前必做的常規(guī)檢查，是目前醫(yī)生了解大腸癌患者癌基因狀況最直接、最有效的方法，并且成為能否報銷相關抗EGFR治療費用的依據(jù)。

K-RAS基因檢測可以篩選出對抗EGFR(表皮生長因子受體)靶向藥物治療有效的大腸癌患者，實現(xiàn)腫瘤病人的個體化治療，從而達到良好的預后。早期檢測K-RAS還可以通過該基因的狀態(tài)了解到病人的復發(fā)轉移風險，為將來選擇最佳治療做好準備。

當前第82頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控大腸癌靶向治療敏感性基因檢測K-ras基因第2外顯子核苷酸序列檢測圖譜K-ras基因第2外顯子核苷酸序列檢測圖譜

當前第83頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控乳腺癌靶向治療敏感性基因檢測

Her-2屬于表皮生長因子受體酪氨酸激酶家族成員，為原癌基因編碼的具有受體酪氨酸激酶(RTK)活性的跨膜糖蛋白，參與調控細胞生長、增殖和分化。25%~30%的乳腺癌為Her-2基因的擴增/過度表達。

赫塞汀是一種人源化的HER-2單克隆抗體，可有效阻礙HER2過度表達導致的腫瘤細胞生長。無論是單獨使用、與標準化療聯(lián)合、還是在標準化療之后使用，赫賽汀均能提高治療反應率、無病存活期以及整體存活期，毒副反應小，患者耐受性好，較好地保證了HER2陽性乳腺癌婦女的生活質量。

當前第84頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控乳腺癌靶向治療敏感性基因檢測Her-2擴增的患者預后更差：

Her-2基因是一個重要的臨床預后指標。具有Her-2基因擴增的乳腺癌患者無病生存期(DFS)和總生存期(OS)縮短，腫瘤負荷更大，淋巴結轉移幾率高，復發(fā)風險高。

指導內分泌治療藥物的選擇：

相對于無Her-2基因擴增的乳癌患者而言，具有Her-2基因擴增的患者應用他莫昔芬(TAM)治療后的死亡風險明顯增高。提示具有Her-2基因擴增的患者可能不適合應用TAM作為內分泌治療的選擇。對ER陽性的絕經后患者，HER-2陽性者，來曲唑的療效明顯高于TAM。來曲唑對HER-2陽性患者的療效優(yōu)于陰性患者；TAM則相反，對HER-2陰性患者的療效明顯高于陽性患者。當前第85頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控乳腺癌靶向治療敏感性基因檢測Her-2擴增患者輔助化療藥物的選擇：

Her-2擴增的乳腺癌患者對CMF化療方案的反應性降低；

Her-2擴增的患者，對高劑量強度的蒽環(huán)類藥物方案敏感；

Her-2陽性的乳腺癌患者對紫杉醇化療的反應性明顯高出HER-2陰性的患者。

篩選靶向治療藥物Hercepetin的使用者：

分子靶向治療藥物Trastuzumab/Herceptin對具有HER-2基因擴增的患者具有良好的治療效果，而對于17號染色體非整倍體導致的HER-2基因數(shù)目相應的增加及不擴增的患者效果不佳。當前第86頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控Her2(-)Her2(+)FISH當前第87頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控甲狀腺癌治療相關基因檢測甲狀腺癌發(fā)病機制中，基因突變在甲狀腺癌的發(fā)生過程中占有重要的地位，其中BRAF是甲狀腺癌最常見的分子遺傳學改變。BRAF基因編碼蛋白是MAPK信號傳導通路RAS→RAF→MEK→ERK中的重要激酶，15外顯子的單個堿基錯義突變（T1799A）導致翻譯蛋白質600位密碼子的纈氨酸（Valine）被谷氨酸（Glutamate）替換，成為活化蛋白質激酶（BRAFV600E）。BRAF激酶的持續(xù)活化，導致MEK(細胞外信號調節(jié)激酶)持續(xù)磷酸化，MAPK信號傳導通路持續(xù)活化，影響細胞的生長和增殖。

BRAFV600E突變主要見于經典型PTC和微小癌，甲狀腺非瘤性病變、良性腫瘤和其他類型的分化型甲狀腺癌中未發(fā)現(xiàn)BRAF變異，因此BRAFV600E可用于甲狀腺癌的輔助診斷。針吸活檢作為目前甲狀腺腫瘤最常用的檢查，對15%-20％的細胞組織難以明確性質；另一方面，針吸活檢診斷明確的甲狀腺癌，最終證實只有17%-5l％的準確率。因此需要新的方法提高對甲狀腺癌診斷的準確性和特異性。進行BRAF基因突變可進一步提高術前細針抽吸活檢（fineneedleaspiration,FNA）細胞學檢查對甲狀腺惡性結節(jié)的診斷率。

當前第88頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控甲狀腺癌治療相關基因檢測當前第89頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控黑色素瘤靶向治療相關基因檢測BRAF是原癌基因，編碼的絲/蘇氨酸特異性激酶參與調控細胞內多種生物學事件，如細胞生長、分化和凋亡等。研究發(fā)現(xiàn)，約66%惡性黑色素瘤存在BRAF基因突變，其中約80-90%為V600E突變。

新一代靶向藥物PLX4032可選擇性抑制BRAFV600E突變，I期臨床試驗(87例患者)表明，PLX4032治療BRAFV600E突變型黑色素瘤的有效率高達81%，可使目標病變體積縮小≥30%。Ⅱ期臨床試驗(132例患者)截至2010年9月的數(shù)據(jù)顯示，確證的反應率為52%。

當前第90頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥

藥物基因組學(pharmacogcnomics)是20世紀90年代末發(fā)展起來的從基因水平研究基因序列的多態(tài)性與藥物效應多樣性之間的關系，研究遺傳因素對藥物效應的影響，確定藥物作用的靶點，從表型到基因型的藥物反應的個體多樣性。即：研究基因本身及其突變體對不同個體藥物作用效應差異的影響，以此為平臺指導合理用藥，提高用藥的安全性和有效性，避免不良反應，減少藥物治療的費用和風險。通過對患者的基因位點進行檢測，能進一步確定對特定藥物具有很強敏感性或抵抗性的患病人群，從而指導臨床開出適合不同個體的處方，使患者既能獲得最佳治療效果，又能避免藥物的不良反應，達到個體化用藥的目的。當前第91頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

藥物靶基因檢測方法臨床意義鉑類ERCC1核苷酸修復相關基因熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感抗微管類藥物紫杉醇,長春新堿TUBB33型微管蛋白熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感吉西他濱RRM1核酸核苷還原酶熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感抗代謝藥物TYMS胸腺苷合成酶熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感伊利替康UGT1A1尿苷葡萄糖醛酸轉移酶基因測序檢測突變判定伊立替康用藥的毒性依托泊苷TOP2ADNA解旋酶熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感芳香化酶抑制劑CYC19A1芳香化酶基因測序檢測突變突變影響藥物療效當前第92頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

ERCC1（excisionrepaircrosscomplementgroup1，核苷酸切除修復交叉互補組1）基因編碼一種含有297個氨基酸的蛋白質,參與DNA鏈的切割和損傷修復,其表達產物與DNA修復酶缺乏互補基因F(XPF)形成緊密的異二聚體(ERCC1-XPF),具有損傷識別和切除5‘端的雙重作用,在核苷酸切除修復(nucleotideexcisionrepair,NER)中起到限速或調節(jié)的重要作用。鉑類抗癌藥物的細胞毒性作用主要是通過形成鉑-DNA加合物。DNA基因修復主要是由NER和鏈間交聯(lián)完成的,而ERCC1是他們中一個關鍵因素,是參與NER過程并與順鉑耐藥緊密相關的關鍵因子。研究表明ERCC1表達與化療療效呈負相關,這與ERCC1在DNA修復中的作用相關,尤其是ERCC1能使順鉑誘導的DNA絡合物的清除增加,從而降低療效。美國國家癌癥綜合治療聯(lián)盟（NCCN）的非小細胞肺癌的臨床治療指南（第二版，2009）中明確指出：“在接受鉑類化療藥物治療前進行ERCC1mRNA的表達水平的檢測可提高治療的有效率和患者的生存率”。當前第93頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

當前第94頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

抗有絲分裂藥物是化療藥物的重要組成部分，根據(jù)與微管的結合部位不同可分為三類：紫杉烷類（如紫杉醇、紫杉萜）；長春堿類（如長春新堿、長春瑞濱）以及秋水仙素類。紫杉醇通過與微管蛋白結合，形成穩(wěn)定的微管束，抑制真核細胞的有絲分裂。它使腫瘤細胞停止在G2期和M期,抑制細胞復制,阻止癌細胞增殖。細胞的微管蛋白分α，β兩個亞型，是細胞骨架的重要組成部分，是有絲分裂時紡錘體的組成的單位，也是抗微管蛋白的主要作用靶點。β-微管蛋白Ⅲ基因（tubulinbeta-3chain，TUBB3基因）編碼的3型微管蛋白與抗微管與抗微管化療藥敏感性的關系最密切。在多種腫瘤細胞系的研究和臨床研究中，都顯示TUBB3mRNA表達水平與抗微管類化療的療效密切相關。當前第95頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

胸苷酸合成酶（ThymidylateSynthetase，TYMS）是DNA合成的關鍵酶，在DNA合成與修復中起重要作用,是葉酸代謝循環(huán)中起中心作用的酶類之一，也是以5-氟尿嘧啶(5-FU)為基礎化療的靶酶。5-Fu在體內須轉化為相應的核苷酸類似物才能發(fā)揮細胞毒作用，其主要機制為轉化為一磷酸氟代脫氧尿苷(FdUMP),后者與TYMS、5,10-亞甲基四氫葉酸形成三聯(lián)復合物，并抑制TYMS，阻礙dTMP的從頭合成；并且以FdUTP或FUTP的形式摻入到DNA或RNA分子中,破壞其結構和功能。臨床研究表明，在包括直腸癌、肺癌、乳腺癌、頭頸鱗狀細胞癌等多種腫瘤患者中，TYMS基因低表達水平的患者接受氟類化療的效果較好。所以，檢測腫瘤患者中TYMS的基因表達水平可以預測氟類藥物的療效。當前第96頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

核苷酸還原酶(ribonucleotidereductase,RR)是RNA合成的前體,它能使核糖核苷酸還原成為脫氧核糖核苷酸,后者是DNA合成和修復所必需的,是DNA合成通路中的限速酶,其包括2個亞單位:RRM1和RRM2。RRM1基因編碼核糖核苷還原酶M1亞單位，是腫瘤抑制基因，能抑制腫瘤轉移。吉西他濱（Gemcitabine,GEM））是嘧啶類抗代謝藥,屬細胞周期特異性藥物,作用于DNA合成期即S期,使DNA合成發(fā)生障礙。RRM1是鹽酸GEM耐藥的一個重要預測指標。。美國國家癌癥綜合治療聯(lián)盟（NCCN）的非小細胞肺癌的臨床治療指南（第二版，2009）中明確指出：“在接受吉西他濱藥物治療前進行RRM1mRNA的表達水平的檢測可提高治療的有效率和患者的生存率”。當前第97頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因表達與用藥

依托泊苷用藥檢測（TOP2A基因）

依托泊苷（etoposide）為細胞周期特異性抗腫瘤藥物，是DNA拓撲酶Ⅱ（TopoⅡ）抑制劑。其抗癌機制是作用于DNA拓撲異構酶，形成藥物-酶-DNA穩(wěn)定的可逆性復合物，阻礙DNA修復。TopoⅡ抑制劑通過直接作用TopoⅡ或僅與雙鏈DNA中的一條鏈結合以影響TopoⅡ功能。研究表明TopoⅡα酶活性的降低或表達水平降低都會造成TopoⅡ抑制劑藥物耐藥。研究報道：高表達的TopoⅡα使用依托泊苷效果較好，低表達的TopoⅡα對依托泊苷藥物耐藥。當前第98頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（2）、基因突變與用藥與順鉑化療耐藥相關突變點XRCC1突變點檢測

XRCC1是堿基切除修復和單鏈斷裂修復系統(tǒng)中的重要成分。目前XRCC1基因中已識別的氨基酸突變中與鉑類藥物敏感性的研究主要集中在第194(Arg→Trp)和第399(Arg→Gln)密碼子這兩個位點。王中華等發(fā)現(xiàn)在XRCC1Arg194Trp基因表達中，攜帶Arg/Arg基因型的患者對鉑類藥物化療失敗的風險是至少攜帶一個Trp等位基因患者的3倍；攜帶XRCC1399Arg/Gln或Gln/Gln基因型的患者對鉑類藥物化療失敗的風險是XRCC1399Arg/Arg攜帶者的2.7倍。

當前第99頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（2）、基因突變與用藥與順鉑化療耐藥相關突變點

XPD突變點檢測XPD也稱之為ERCC2，在DNA損傷修復中起著重要作用。XPD的多態(tài)性可以改變DNA修復能力，與鉑類藥物的敏感性密切相關。Hemminki等報道,攜帶312Asn/Asn的個體修復嘧啶二聚體的能力比野生基因型低50%。并進一步發(fā)現(xiàn)XPD312SNP變異數(shù)目與化療具有很好的相關性，即含有變異型等位基因的個數(shù)越多，其中位生存時間越短。GSTP1突變點檢測谷胱甘肽-S-轉移酶（GSTP1)催化谷胱甘肽與多種毒性復合物(包括鉑類制劑)結合,形成低毒高水溶性物質排出細胞外。GSTP1-105基因型對胃癌病人接受含順鉑藥物化療敏感性產生影響,其中GSTP1-105Val/Val基因型的病人化療有效率(67%)及中位生存時間(15個月)明顯長于基因型為Ile/Ile和Ile/Val(21%和6個月)的病人,認為GSTP1-105的基因多態(tài)性檢測可以預測胃癌病人對含順鉑化療的敏感性及預后。當前第100頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（2）、基因突變與用藥與5-氟尿嘧啶化療耐藥相關突變點亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)突變點檢測

MTHFR是葉酸代謝過程中的關鍵酶，可將還原型葉酸轉變成5-甲四氫葉酸（5-MTHF），從而使FdUMP、TS與還原型葉酸組成的三元復合物減少，削弱5-Fu的抗腫瘤作用。MTHFR基因具有多態(tài)性，其中最常見的是其第677位密碼子發(fā)生的由T到C得變異（C677T），和第1298位密碼子發(fā)生的由A到C得變異（A1298C）。具有變異型的癌細胞的MTHFR活性降低，細胞增殖速度加快，而對5-Fu的敏感性增高，MTHFR基因型的改變還可以影響葉酸的濃度及其在細胞內的分布而改變腫瘤細胞的生長及其對化療的敏感性。

當前第101頁\共有108頁\編于星期一\15點腫瘤臨床分子診斷技術的應用進展三、腫瘤治療的分子監(jiān)控2、化療藥物治療指導用藥（1）、基因突變與用藥與5-氟尿嘧啶化療耐藥相關突變點胸腺嘧啶合成酶(TYMS)

多數(shù)臨床研究顯示，分析病患的TS3’-UTR可協(xié)助預測5-FU的治療效果，并指出若檢測出病患帶有TS3’-UTR野生型6-bp同型合子基因，則建議應考慮以其他藥物代替5-Fu或合并治療。倘若可在化學治療之前得知病患的TS3’-UTR基因型。即可協(xié)助臨床醫(yī)師選擇最合適的藥物與計量，以使化療的效果達到最佳，并使病患因藥物副作用而產生的痛苦降至最低。胸苷酸合成酶（TS）基因多態(tài)性的存在會影響5-Fu對結直腸癌的療效。TS