混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測(cè)定高效液相色譜法

混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測(cè)定

高效液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測(cè)定。本方法在混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚檢出限為25mg/kg，定量限為50mg/kg；肉桂醛的檢出限為2.5mg/kg，定量限為5.0mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備原理試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛經(jīng)甲醇提取、過膜后，供高效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?。水：GB/T6682，一級(jí)。甲醇。乙腈：色譜純。標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：精密稱取百里香酚（CAS：89-83-8，純度不低于98.0%）、香芹酚（CAS：499-75-2，純度不低于98.0%）、丁香酚（CAS：97-53-0，純度不低于98.0%）和肉桂醛對(duì)照品（CAS：104-55-2，純度不低于98.0%）適量（精確至0.01mg），分別置于10mL容量瓶中，用甲醇（色譜純）溶解并稀釋至刻度，混勻，配成濃度百里香酚、香芹酚、丁香酚為10mg/mL、肉桂醛為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。2℃～8℃密封保存，有效期為3個(gè)月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（4.4）各1.0mL置于同一10mL容量瓶中，用甲醇（色譜純）稀釋定容至刻度，混勻。該溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚的濃度為1.0mg/mL、肉桂醛濃度為100μg/mL。2℃～8℃密封保存，有效期為2周。微孔濾膜：0.45μm，有機(jī)系。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。電子天平：感量為0.1mg和0.01mg；渦旋振蕩器。樣品按GB/T20195制備試樣，至少200g，粉碎過0.42mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中備用。試驗(yàn)步驟提取平行做兩份實(shí)驗(yàn)。稱取試樣0.1～1g（精確至0.1mg），置于25mL棕色容量瓶中，加入15mL甲醇（4.2），振蕩提取10min，用甲醇（4.2）溶解定容至刻度，混勻。上清液過0.45μm的微孔濾膜，供上機(jī)測(cè)定。液相色譜參考條件色譜柱：C18柱，長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm，或性能相當(dāng)者。柱溫：30℃。波長(zhǎng)：280nm。流動(dòng)相：乙腈（4.3）+水=42+58。流速：1.0mL/min。進(jìn)樣量：20μL。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液準(zhǔn)確移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.5）適量，用甲醇（色譜純）稀釋成百里香酚、香芹酚、丁香酚濃度分別為1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、500μg/mL，肉桂醛濃度分別為0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。測(cè)定按照7.2給出的色譜參考條件，分別上機(jī)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的保留時(shí)間相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)，百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜參見附錄A。以百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的濃度為橫坐標(biāo)，以其響應(yīng)值（峰面積）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)不低于0.99。單點(diǎn)校準(zhǔn)時(shí)，試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值相差不超過30%。如超出線性范圍，應(yīng)用甲醇稀釋（n倍）后，重新進(jìn)樣分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理多點(diǎn)校準(zhǔn)試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ωi計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，多點(diǎn)校準(zhǔn)按式（1）計(jì)算： （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1）式中：Ci——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——提取液的定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；n——稀釋倍數(shù)。平行測(cè)XX果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。單點(diǎn)校準(zhǔn)試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ωi計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，單點(diǎn)校準(zhǔn)按式（2）計(jì)算： （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC2）式中：Ai——試樣溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛色譜峰面積；ASi——標(biāo)準(zhǔn)工作液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的峰面積；CSi——標(biāo)準(zhǔn)工作液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——試樣提取液的定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；n——稀釋倍數(shù)。平行測(cè)XX果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的10%。

（資料性附錄）

百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛