實(shí)驗(yàn)三動(dòng)物性食品生物性污染的檢驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)三動(dòng)物性食品生物性污染的檢驗(yàn)第一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二一.生物性污染的來源微生物污染(microorganismpollution)寄生蟲污染(parasiticalpollution)昆蟲污染(insecticalpollution)第二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二PathogensSpoilageOrganismsVirusesBacteriumFoodborneInfectionMicroorganismsUnpleasantsmellandtasteFungi第三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二內(nèi)源性污染外源性污染外源性生物性污染是動(dòng)物性食品微生物污染的主要途徑第四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二二.生物性污染的評價(jià)指標(biāo)菌落總數(shù)細(xì)菌總數(shù)大腸菌群值（MPN）致病菌檢測(PCR法)其他第五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆談?dòng)物性食品菌落總數(shù)、大腸菌群測定及常見致病菌PCR檢測的原理、步驟和方法了解動(dòng)物性食品菌落總數(shù)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行衛(wèi)生判定第六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二1.鮮乳的微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)的測定檢驗(yàn)處理24±2h或48±2h36±1℃報(bào)告菌落記數(shù)每皿加入適量營養(yǎng)瓊脂選擇3個(gè)適宜稀釋度，吸取1ml加入滅菌平皿作成幾個(gè)倍數(shù)的稀釋液第七頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二注意事項(xiàng)無菌操作稀釋度的選擇平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度為宜；每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿記數(shù)要求30-300＞300＜30＞300或＜30第八頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二2.鮮乳大腸菌群值的測定第九頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL(g)檢樣中大腸菌群的最可能數(shù)。判定標(biāo)準(zhǔn)第十頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二3.常見致病菌的快速檢測

——SE的PCR檢測原理以擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。不斷重復(fù)這一過程，可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。因?yàn)樾潞铣傻腄NA也可以作為模板，因而PCR可使DNA的合成量呈指數(shù)增長。第十一頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二PCR的基本成分模板DNA特異性引物(SEF14)熱穩(wěn)定DNA聚合酶dNTP二價(jià)陽離子緩沖液過程(高溫變性、低溫退火、中溫延伸)第十二頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二引物設(shè)計(jì)

利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer5.0針對SEF14主要結(jié)構(gòu)亞單位sefA的基因序列設(shè)計(jì)引物:上游引物UsefA為5′-ATGCGTAAATCAGCATCTG-3′；下游引物L(fēng)sefA為5′-TTAGTTTTGATACTGCTGAAC-3′第十三頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二樣品處理（模板制備）以12000rpm離心5min,上清液即含基因組DNA待檢肉樣乳1g/mL以9mL增菌液混合研碎，制成食品勻漿液37℃振蕩培養(yǎng)3小時(shí)取樣液1mL以2000rpm離心2min,取上清液以8000rpm離心5min,沉淀以50uL懸浮沸水浴10min后迅速置冰浴5min第十四頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二反應(yīng)體系10×Buffer2.5uLdNTP2.0MgCl22.0上游引物（20uM）1uL下游引物（20uM）1uL模板2uLTaqDNAPolymerase0.25滅菌ddH2Oupto25uL第十五頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二反應(yīng)參數(shù)1.Initialdenature95℃5min2.Denature95℃60s3.Anealing47℃60s4.Elongation72℃60sReturnto2for30cycle5.Finalelongation72℃10minKeep4℃5min第十六頁，共十八頁，編輯于2023年，星期二瓊脂糖凝膠電泳電泳條件：argrose1%U80VT50minPCR產(chǎn)物+