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實(shí)驗(yàn)一血涂片的制作及免疫細(xì)胞的形態(tài)觀察第一頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑僬莆瘴⒘坎裳把科闹谱鞣椒á趯W(xué)習(xí)使用光學(xué)顯微鏡觀察免疫細(xì)胞第二頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二二、實(shí)驗(yàn)原理
血涂片是臨床化驗(yàn)中最常規(guī)的技術(shù),也是血液學(xué)研究中的最基本技術(shù)。將血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本,經(jīng)瑞氏(Wright)染液染色后,不同免疫細(xì)胞中的顆粒可以呈現(xiàn)不同的顏色。根據(jù)細(xì)胞中顆粒的顏色、大小及多少,再結(jié)合細(xì)胞的大小及細(xì)胞核的形態(tài),就可以將免疫細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。
第三頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二三、實(shí)驗(yàn)器材器材:醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、鑷子、經(jīng)脫脂洗凈的載玻片等試劑:瑞氏(Wright)染液,瑞特氏染料0.1克溶于60ml
甲醇中,過(guò)濾。貯褐色瓶中備用。(配置時(shí),要先將瑞特氏染料置研缽體內(nèi)邊研邊滴加甲醇,使染料溶液得更好。)第四頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二四、實(shí)驗(yàn)步驟1.采血采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂,干后用采血針刺破指腹或耳垂的皮膚;動(dòng)物采血時(shí)先將耳部剪毛,酒精消毒后,刺破動(dòng)物耳部皮膚,擠去第一滴血不要(因含單核細(xì)胞較多)。第五頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二第六頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二2.涂片擠出第二滴血置于載玻片的一端,再取另一張邊緣光滑的載玻片,斜置于血涂片的前緣,先向后稍移動(dòng)輕輕觸及血滴,使血液沿玻片端展開成線狀,兩玻片的角度以30~40O為宜(角度過(guò)大血膜較厚,角度小則血膜薄),輕輕將載玻片向前推進(jìn),即涂成血液薄膜(如圖),推進(jìn)時(shí)速度要一致,否則血膜成波浪形,厚薄不勻。第七頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二第八頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二3.染色待涂片在空氣中完全干燥后,滴加數(shù)滴瑞氏染液蓋滿血膜為止,染色1~3min。然后滴加等量的緩沖液(pH6.4)或蒸餾水沖去染液,吸水紙吸干,鏡檢。第九頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二4.封片經(jīng)染色的涂片完全干燥后,用中性樹膠封片保存。第十頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二5.觀察分別用低倍、高倍和油鏡觀察血涂片,分辨不同的血細(xì)胞類型。第十一頁(yè),共十二頁(yè),編輯于2023年,星期二五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
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