專題十四基因工程

專題十四基因工程二輪復(fù)習(xí)都以_____為遺傳物質(zhì)遺傳信息傳遞遵循__________共用同一套_________細胞生物共性轉(zhuǎn)化實驗基因工程目的基因的獲取構(gòu)建基因表達載體將目的基因?qū)胧荏w細胞目的基因的檢測與鑒定操作程序啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點從基因文庫獲取PCR擴增化學(xué)法人工合成植物細胞：動物細胞：微生物細胞：目的基因插入？轉(zhuǎn)錄？翻譯？個體水平鑒定？農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法Ca2+處理法DNA分子雜交分子雜交抗原-抗體雜交接種實驗限制酶、逆轉(zhuǎn)錄酶Taq酶限制酶、DNA連接酶、運載體Ti質(zhì)粒探針工具知識網(wǎng)絡(luò)近三年真題回顧1.（2016Ⅰ卷.40）某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后,與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應(yīng),用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}:

(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具,應(yīng)具備的基本條件有

(答出兩點即可),而作為基因表達載體,除滿足上述基本條件外,還需具有啟動子和終止子。能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因1.（2016Ⅰ卷.40）某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后,與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應(yīng),用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}:

(2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選,在上述四種大腸桿菌細胞中,未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細胞是不能區(qū)分的,其原因是

;并且

_________和

的細胞也是不能區(qū)分的,其原因是

。在上述篩選的基礎(chǔ)上,若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落,還需使用含有

的固體培養(yǎng)基。二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均不生長含有質(zhì)粒載體含有重組質(zhì)粒二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長四環(huán)素1.（2016Ⅰ卷.40）某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后,與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應(yīng),用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}:

(3)基因工程中,某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體,其DNA復(fù)制所需的原料來自于

。受體細胞2.（2016Ⅲ卷.40）圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點,圖(b)為某種表達載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識,回答下列問題:(1)經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達載體被

酶切后的產(chǎn)物連接,理由是

。

Sau3AⅠ兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端2.（2016Ⅲ卷.40）圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點,圖(b)為某種表達載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識,回答下列問題:(2)若某人利用圖(b)所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子,如圖(c)所示。這三種重組子中,不能在宿主細胞中表達目的基因產(chǎn)物的有

,不能表達的原因是

。

甲和丙甲中目的基因插入在啟動子的上游,丙中目的基因插入在終止子的下游,二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄2.（2016Ⅲ卷.40）圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點,圖(b)為某種表達載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識,回答下列問題:(3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有

和_____,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是

。

E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶T4DNA連接酶3.（2017Ⅰ卷.38）真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒有，原核生物沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列的機制。已知在人體中基因A（有內(nèi)含子）可以表達出某種特定蛋白（簡稱蛋白A）?；卮鹣铝袉栴}：（1）某同學(xué)從人的基因組文庫中獲得了基因A，以大腸桿菌作為受體細胞卻未得到蛋白A，其原因是_____________________。參考答案：（1）基因A有內(nèi)含子，在大腸桿菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列不能被切除，無法表達出蛋白A（2）若用家蠶作為表達基因A的受體，在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中，不選用_________作為載體，其原因是______________________________________。（3）若要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體。因為與家蠶相比，大腸桿菌具有_________________（答出兩點即可）等優(yōu)點。（4）若要檢測基因A是否翻譯出蛋白A，可用的檢測物質(zhì)是___________________（填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”）。噬菌體噬菌體的宿主是細菌，而不是家蠶繁殖快、容易培養(yǎng)蛋白A的抗體（5）艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實驗為證明DNA是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻，也可以說是基因工程的先導(dǎo)，如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示是______________________。DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體4.（2017Ⅱ卷.38）幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：⑴在進行基因工程操作時，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實驗材料，原因是

。提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是

。⑵以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是

。⑶若要使目的基因在受體細胞中表達，需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細胞，原因是

（答出兩點即可）。嫩葉組織細胞易破碎防止RNA降解在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板按照堿基互補配對的原則可以合成cDNA目的基因無復(fù)制原點；目的基因無表達所需啟動子⑷當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是

。⑸若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是

。磷酸二酯鍵目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常5.（2017Ⅲ卷.38）編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由系列甲的部分片段組成，如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}：⑴現(xiàn)要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），則所構(gòu)建的表達載體載入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是

。編碼乙的DNA序列起始端無ATG，轉(zhuǎn)錄出的mRNA無起始密碼子5.（2017Ⅲ卷.38）編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由系列甲的部分片段組成，如圖1所示。⑵某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為

，加入了_____________作為合成DNA的原料。模板dNTP5.（2017Ⅲ卷.38）⑶現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白之是否具有刺激T淋巴細增殖的作用。某同學(xué)做了如下實驗：將一定量的含T淋巴細胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細胞濃度，結(jié)果如圖2。①由圖2可知：當(dāng)細胞濃度達到a時，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細胞濃度不再增加，此時若要使T淋巴細胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是

。細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是

。進行細胞傳代培養(yǎng)維持培養(yǎng)液的pH5.（2017Ⅲ卷.38）⑶現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白之是否具有刺激T淋巴細增殖的作用。某同學(xué)做了如下實驗：將一定量的含T淋巴細胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細胞濃度，結(jié)果如圖2。②僅根據(jù)圖1、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少

（填“A”、“B”、“C”、“D”或“E”）片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細胞增殖的效果。C6.（2018Ⅰ卷.38）（1）博耶（H．Boyer）和科恩（S．Coben）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細胞中進行了表達。該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了___________________________________________（答出兩點即可）。（2）體外重組的質(zhì)粒可通過Ca2+參與的________方法導(dǎo)入大腸桿菌細胞，而體外重組的噬菌體DNA通常需與_________組裝成完整的噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細胞，在細菌、心肌細胞、葉肉細胞中，可作為重組噬菌體宿主細胞的是_______。（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細胞內(nèi)表達時，表達出的蛋白質(zhì)可能會被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用__________的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中因添加______________的抑制劑。體外重組的質(zhì)?？梢赃M入受體細胞；真核生物基因可在原核細胞中表達轉(zhuǎn)化外殼蛋白（噬菌體蛋白）細菌蛋白酶缺陷型蛋白酶7.（2018Ⅱ卷.38）某種熒光蛋白（GFP）在紫外線或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5’末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達載體P1其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點的示意圖如下，圖中E1~E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。（1）據(jù)圖推斷，該團隊在將甲插入質(zhì)粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是________

。使用這兩種酶進行酶切是為了保證_______，也是為了保證__________。E1和E4甲的完整甲與載體正確連接7.（2018Ⅱ卷.38）（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了__________和___________過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的________移入牛的________

中，體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，某同學(xué)用PCR方法進行鑒定，在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細胞的____________（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。轉(zhuǎn)錄翻譯細胞核去核卵母細胞核DNA知識內(nèi)容要求近三年考察情況備考建議1.基因工程的誕生Ⅰ2017Ⅰ卷.38，2018Ⅰ卷.38本部分內(nèi)容重點考查基因工程原理及操作，備考時重點是仔細閱讀教材，對于常見問題總結(jié)好答案記熟。2.基因工程的原理及技術(shù)（含PCR技術(shù)）Ⅱ2016Ⅰ卷.40，2016Ⅲ卷.40，2017Ⅰ卷.38，2017Ⅱ卷.38、2017Ⅲ卷.38，2018Ⅰ卷.38，2018Ⅱ卷.383.基因工程的應(yīng)用Ⅱ2017Ⅱ卷.38、2017Ⅲ卷.38，2018Ⅱ卷.384.蛋白質(zhì)工程Ⅰ

考綱要求及考情分析1.限制酶的來源及作用？識別序列特點？為什么不切割細菌本身DNA？一般，為什么用同一種限制酶切割質(zhì)粒和目的基因片段？用兩種限制酶切割目的基因片段的好處是？限制酶來源：原核生物識別序列特點：中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的細菌中限制酶之所以不切斷自身DNA，是因為含有某種限制酶的細胞，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列，或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。用同一種限制酶切割質(zhì)粒和目的基因片段：可保證產(chǎn)生相同的黏性末端，末端之間能堿基互補配對形成重組DNA。雙酶切的好處：防止目的基因或質(zhì)粒（載體）自身環(huán)化，保證目的基因正向連接到質(zhì)粒上，確保只有一個目的基因連接到質(zhì)粒上。作用：原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是細菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時，會利用限制酶將外源DNA切割掉，使之失效以保證自身的安全。2.黏性末端與平末端連接有無特異性？（P7思考與探究1）連接酶分別是？不同限制酶切割產(chǎn)物連接后還能再用原來的限制酶切割嗎？E·coliDNA連接酶：只能連接黏性末端T4DNA連接酶：黏性末端和平末端（2009年江蘇生物高考題）(2)圖中②表示HindIII與BamI酶切、DNA連接酶連接的過程，此過程可獲得_______種重組質(zhì)粒；如果換用BstI與BamHI酶切，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得_______種重組質(zhì)粒。21（2005天津高考）限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶Ⅱ的切點．（1）請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端．______（2）請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端．______（3）在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來？為什么？______．因為：_____________________________．

（3）能

因為它們有相同的黏性末端限制酶的選擇EcoRIBamHISau3AI目的基因EcoRIBamHIBamHISau3AIApaIHindIHindIBamHI（1）限制酶切點宜選在目的基因兩側(cè)，而不能破壞目的基因；（2）限制酶切點不能破壞所有的標(biāo)記基因(至少留一個標(biāo)記基因)；（3）針對農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法限制酶切點宜選在Ti質(zhì)粒的T－DNA片段中以便嵌入目的基因；（4）一般用同一種限制酶切割目的基因和運載體，不同的限制酶切割產(chǎn)生相同的粘性末端也可以；（5）如果可以最好用不同的限制酶切割目的基因；（6）切完連接確保目的基因連接在啟動子和終止子之間……限制酶的選擇注意事項使目的基因定向連接到載體上（或防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和反向連接）3.（運）載體的必要性？具備條件？常見種類？天然DNA分子可以直接用做基因工程載體嗎？具備條件：能自我復(fù)制、有一個或多個切割位點、有標(biāo)記基因位點及對受體細胞無害、分子大小應(yīng)適合等。實際上自然存在的質(zhì)粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進行人工改造后才能用于基因工程操作。4.mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA的步驟？cDNA合成過程是：第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補的DNA單鏈，形成RNA-DNA雜交分子。第二步，核酸酶H使RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈降解，使之變成單鏈的DNA。第三步，以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補的DNA鏈，形成雙鏈DNA分子。由mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過程5.為什么要構(gòu)建基因文庫？基因文庫、基因組文庫、cDNA文庫的區(qū)別？怎樣從基因文庫中得到我們需要的目的基因？提示：構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過PCR方式從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個體發(fā)育的不同階段表達的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫。根據(jù)目的基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA，以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)。區(qū)別P10表格6.PCR中文？原理？第幾輪循環(huán)可以得到兩條脫氧核苷酸鏈等長的目的基因片段？前提？特殊酶（誰發(fā)現(xiàn)并分離）？原料？中文：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便于根據(jù)這一序列合成引物。特殊酶：熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）由錢嘉韻從嗜熱菌中分離。原料：dCTP、dATP、dGTP、dTTP（4種脫氧核苷酸）原理：DNA雙鏈復(fù)制的原理?；虮容^小，核苷酸序列已知。8.構(gòu)建基因表達載體的目的是什么？為什么不將生物所有DNA直接導(dǎo)入受體細胞？動植物、微生物的基因表達載體有差別嗎？只含目的基因行不行？提示：有人采用總DNA注射法進行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個生物中的總DNA提取出來，通過注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒有進行表達載體的構(gòu)建，這種方法針對性差，完全靠運氣，也無法確定什么基因?qū)肓耸荏w植物。此法目前爭議頗多，嚴(yán)格來講不算基因工程。目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。不行，一個基因表達載體的組成，除了目的基因外，還必須有啟動子、終止子以及標(biāo)記基因等。9.啟動子、終止子的位置和作用？標(biāo)記基因的作用？啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。終止子位于基因的尾端，也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，作用是使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。標(biāo)記因的作用是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。10.轉(zhuǎn)化？目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ǎ哭D(zhuǎn)化：目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程。雙子葉植物和裸子植物。酚類化合物。根據(jù)農(nóng)桿菌感染植物時，Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上特點，將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，實現(xiàn)轉(zhuǎn)化?；驑尫ǎ簡巫尤~植物，鎢粉粒子和金粉粒子?；ǚ酃芡ǖ婪ǎ何覈茖W(xué)家獨創(chuàng)。11.為什么早期基因工程都以原核生物（比如大腸桿菌）作為受體細胞？可使用大腸桿菌生產(chǎn)糖蛋白嗎？想用大腸桿菌生產(chǎn)鼠的β-珠蛋白怎么設(shè)計？提示：有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細胞中，大腸桿菌不存在這兩種細胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。（1）從小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的編碼序列（cDNA）。（2）將cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個表達載體。（3）將表達載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達載體未進入大腸桿菌中，大腸桿菌會因不含有