微生物實驗報告

Xxx農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)微生物學(xué)試驗匯報葡萄球菌和鏈球菌分離判定姓名＿＿＿＿＿＿＿＿＿學(xué)號＿＿＿＿＿＿＿＿＿專業(yè)班級＿＿＿＿＿＿＿＿＿指導(dǎo)教師＿＿＿＿＿＿＿＿＿葡萄球菌和鏈球菌分離判定摘要目標(biāo)：對A.B兩種菌種進(jìn)行分離判定主要方法：經(jīng)過分離培養(yǎng)形態(tài)觀察生化試驗進(jìn)行判定關(guān)鍵詞葡萄球菌鏈球菌分離判定引言葡萄球菌，屬微球菌科葡萄球菌屬，革蘭氏陽性菌。對生長環(huán)境要求不高在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或堿性厭氧，最適培養(yǎng)溫度為37攝氏度。最適PH7.4.在普通培養(yǎng)基上形成濕潤光滑隆起邊緣整齊圓形菌落。多數(shù)菌株能分解葡萄糖乳糖麥芽糖蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;致病菌株能夠分解甘露糖，還能夠產(chǎn)生血漿凝固酶。有致病性葡萄球菌主要是金黃色葡萄球菌，致病性葡萄球菌判定可經(jīng)過色素顏色，溶血性，過氧化氫酶試驗（觸酶試驗），凝固酶試驗，甘露糖發(fā)酵試驗等判定鏈球菌，革蘭氏陽性菌，老齡菌或被吞噬細(xì)菌或展現(xiàn)陰性。呈圓形或卵圓形，直徑為0.5～1.0微米，常呈鏈狀或成雙排列。通常致病性鏈球菌鏈比非致病性鏈長。個別菌株有鞭毛，有菌株有菌毛，幼齡培養(yǎng)物可形成莢膜。大多數(shù)為兼性厭氧菌，少數(shù)為厭氧菌。致病菌對營養(yǎng)要求比較高，普通培養(yǎng)基中生長不良。在加入血液血清葡萄糖等培養(yǎng)基中生長良好。在血瓊脂平板上可長成直徑約0.1～1.0mm,灰白色表面光滑,邊緣整齊小菌落.多數(shù)致病菌落可形成溶血現(xiàn)象.強致病菌可形成β溶血.產(chǎn)生α溶血環(huán)鏈球菌致病性不強,為條件致病菌.γ型溶血菌落周圍無溶血現(xiàn)象,通常不治病.1.材料與方法1.1材料1.1.1兩種未知試驗菌種A菌B菌1.1.2培養(yǎng)基制作材料（1）藥品牛肉膏蛋白胨NacI瓊脂0.1mol/L和1mol/LNaoH溶液,0.1mol/L和1mol/LHCI溶液。（2）儀器天平或臺秤，高壓蒸汽滅菌器。（3）玻璃器材移液管試管燒杯量筒錐形瓶培養(yǎng)皿玻璃漏斗。（4）其余物品鑰匙稱量紙ph試紙記號筆脫脂棉線繩紗布試管塞牛皮紙注射器等。1.2方法1.2.1普通培養(yǎng)基制作方法（1）稱量：牛肉膏1克，蛋白胨2克NaCI1克蒸餾水200毫升于燒杯中。（2）溶解：加熱至沸騰，邊加熱邊用玻璃棒攪拌。（3）調(diào)整PH：利用配制好HCINaOH溶液來調(diào)整，用ph試紙測ph，直到調(diào)整至7.5為止。（4）分裝：將配置好培養(yǎng)基分裝入錐形瓶試管中，塞上試管塞或者錐形瓶塞，用牛皮紙包裝，扎緊瓶口，在121攝氏度溫度下高壓蒸汽滅菌20—30min。（5）倒板:將經(jīng)過高壓蒸汽滅菌成有培養(yǎng)基錐形瓶和培養(yǎng)皿放在試驗臺上，點燃酒精燈。右手托著錐形瓶底，左手拔下塞子在酒精燈火焰上稍加灼燒，然后左手拿著平板，靠近酒精燈火焰，將錐形瓶口在酒精燈火焰上稍加灼燒。然后將培養(yǎng)基分別倒入兩個平板中，使培養(yǎng)基后約三毫米。倒完后將瓶塞再加灼燒后再塞上。等候十五分鐘。培養(yǎng)基充分冷卻后即可接種。1.2.2血瓊脂培養(yǎng)基制作方法（1）稱量：牛肉膏1克，蛋白胨2克NaCI1克蒸餾水200毫升于燒杯中。（2）溶解：加熱至沸騰，邊加熱邊用玻璃棒攪拌。（3）調(diào)整PH：利用配制好HCINaOH溶液來調(diào)整，用ph試紙測ph，直到調(diào)整至7.5為止。（4）分裝：將配置好培養(yǎng)基裝入錐形瓶30毫升，塞上塞子，牛皮紙扎緊瓶口，在121攝氏度溫度下高壓蒸汽滅菌20—30min。（5）制備血液：用注射器對兔子心臟進(jìn)行抽血，抽血之前注射器先抽取0.3毫升檸檬酸鈉作為抗凝劑，抽取5毫升兔血。抽血之前，應(yīng)先確定兔子心臟位置，左側(cè)第三四肋骨之間下針，先用碘酒棉擦再用酒精棉擦拭消毒。抽血完成要對試驗臺進(jìn)行消毒。（6）制作血平板：將抽取血用拔掉針頭注射器沿錐形瓶瓶壁注入經(jīng)過高壓蒸汽滅菌已冷卻至50攝氏度左右培養(yǎng)基中。輕輕搖勻后快速按照普通培養(yǎng)基倒板方法倒如兩個培養(yǎng)基中。1.2.3細(xì)菌劃線分離培養(yǎng)基經(jīng)過高壓蒸汽滅菌之后，倒入平板，用經(jīng)過滅菌接種環(huán)等工具在無菌條件下接種菌株與培養(yǎng)基上。第一次劃線:將接種環(huán)置于酒精燈火焰上先豎燒后橫燒。然后左手拿起培養(yǎng)有菌種培養(yǎng)基A，將灼燒后接種環(huán)先戳平板上面水蒸氣降溫，再挑菌。左手放下菌種A，拿起盛有培養(yǎng)基平板再靠近壁內(nèi)側(cè)劃線數(shù)道。第二次劃線：將上一步接種環(huán)灼燒冷卻后，從上次劃線部位引一條線至臨側(cè)，角度約為120度。（如圖1-1所表示）第三次第四次劃線均與第二次劃線一致，參考（2）此步驟需要將A接種一個普通培養(yǎng)基平板，一個血平板。B菌種接種一個普通培養(yǎng)基平板，一個血平板。圖1-1圖1-12.結(jié)果與分析2.1普通瓊脂平板2.1.1普通瓊脂平板A.B兩菌種生長情況如圖2-1;2-22-12-22.1.2血瓊脂平板血瓊脂平板平板上AB兩菌種生長情況2-32-42.3革蘭氏染色2.3.1基本原理在經(jīng)過革蘭氏染色，革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌則展現(xiàn)紅色。所以，能夠經(jīng)過革蘭氏染色區(qū)分革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。2.3.2器材（1）試劑；草酸銨結(jié)晶紫，革蘭氏碘溶液，乙醇95％沙黃水溶液，生理鹽，水香柏油（2）器材：載玻片，光學(xué)顯微鏡，接種環(huán)，酒精燈等2.3.3試驗步驟將載玻片置于酒精燈火焰上灼燒去除蠟層，待冷卻后兩端各滴一滴生理鹽水，用灼燒后接種環(huán)挑取菌涂抹于載破片生理鹽水里。烘干后用草酸銨結(jié)晶紫染1-2min是，水洗。革蘭氏碘液染色1-3min，水洗。乙醇脫色30s，水洗。沙黃復(fù)染30s，水洗。吸水紙拭干后在光學(xué)顯微鏡下，最終用油鏡觀察鏡檢。2.3.4試驗結(jié)果與分析葡萄球菌與鏈球菌均為革蘭氏陽性均呈紫色，如圖2-5；2-6所表示2-52-6觸酶試驗（過氧化氫試驗）2.4.1基本原理葡萄球菌能夠產(chǎn)生過氧化氫酶（接觸酶），此酶能夠分解過氧化氫使其分解產(chǎn)生水和氧氣。所以能夠從有沒有氣泡判別是否存在過氧化氫酶，進(jìn)而判別出存在葡萄球菌。而鏈球菌不產(chǎn)生過氧化氫酶所以不產(chǎn)氣。2.4.2試驗器材3％過氧化氫溶液，經(jīng)過滅菌小試管，玻璃棒。2.4.3試驗步驟取2ml3％過氧化氫與小試管中，將玻璃棒置于酒精燈火焰上灼燒滅菌冷卻后蘸取菌種置于小試管中，觀察現(xiàn)象。2.4.4試驗結(jié)果與分析在試驗中，A菌沒有產(chǎn)生氣泡，觸酶陽性。而B菌產(chǎn)生了氣泡所以為觸媒陰性。經(jīng)過試驗，初步斷定A為鏈球菌，B為葡萄球菌。結(jié)果如圖2-72-72.5凝固酶試驗2.5.1試驗原理致病性葡萄球菌能夠產(chǎn)生凝固酶，是一個分泌至菌體外游離固酶，作用類似凝血酶原物質(zhì)，能夠產(chǎn)生使血清凝結(jié)2.5.2試驗器材（1）試劑：0.5ml兔血清葡萄球菌（2）器材：小試管接種環(huán)酒精燈2.5.3試驗步驟用經(jīng)過酒精燈火焰灼燒滅菌接種環(huán)挑取疑為葡萄球菌菌種，置于盛有兔血清小試管中，充分混勻置于36左右環(huán)境中，培養(yǎng)2-4h，查看結(jié)果。2.5.4試驗結(jié)果與分析B菌血清凝固，凝固酶陽性。如圖2-8.2-82.6甘露醇發(fā)酵試驗2.6.1試驗器材甘露醇發(fā)酵管接種環(huán)酒精燈2.6.2基本原理金黃色葡萄球菌發(fā)酵甘露糖產(chǎn)酸，使試劑管里指示劑顏色由紫變成黃色。2.6.3試驗步驟用用酒精燈灼燒過接種環(huán)挑取疑似葡萄球菌，置于甘露醇發(fā)酵管中，混勻后做好標(biāo)識密封37攝氏度培養(yǎng)18-24h。2.6.4試驗結(jié)果與分析經(jīng)過觀察B菌培養(yǎng)基由紫變黃，且產(chǎn)生渾濁。故為甘露醇試驗陽性。結(jié)果見圖2-92-93.討論3.1兔子抽血量不夠因為兔子數(shù)次抽血，造成血量不足或產(chǎn)血跟不上，造成在心臟跳動最快地方卻抽不出血。3.2油鏡觀察不到