菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典演示文稿

菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典演示文稿當(dāng)前第1頁\共有40頁\編于星期五\12點（優(yōu)選）菊花的組織培養(yǎng)經(jīng)典當(dāng)前第2頁\共有40頁\編于星期五\12點菊花的組織培養(yǎng)當(dāng)前第3頁\共有40頁\編于星期五\12點有絲分裂受精卵細胞分化

在個體發(fā)育中，由一個或一種細胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。1、細胞分化的概念知識回顧（一）當(dāng)前第4頁\共有40頁\編于星期五\12點黑色素細胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培養(yǎng)的上皮細胞，始終保持為上皮細胞，而不會變成其他類型的細胞。2、穩(wěn)定性3、不可逆性細胞分化發(fā)生在整個生命進程中。1、持久性2、細胞分化的特點造血干細胞原紅細胞早幼紅細胞中幼紅細胞晚幼紅細胞成熟紅細胞死亡4、普遍性當(dāng)前第5頁\共有40頁\編于星期五\12點

細胞分化是否意味著細胞中遺傳物質(zhì)的改變？

遺傳物質(zhì)沒有改變，不同組織的細胞共同來源于受精卵，經(jīng)有絲分裂產(chǎn)生。當(dāng)前第6頁\共有40頁\編于星期五\12點3、細胞分化的實質(zhì)ABDCEEDCABEDCABEDCABEDCAB基因在個體發(fā)育過程中，不同細胞中遺傳信息的執(zhí)行情況不同即基因的選擇性表達的過程當(dāng)前第7頁\共有40頁\編于星期五\12點

紅細胞合成血紅蛋白(不合成肌動蛋白)肌細胞肌動蛋白基因開啟合成肌動蛋白(不合成血紅蛋白)肌動蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因開啟試一試:現(xiàn)在你能解釋這些現(xiàn)象了嗎?4、細胞分化的結(jié)果細胞產(chǎn)生了不同種類的蛋白質(zhì)即出現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能當(dāng)前第8頁\共有40頁\編于星期五\12點愈傷組織胚狀體1958，美國，斯圖爾德

植物組織培養(yǎng)離體回顧知識（二）當(dāng)前第9頁\共有40頁\編于星期五\12點（一）、植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，最終形成完整的植株。又稱：植物離體培養(yǎng)當(dāng)前第10頁\共有40頁\編于星期五\12點脫分化（或去分化）：由高度分化的植物組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。愈傷組織：細胞排列疏松、無規(guī)則、高度液泡化的無定形的薄壁細胞。當(dāng)前第11頁\共有40頁\編于星期五\12點切取形成層無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化（二）、植物組織培養(yǎng)的基本過程當(dāng)前第12頁\共有40頁\編于星期五\12點植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細胞植物體脫分化細胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細胞分裂素>生長素細胞分裂素<生長素再分化植物細胞培養(yǎng)不需要光需要光當(dāng)前第13頁\共有40頁\編于星期五\12點（三）、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)---細胞全能性概念：高度分化的植物細胞，仍然具有發(fā)育成完整個體的潛能?；A(chǔ)：生物體的每一個細胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。表達條件：離體條件無菌操作適宜物質(zhì)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)（植物激素）適宜的營養(yǎng)物質(zhì)溫度、酸堿度、光照等條件的控制當(dāng)前第14頁\共有40頁\編于星期五\12點思考這個試驗說明了已經(jīng)分化的細胞核具有什么特性？高度分化的動物體細胞的細胞核有發(fā)育成完整個體的潛能多利羊的誕生動物細胞有沒有這種能力？當(dāng)前第15頁\共有40頁\編于星期五\12點已經(jīng)分化的細胞，仍然具有發(fā)育成完整個體的潛能。細胞全能性思考為什么已經(jīng)分化的細胞具有全能性呢？高度分化的細胞含有保持物種發(fā)育所需要的全套基因植物組織培養(yǎng)技術(shù)動物的克隆技術(shù)當(dāng)前第16頁\共有40頁\編于星期五\12點1、培育無病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法（受體細胞為植物細胞）（四)、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：

3、人工種子（解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題）當(dāng)前第17頁\共有40頁\編于星期五\12點三、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）材料的種類、年齡及保存時間長短等（2）營養(yǎng)（3）植物激素（4）PH、溫度、光照等條件當(dāng)前第18頁\共有40頁\編于星期五\12點（1）植物材料的選擇---直接關(guān)系實驗的成敗煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難材料的年齡、保存時間的長短菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝注意：外植體的選取

不同植物的組織培養(yǎng)難度不同同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同當(dāng)前第19頁\共有40頁\編于星期五\12點（2）營養(yǎng)---MS培養(yǎng)基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等

D、植物激素：生長素、細胞分裂素、赤霉素等當(dāng)前第20頁\共有40頁\編于星期五\12點討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持細胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。

當(dāng)前第21頁\共有40頁\編于星期五\12點常用的植物激素：生長素、細胞分裂素和赤霉素生長素、細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈加強的趨勢激素的使用順序、使用的量及比例影響植物細胞的發(fā)育方向（3）植物激素的影響當(dāng)前第22頁\共有40頁\編于星期五\12點使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細胞分裂素有利于細胞分裂，但不利分化先使用細胞分裂素后使用生長素細胞既分裂、也分化同時使用分化頻率高使用比例實驗結(jié)果生長素細胞分裂素>生長素細胞分裂素<生長素細胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促進愈傷組織生長當(dāng)前第23頁\共有40頁\編于星期五\12點思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？生長素/細胞分裂素高利于根的形成適中利于愈傷組織的形成當(dāng)前第24頁\共有40頁\編于星期五\12點供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度均為0.5mg／Ｌ２、誘導(dǎo)菊花從芽：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度分別為2---3mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ3、誘導(dǎo)菊花生根：在MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入NAA或IAA，質(zhì)量濃度均為0.1mg／Ｌ當(dāng)前第25頁\共有40頁\編于星期五\12點(4)、pH、溫度、光照（菊花組織培養(yǎng)為例）

pH=5.8溫度控制在18—22℃每日光照12h當(dāng)前第26頁\共有40頁\編于星期五\12點制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽培四、實驗操作移栽沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌當(dāng)前第27頁\共有40頁\編于星期五\12點（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實驗室一般使用4℃保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備1、配制各種母液①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計算用量當(dāng)前第28頁\共有40頁\編于星期五\12點2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養(yǎng)液②調(diào)PH③培養(yǎng)基的分裝由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌當(dāng)前第29頁\共有40頁\編于星期五\12點1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為70％的酒精中搖動2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分數(shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液當(dāng)前第30頁\共有40頁\編于星期五\12點（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種當(dāng)前第31頁\共有40頁\編于星期五\12點當(dāng)前第32頁\共有40頁\編于星期五\12點4、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分數(shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件③插入時應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分當(dāng)前第33頁\共有40頁\編于星期五\12點正常苗污染苗當(dāng)前第34頁\共有40頁\編于星期五\12點1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑當(dāng)前第35頁\共有40頁\編于星期五\12點思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實驗嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。當(dāng)前第36頁\共有40頁\編于星期五\12點（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒培養(yǎng)溫度控制在18-22℃每日用日光燈光照12h當(dāng)前第37頁\共有40頁\編于星期五\12點（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時間3、移栽幼苗長壯后