混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測定高效液相色譜法

混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測定

高效液相色譜法范圍本標準規(guī)定了混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的高效液相色譜測定方法。本標準適用于混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測定。本方法在混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚檢出限為25mg/kg，定量限為50mg/kg；肉桂醛的檢出限為2.5mg/kg，定量限為5.0mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備原理試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛經甲醇提取、過膜后，供高效液相色譜儀測定，外標法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。水：GB/T6682，一級。甲醇。乙腈：色譜純。標準貯備溶液：精密稱取百里香酚（CAS：89-83-8，純度不低于98.0%）、香芹酚（CAS：499-75-2，純度不低于98.0%）、丁香酚（CAS：97-53-0，純度不低于98.0%）和肉桂醛對照品（CAS：104-55-2，純度不低于98.0%）適量（精確至0.01mg），分別置于10mL容量瓶中，用甲醇（色譜純）溶解并稀釋至刻度，混勻，配成濃度百里香酚、香芹酚、丁香酚為10mg/mL、肉桂醛為1.0mg/mL的標準貯備溶液。2℃～8℃密封保存，有效期為3個月?；旌蠘藴使ぷ魅芤海簻蚀_移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標準貯備溶液（4.4）各1.0mL置于同一10mL容量瓶中，用甲醇（色譜純）稀釋定容至刻度，混勻。該溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚的濃度為1.0mg/mL、肉桂醛濃度為100μg/mL。2℃～8℃密封保存，有效期為2周。微孔濾膜：0.45μm，有機系。儀器設備高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。電子天平：感量為0.1mg和0.01mg；渦旋振蕩器。樣品按GB/T20195制備試樣，至少200g，粉碎過0.42mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中備用。試驗步驟提取平行做兩份實驗。稱取試樣0.1～1g（精確至0.1mg），置于25mL棕色容量瓶中，加入15mL甲醇（4.2），振蕩提取10min，用甲醇（4.2）溶解定容至刻度，混勻。上清液過0.45μm的微孔濾膜，供上機測定。液相色譜參考條件色譜柱：C18柱，長150mm，內徑4.6mm，粒徑5μm，或性能相當者。柱溫：30℃。波長：280nm。流動相：乙腈（4.3）+水=42+58。流速：1.0mL/min。進樣量：20μL。標準系列溶液準確移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標準工作溶液（4.5）適量，用甲醇（色譜純）稀釋成百里香酚、香芹酚、丁香酚濃度分別為1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、500μg/mL，肉桂醛濃度分別為0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL的標準系列溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。測定按照7.2給出的色譜參考條件，分別上機測定標準系列溶液和試樣溶液。試樣溶液與標準溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的保留時間相對偏差在±2.5%之內，百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標準溶液圖譜參見附錄A。以百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的濃度為橫坐標，以其響應值（峰面積）為縱坐標，繪制標準曲線，標準曲線相關系數(shù)不低于0.99。單點校準時，試樣溶液與標準溶液中待測物的響應值相差不超過30%。如超出線性范圍，應用甲醇稀釋（n倍）后，重新進樣分析。試驗數(shù)據(jù)處理多點校準試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以質量分數(shù)ωi計，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，多點校準按式（1）計算： （SEQ標準自動公式\*ARABIC1）式中：Ci——從標準曲線查得的試樣溶液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——提取液的定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質量，單位為克（g）；n——稀釋倍數(shù)。平行測XX果用算術平均值表示，結果保留3位有效數(shù)字。單點校準試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以質量分數(shù)ωi計，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，單點校準按式（2）計算： （SEQ標準自動公式\*ARABIC2）式中：Ai——試樣溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛色譜峰面積；ASi——標準工作液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的峰面積；CSi——標準工作液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣提取液的定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質量，單位為克（g）；n——稀釋倍數(shù)。平行測XX果用算術平均值表示，結果保留3位有效數(shù)字。精密度在重復性條件下兩次獨立測試結果與其算術平均值的絕對差值不大于該算術平均值的10%。

（資料性附錄）

百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛