結(jié)核桿菌及其診斷課件

目錄1結(jié)核分枝桿菌感染現(xiàn)狀2結(jié)核分枝桿菌生物特性、致病性及臨床診斷3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用4本室目前結(jié)核分枝桿菌檢測試劑情況分析5病例分析1結(jié)核分枝桿菌感染現(xiàn)狀1我國擁有近5.5億的結(jié)核感染人群2我國每年新發(fā)生肺結(jié)核患者100萬例3結(jié)核病主要經(jīng)呼吸道傳播4只要堅持正規(guī)治療，絕大多數(shù)肺結(jié)核患者是可以治愈的AIDS患者極易合并結(jié)核分枝桿菌感染2結(jié)核分枝桿菌生物特性與致病性2.1生物特性抵抗力強(qiáng)：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內(nèi)可存活6～8個月，痰液可增強(qiáng)結(jié)核分枝桿菌的抵抗力。變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性易發(fā)生耐藥性：MDR和XDR，每年有大約44萬例多藥耐藥型肺結(jié)核新患者出現(xiàn)，約15萬患者死于多藥耐藥型肺結(jié)核2.2致病物質(zhì)：莢膜—親和吞噬細(xì)胞，含有多種酶，能抑制溶酶體同吞噬體結(jié)合該菌細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60%索狀因子—主要損傷細(xì)胞線粒體和抑制氧化磷酸化過程，抑制粒細(xì)胞游走和引起肉芽腫磷脂—能促進(jìn)單核細(xì)胞增生，并使巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)轭惿掀ぜ?xì)胞，從而形成肉芽腫硫酸腦苷酯—能抑制溶酶體同吞噬體結(jié)合蠟質(zhì)D—可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)超敏反應(yīng)蛋白質(zhì)—可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生超敏反應(yīng)2.3結(jié)核病的臨床診斷流行病學(xué)，臨床表現(xiàn)，體征，胸部影像學(xué)實驗室檢測：痰涂片細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)核菌素實驗結(jié)核抗體檢查，可供參考組織病理檢查3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用3.1染色檢測結(jié)核分枝桿菌方法抗酸染色法：玻片法：濃集法：夾層杯法妻-尼染色法熒光染色法3.2微生物檢測結(jié)核分枝桿菌的方法細(xì)菌培養(yǎng)羅-琴氏培養(yǎng)基：2周-5周才能長出菌落BactecTB460、BactecMGIT960：20天液體變色培養(yǎng)基：德國MBRedox系統(tǒng)噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結(jié)核分枝桿菌有親噬性結(jié)核桿菌L型：涂片其形態(tài)不易與其他細(xì)菌的L型相區(qū)別，蚌埠醫(yī)學(xué)院研制的結(jié)核桿菌L型液體培養(yǎng)基使結(jié)核桿菌L型生長迅速3.3免疫學(xué)方法檢測結(jié)核分枝桿菌抗體PPD試驗：結(jié)核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.5%結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.9%純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.0%PPD抗原：敏感性83.6%結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等新的免疫檢測技術(shù)TSPOTTB技術(shù)，QuantiFERON－TB

利用結(jié)核桿菌感染者外周血單核細(xì)胞中存在結(jié)核特異的活化T淋巴細(xì)胞,這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核桿菌特異抗原刺激后分泌干擾素而設(shè)計的T細(xì)胞免疫斑點試驗。

3.4結(jié)核分枝桿菌分子生物學(xué)診斷技術(shù)巢式PCR：PCR-免疫層析法：多重PCR:定量PCR：結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.流行病學(xué)，臨床表現(xiàn)，體征，胸部影像學(xué)變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性結(jié)核抗體檢查，可供參考提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結(jié)合載體，擁有數(shù)量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數(shù)量，放大了信號強(qiáng)度，提高了檢測的靈敏度蠟質(zhì)D—可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)超敏反應(yīng)結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA4×109/L，N0.純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用一、男性患者，31歲。3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑AIDS患者極易合并結(jié)核分枝桿菌感染3免疫學(xué)方法檢測結(jié)核分枝桿菌抗體雙膝、踝關(guān)節(jié)紅腫，以左踝為著，雙下肢可觸及數(shù)個蠶豆大小結(jié)節(jié)性紅斑。結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等胸片兩肺文理增多，左踝關(guān)節(jié)X線攝片骨質(zhì)未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。新的PCR技術(shù)應(yīng)用于檢測SSCP：單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，SSCP用于結(jié)核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測PCR-RFLP技術(shù)：PCR和限制性內(nèi)切酶相結(jié)合的技術(shù)，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測GeneChips：檢測結(jié)核桿菌、菌種鑒定、研究耐藥基因以及基因組比較分析有靈敏快速、特異性高等特點。納米技術(shù)的應(yīng)用HSAM：雜交信號放大方法利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA

提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結(jié)合載體，擁有數(shù)量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數(shù)量，放大了信號強(qiáng)度，提高了檢測的靈敏度

3.5上述方法應(yīng)用比較染色檢測：是臨床診斷快速廉價易行的方法，但是陽性率太低。細(xì)菌培養(yǎng)：結(jié)核菌感染的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，速度太慢，陽性率仍然較低。免疫學(xué)方法：一種快速、簡單、有較好敏感性和特異性的結(jié)核病輔助診斷，但檢測敏感性和特異性有待提高，但新的免疫方法的應(yīng)用帶來希望，但還需要大量的樣本認(rèn)證。分子生物學(xué)方法:快速、有效、特異性和敏感性均較高。4免疫室目前結(jié)核分枝桿菌檢測試劑應(yīng)用情況報告1.檢測結(jié)核抗體2.采用是金標(biāo)法3.應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑4.采用的原理相同，但針對的特異性抗體不相同5.試劑的準(zhǔn)確度、敏感性及特異性還有較大的提升空間5病例分析一、男性患者，31歲。因反復(fù)咳嗽、咳痰、發(fā)熱、盜汗伴游走性關(guān)節(jié)疼痛及結(jié)節(jié)性紅斑1年，患者1年前因受涼后發(fā)熱、咳嗽、咯痰，在某院診為“上感”，經(jīng)抗生素及對癥治療病情無緩解，咳嗽日漸加重，伴盜汗、乏力，踝、膝關(guān)節(jié)游走性紅、腫、熱痛及雙下肢結(jié)節(jié)性紅斑。曾就診于數(shù)家醫(yī)院均診斷為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并發(fā)慢性支氣管炎。查體：T37.5℃，P86/分，BP14.7/9.3kPa。發(fā)育正常，貧血貌。心界不大，心率86，心律規(guī)則，各瓣膜區(qū)無雜音，左肺可聞及干啰音。雙膝、踝關(guān)節(jié)紅腫，以左踝為著，雙下肢可觸及數(shù)個蠶豆大小結(jié)節(jié)性紅斑。實驗室檢查：WBC6.4×109/L，N0.65，L0.33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。抗“O”450U，RF陰性，ECG正常，，彩色多譜勒超聲心動圖檢查未見異常。胸片兩肺文理增多，左踝關(guān)節(jié)X線攝片骨質(zhì)未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。纖維支氣管鏡檢查左上葉支氣管粘膜充血水腫，有粗糙不平小顆粒，刷檢涂片見大量抗酸桿菌，活檢病理診斷為支氣管內(nèi)膜結(jié)核。診斷：支氣管內(nèi)膜結(jié)核，結(jié)核變態(tài)反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎。原因分析：：①體檢不仔細(xì)或未拍攝X線胸片；②只注意排除肺部結(jié)核而忽略了潛在的某些肺外結(jié)核或深部淋巴結(jié)結(jié)核；③將頸淋巴結(jié)結(jié)核誤診為口、咽部一般細(xì)菌感染所致的非特異性淋巴結(jié)炎；④未做結(jié)核菌素試驗。謝謝大家3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用3.1染色檢測結(jié)核分枝桿菌方法抗酸染色法：玻片法：濃集法：夾層杯法3.3免疫學(xué)方法檢測結(jié)核分枝桿菌抗體PPD試驗：結(jié)核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.5%結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.9%純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.0%PPD抗原：敏感性83.6%結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性結(jié)核抗體檢查，可供參考心界不大，心率86，心律規(guī)則，各瓣膜區(qū)無雜音，左肺可聞及干啰音。染色檢測：是臨床診斷快速廉價易行的方法，但是陽性率太低。②只注意排除肺部結(jié)核而忽略了潛在的某些肺外結(jié)核或深部淋巴結(jié)結(jié)核；莢膜—親和吞噬細(xì)胞，含有多種酶，能抑制溶酶體同吞噬體結(jié)合純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。SSCP：單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，SSCP用于結(jié)核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測新的PCR技術(shù)應(yīng)用于檢測33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。新的PCR技術(shù)應(yīng)用于檢測變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性試劑的準(zhǔn)確度、敏感性及特異性還有較大的提升空間蠟質(zhì)D—可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)超敏反應(yīng)應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑抵抗力強(qiáng)：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內(nèi)可存活6～8個月，痰液可增強(qiáng)結(jié)核分枝桿菌的抵抗力。應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。雙膝、踝關(guān)節(jié)紅腫，以左踝為著，雙下肢可觸及數(shù)個蠶豆大小結(jié)節(jié)性紅斑。胸片兩肺文理增多，左踝關(guān)節(jié)X線攝片骨質(zhì)未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。抵抗力強(qiáng)：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內(nèi)可存活6～8個月，痰液可增強(qiáng)結(jié)核分枝桿菌的抵抗力。2結(jié)核分枝桿菌生物特性與致病性2我國每年新發(fā)生肺結(jié)核患者100萬例利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA2我國每年新發(fā)生肺結(jié)核患者100萬例索狀因子—主要損傷細(xì)胞線粒體和抑制氧化磷酸化過程，抑制粒細(xì)胞游走和引起肉芽腫結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等②只注意排除肺部結(jié)核而忽略了潛在的某些肺外結(jié)核或深部淋巴結(jié)結(jié)核；結(jié)核抗體檢查，可供參考染色檢測：是臨床診斷快速廉價易行的方法，但是陽性率太低。33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。3結(jié)核病主要經(jīng)呼吸道傳播33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。1結(jié)核分枝桿菌感染現(xiàn)狀4結(jié)核分枝桿菌分子生物學(xué)診斷技術(shù)分子生物學(xué)方法:快速、有效、特異性和敏感性均較高。分子生物學(xué)方法:快速、有效、特異性和敏感性均較高。雙膝、踝關(guān)節(jié)紅腫，以左踝為著，雙下肢可觸及數(shù)個蠶豆大小結(jié)節(jié)性紅斑。細(xì)菌培養(yǎng)：結(jié)核菌感染的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，速度太慢，陽性率仍然較低。變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA新的PCR技術(shù)應(yīng)用于檢測33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑試劑的準(zhǔn)確度、敏感性及特異性還有較大的提升空間③將頸淋巴結(jié)結(jié)核誤診為口、咽部一般細(xì)菌感染所致的非特異性淋巴結(jié)炎；結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑PPD試驗：結(jié)核菌素蛋白衍生物皮膚試驗提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結(jié)合載體，擁有數(shù)量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數(shù)量，放大了信號強(qiáng)度，提高了檢測的靈敏度33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。免疫學(xué)方法：一種快速、簡單、有較好敏感性和特異性的結(jié)核病輔助診斷，但檢測敏感性和特異性有待提高，但新的免疫方法的應(yīng)用帶來希望，但還需要大量的樣本認(rèn)證。提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結(jié)合載體，擁有數(shù)量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數(shù)量，放大了信號強(qiáng)度，提高了檢測的靈敏度2微生物檢測結(jié)核分枝桿菌的方法4本室目前結(jié)核分枝桿菌檢測試劑情況分析流行病學(xué)，臨床表現(xiàn)，體征，胸部影像學(xué)應(yīng)用過二種以上的金標(biāo)試劑4×109/L，N0.2我國每年新發(fā)生肺結(jié)核患者100萬例細(xì)菌培養(yǎng)：結(jié)核菌感染的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，速度太慢，陽性率仍然較低。原因分析：：①體檢不仔細(xì)或未拍攝X線胸片；結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結(jié)合載體，擁有數(shù)量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數(shù)量，放大了信號強(qiáng)度，提高了檢測的靈敏度3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結(jié)核分枝桿菌有親噬性液體變色培養(yǎng)基：德國MBRedox系統(tǒng)3免疫學(xué)方法檢測結(jié)核分枝桿菌抗體4×109/L，N0.染色檢測：是臨床診斷快速廉價易行的方法，但是陽性率太低。心界不大，心率86，心律規(guī)則，各瓣膜區(qū)無雜音，左肺可聞及干啰音。3結(jié)核分枝桿菌檢測方法及其應(yīng)用分子生物學(xué)方法:快速、有效、特異性和敏感性均較高。結(jié)核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.SSCP：單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，SSCP用于結(jié)核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測3免疫學(xué)方法檢測結(jié)核分枝桿菌抗體1染色檢測結(jié)核分枝桿菌方法TSPOTTB技術(shù)，QuantiFERON－TB曾就診于數(shù)家醫(yī)院均診斷為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎并發(fā)慢性支氣管炎。新的PCR技術(shù)應(yīng)用于檢測分子生物學(xué)方法:快速、有效、特異性和敏感性均較高。5℃，P86/分，BP14.2結(jié)核分枝桿菌生物特性與致病性③將頸淋巴結(jié)結(jié)核誤診為口、咽部一般細(xì)菌感染所致的非特異性淋巴結(jié)炎；診斷：支氣管內(nèi)膜結(jié)核，結(jié)核變態(tài)反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎。胸片兩肺文理增多，左踝關(guān)節(jié)X線攝片骨質(zhì)未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。4×109/L，N0.免疫學(xué)方法：一種快速、簡單、有較好敏感性和特異性的結(jié)核病輔助診斷，但檢測敏感性和特異性有待提高，但新的免疫方法的應(yīng)用帶來希望，但還需要大量的樣本認(rèn)證。結(jié)核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等1染色檢測結(jié)核分枝桿菌方法變異性：可發(fā)生形態(tài)、菌落、毒力、免疫原性33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。胸片兩肺文理增多，左踝關(guān)節(jié)X線攝片骨質(zhì)未見異常痰涂片