第十一章流式細(xì)胞技術(shù)與流式細(xì)胞儀

第十一章流式細(xì)胞技術(shù)與流式細(xì)胞儀首頁 習(xí)題 習(xí)題參考答案習(xí)題名詞解釋選擇題簡答題一、 名詞解釋流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞術(shù)狹縫掃描流式細(xì)胞儀測量區(qū)樣品流鞘液流側(cè)向角散射延遲時(shí)間熒光靈敏度分選收獲率分選速度12.分選純度長通濾光片短通濾光片帶通濾光片細(xì)胞自發(fā)熒光零分辨率的流式系統(tǒng)二、 選擇題【A型題】 在五個(gè)選項(xiàng)中選出一個(gè)最符合題意的答案（最佳答案）。流式細(xì)胞儀中的鞘液和樣品流在噴嘴附近組成一個(gè)圓形流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為（）敏感區(qū)測量區(qū)激光區(qū)計(jì)算區(qū)

觀察區(qū)流式細(xì)胞儀使用的染色細(xì)胞受激光照射后發(fā)出熒光，同時(shí)產(chǎn)生（）電離輻射光散射電磁輻射光反射光電子流式細(xì)胞儀中的光電倍增管接收（）散射光熒光激光D?射線E.反光流式細(xì)胞儀中的光電二級管接收（）散射光熒光激光射線反光通過測量區(qū)的液柱斷裂成一連串均勻液滴的原因是在（）在流動室上加上了頻率為30kHz的信號在測量區(qū)上加上了頻率為30kHz的信號在壓電晶體上加上了頻率為30kHz的信號在光電倍增管上加上了頻率為30kHz的信號在光電二級管上加上了頻率為30kHz的信號將懸浮分散的單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異熒光染料染色后，放人樣品管，懸浮在樣品管中的單細(xì)胞懸液形成樣品流垂直進(jìn)入流式細(xì)胞儀的流動室，動力來自于（）激光壓電晶體氣體壓力熒光散射光流動室軸心至外壁的鞘液向下流動，形成包繞細(xì)胞懸液的是（）鞘液流

細(xì)胞流散射光熒光測量區(qū)各類細(xì)胞的特性信息在測量區(qū)被測定的時(shí)間為（）在細(xì)胞形成液滴以前在細(xì)胞形成液滴以后在細(xì)胞形成液滴過程中在細(xì)胞形成液滴前后在細(xì)胞形成液滴一小時(shí)樣品流在鞘流的環(huán)包下形成流體動力學(xué)聚焦，使樣品流不會脫離液流的軸線方向，并且保證每個(gè)細(xì)胞通過（）熒光照射區(qū)散射光照射區(qū)激光照射區(qū)X光照射區(qū)太陽光照射區(qū)前向角散射可以檢測（）A?細(xì)胞膜厚薄被測細(xì)胞的大小細(xì)胞質(zhì)多少核膜的折射率DNA含量在對細(xì)胞膜表面抗原的熒光檢測時(shí)通常使用（）線性放大器指數(shù)放大器對數(shù)放大器整數(shù)放大器函數(shù)放大器一般對DNA倍體測量時(shí)采用（）熒光信號的面積散射光信號的面積前向角散射信號面積和寬度散射光信號的寬度

熒光信號的寬度熒光信號的寬度常用來區(qū)分（）淋巴細(xì)胞紅細(xì)胞白細(xì)胞。.雙聯(lián)體細(xì)胞E.單倍體細(xì)胞光譜重疊校正的最有效方法是使用（）放大電路熒光電路散射光電路衰減電路E-雙激光立體光路若每秒鐘產(chǎn)生4萬個(gè)水滴,每秒鐘流出的細(xì)胞是1000個(gè)，則平均每40個(gè)水滴中有（）三個(gè)水滴是有細(xì)胞的二個(gè)水滴是有細(xì)胞的四個(gè)水滴是有細(xì)胞的一個(gè)水滴是有細(xì)胞的五個(gè)水滴是有細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)對HIV感染者或AIDS發(fā)病者進(jìn)行區(qū)別是通過（）測DNA凋亡峰胞質(zhì)抗原含量測定動態(tài)監(jiān)測T細(xì)胞亞群測凋亡調(diào)節(jié)蛋白DNA倍體含量測定下落的水滴通過一對平行板電極形成的靜電場時(shí)，帶正電荷的水滴向（）帶負(fù)電的電極板偏轉(zhuǎn)帶正電的電極板偏轉(zhuǎn)不偏轉(zhuǎn)前向角偏轉(zhuǎn)側(cè)向角偏轉(zhuǎn)什么是鑒別良、惡性腫瘤的特異指標(biāo)為（）非特異性酯酶含量測定胞質(zhì)抗原含量測定

DNA含量測定過氧化物酶含量測定DNA倍體含量測定衡量流式細(xì)胞儀檢測微弱熒光信號的重要指標(biāo)是（）靈敏度的高低熒光強(qiáng)度散射光大小精密度大小準(zhǔn)確度的高低分辨率是衡量儀器測量精度的指標(biāo)，通常用（）誤差值表示標(biāo)準(zhǔn)差值表示靈敏度值表示變異系數(shù)值表示精密度值表示與前向角散射密切相關(guān)的是（）細(xì)胞直徑細(xì)胞直徑的平方細(xì)胞核的形狀血小板數(shù)量病毒性質(zhì)流式細(xì)胞儀測定的標(biāo)本，不論是外周血細(xì)胞，還是培養(yǎng)細(xì)胞，首先要保證是（）單倍體細(xì)胞懸液B-雙倍體細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液白細(xì)胞懸液單細(xì)胞懸液光路與流路校正的主要目是確保（）激光光路穩(wěn)定樣品流穩(wěn)定激光光路與樣品流處于正交狀態(tài)熒光光光路與樣品流處于正交狀態(tài)散射光光路與樣品流處于正交狀態(tài)為保證樣品檢測時(shí)儀器處于最佳工作狀態(tài)，PMT校準(zhǔn)采用（）

樣品質(zhì)控品C?鞘液生理鹽水緩沖液為保證儀器在計(jì)數(shù)時(shí)的準(zhǔn)確性，流式細(xì)胞儀應(yīng)建立絕對計(jì)數(shù)（）樣品細(xì)胞鞘液細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)品樣品和鞘液管道應(yīng)用漂白粉液清洗的間隔時(shí)間為（）每月每天每季度每周每年FCM顯示激光器開啟錯誤，引起故障的可能原因是（）激光器關(guān)閉激光器門打開流式細(xì)胞儀連接錯誤清洗液少了數(shù)據(jù)太大，難以處理FCM顯示清洗液高度警示，引起故障的可能原因是（）激光器關(guān)閉激光器門打開流式細(xì)胞儀連接錯誤清洗液少了清洗液傳感器失靈FCM顯示數(shù)據(jù)處理速率錯誤，引起故障的可能原因是（）數(shù)據(jù)太大，難以處理激光器門打開流式細(xì)胞儀連接錯誤清洗液少了

清洗液傳感器失靈【X型題】每題的備選答案中有兩個(gè)或者兩個(gè)以上正確答案。流式細(xì)胞儀綜合了（ ）激光技術(shù)B?電子技術(shù)流體力學(xué)生物化學(xué)計(jì)算機(jī)技術(shù)流式細(xì)胞儀廣泛應(yīng)用于（ ）細(xì)胞生物學(xué)物理學(xué)免疫學(xué)電子學(xué)血液學(xué)FCM在細(xì)胞生物學(xué)研究中，應(yīng)用頻繁的領(lǐng)域是（ ）細(xì)胞周期DNA倍體細(xì)胞表面受體細(xì)胞表面抗原病毒表面抗體生物學(xué)顆粒的內(nèi)容包括（ ）DNARNA蛋白質(zhì)染色體細(xì)菌染色的細(xì)胞受激光照射后發(fā)出熒光，同時(shí)產(chǎn)生光散射。這些信號分別被（ ）光電倍增管熒光檢測器接收細(xì)胞檢測器接收激光檢測器接收光電二極管散射光檢測器接收DNA檢測器接收計(jì)算機(jī)通過儲存、計(jì)算、分析流式細(xì)胞檢測到的數(shù)字化信息，就可得到（ ）

離子多少細(xì)胞的大小核酸含量酶的性質(zhì)抗原的性質(zhì)流式細(xì)胞儀根據(jù)其結(jié)構(gòu)不同又可分（ ）一般流式細(xì)胞儀高級流式細(xì)胞儀特殊流式細(xì)胞儀狹縫掃描流式細(xì)胞儀零點(diǎn)流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀根據(jù)功能不同可分為（ ）臨床型普通型科研型特殊性靈敏型流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)可分為（ ）流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)激光光源及光束成形系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng)細(xì)胞分選系統(tǒng)流動室的類型有（ ）在室內(nèi)檢測的流動室激發(fā)型流動室在空氣中檢測的流動室熒光流動室顯微檢測流動室屬于FCM光學(xué)系統(tǒng)的是（ ）透鏡濾光片小孔流動室

分選系統(tǒng)FCM光學(xué)系統(tǒng)主要分為（ ）長通濾片短通濾片高通濾片低通濾片帶通濾片當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過激光照射區(qū)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)分別產(chǎn)生（）激光信號散射光信號熒光信號離子信號反射信號散射光分為（ ）后向角散射前向角散射反向角散射側(cè)向角散射正向角散射15.目前采用前向角散射和側(cè)向角散射這兩個(gè)參數(shù)組合，可區(qū)分經(jīng)裂解紅細(xì)胞處理后外周血中的（ ）淋巴細(xì)胞群體單核細(xì)胞群體血小板群體粒細(xì)胞群體紅細(xì)胞群體目前采用前向角散射和側(cè)向角散射這兩個(gè)參數(shù)組合，可區(qū)分未進(jìn)行裂解紅細(xì)胞處理的全血樣品中的（ ）淋巴細(xì)胞群體單核細(xì)胞群體血小板群體粒細(xì)胞群體紅細(xì)胞群體線性放大測量適合于檢測（ ）

細(xì)胞膜表面抗原的分布單核細(xì)胞含量總蛋白質(zhì)含量RNA含量DNA含量屬于細(xì)胞分選器組成內(nèi)容的是（ ）細(xì)胞分布水滴形成分選邏輯電路水滴充電E.水滴偏轉(zhuǎn)影響延遲時(shí)間的因素為（ ）平均延遲時(shí)間的不準(zhǔn)確性噴射液流的變化水滴分離點(diǎn)的變化細(xì)胞本身對水滴形成條件的影響水滴的性質(zhì)流式細(xì)胞儀在免疫學(xué)中的應(yīng)用包括（ ）淋巴細(xì)胞功能分析淋巴細(xì)胞及其亞群分析化療藥物對腫瘤細(xì)胞的凋亡機(jī)制腫瘤細(xì)胞的免疫檢測免疫分型分選指標(biāo)主要包括（ ）A.分選速度B.分選靈敏度C.分選純度D?分選精密度分選收獲率保證熒光信號產(chǎn)生的非常關(guān)鍵技術(shù)是（ ）熒光染料的選擇標(biāo)記染色方法鞘液的選擇細(xì)胞的選擇

細(xì)胞的分離FCM室內(nèi)應(yīng)注意（ ）配空調(diào)避光防塵除濕不用除濕三、簡答題簡述流式細(xì)胞儀生物學(xué)顆粒分析原理。簡述流式細(xì)胞儀細(xì)胞分選原理。流式細(xì)胞儀依據(jù)什么進(jìn)行分類？各類型有什么特點(diǎn)？流式細(xì)胞儀主要應(yīng)用在哪些領(lǐng)域？流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)由哪幾部分組成？流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)的功能？流式細(xì)胞儀的流動室的作用是什么？流式細(xì)胞儀的光源有什么特點(diǎn)？流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)組成和各種濾光片的作用是什么？流式細(xì)胞儀所檢測的信號有哪些？這些信號所代表的意義和作用是什么？流式細(xì)胞儀信號的測量方式和校正方法是什么？流式細(xì)胞儀分選器的組成和細(xì)胞分選原理是什么？流式細(xì)胞儀的主要性能指標(biāo)有哪些？流式細(xì)胞儀操作技術(shù)的質(zhì)量控制主要涉及哪幾個(gè)方面？流式細(xì)胞儀通常出現(xiàn)的故障及排除方法是什么？習(xí)題參考答案一、名詞解釋流式細(xì)胞儀：是以激光為光源，集流體力學(xué)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、細(xì)胞熒光化學(xué)和單克隆抗體等技術(shù)為一體的新型高科技儀器。流式細(xì)胞術(shù)：應(yīng)用流式細(xì)胞儀對于處在快速直線流動狀態(tài)中的生物顆粒進(jìn)行快速的、多參數(shù)的定量分析和分選的技術(shù)稱為流式細(xì)胞術(shù)。狹縫掃描流式細(xì)胞儀：被檢細(xì)胞直徑大于激光光斑直徑，當(dāng)細(xì)胞通過光束時(shí)，細(xì)胞各部分被依

次先后掃描，得到一維的細(xì)胞輪廓組方圖，可計(jì)算出細(xì)胞直徑大小、核直徑大小、核漿比例等一系列的形態(tài)學(xué)信息的流式細(xì)胞儀。測量區(qū)：鞘液流和樣品流在噴嘴附近組成一個(gè)圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點(diǎn)稱為測量區(qū)。樣品流：將特異熒光染料染色的單細(xì)胞懸液放人樣品管，在氣體壓力作用下，懸浮在樣品管中的單細(xì)胞經(jīng)管道進(jìn)入流式細(xì)胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動所形成的流束稱為樣品流。鞘液流：流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞樣品流的流束稱為鞘液流。側(cè)向角散射：側(cè)向角散射是指與激光束正交900方向的散射光信號。延遲時(shí)間：由細(xì)胞通過測量區(qū)到小水滴分離的時(shí)間大約為幾十毫秒，這個(gè)時(shí)間稱為延遲時(shí)間。熒光靈敏度：以能檢測到最少的異硫氰酸熒光素分子來表示，即微球上最少標(biāo)有多少個(gè)FITC分子時(shí)剛好能被檢測到，即為熒光靈敏度。分選收獲率：指被分出的細(xì)胞占原來溶液中該細(xì)胞的百分比。分選速度：分選速度指每秒可提取所要細(xì)胞的個(gè)數(shù)。分選純度：分選純度指要分選的目的細(xì)胞占分選出細(xì)胞的百分比。.長通濾光片：能使特定波長以上的光通過，特定波長以下的光不能通過的濾光片稱為長通濾光片。.短通濾光片：與長通濾光片相反，特定波長以下的光通過，特定波長以上的光被吸收或返回。.帶通濾光片：帶通濾光片允許一定波長范圍內(nèi)的光通過，一般濾光片上有兩個(gè)數(shù)值，一個(gè)為允許通過波長的中心值，另一個(gè)為允許通過光波段的范圍。如BP500/50表示其允許475nm?525nm波長的光通過。.細(xì)胞自發(fā)熒光：細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，稱為細(xì)胞自發(fā)熒光。17.零分辨率的流式系統(tǒng)：一般流式細(xì)胞儀的激光光斑為橢圓形，光斑直徑大于被檢細(xì)胞體積，只能提供細(xì)胞內(nèi)某種生物化學(xué)成分的參數(shù)，不能對細(xì)胞形態(tài)以亞細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行分辨，所以稱之為零分辨率的流式系統(tǒng)。二、選擇題【A型題】1.B2.B3.B4.A5.C6.C7.A8.A9.C10.B11.C12.A13.D14.E15.D16.C17.A18.E19.A20.D21.B22.E23.C24.B25.E26.D27.B28.E29.A【X型題】

1.ABCE2.ACE3.ABCD4.ABCDE5.AD6.BCDE7.AD8.AC9.ABCDE10.ACE11.ABC12.ABE13.BC14.BD15.ABD16.CE17.CDE18.BCDE19.ABCD20.ABCD21.ABCE22.ABDE23.ABCD三、簡答題簡述流式細(xì)胞儀生物學(xué)顆粒分析原理。答：經(jīng)特異熒光染料染色后的樣品沿流動室的軸心向下流動，流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞細(xì)胞懸液的鞘液流，鞘液和樣品流在噴嘴附近組成一個(gè)圓柱流束，與水平方向的激光束垂直相交。染色的細(xì)胞受激光照射后發(fā)出熒光，這些信號分別被光電倍增管接收，經(jīng)過計(jì)算機(jī)儲存、計(jì)算、分析這些數(shù)字化信息，就可得到細(xì)胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性質(zhì)等物理和生化指標(biāo)。簡述流式細(xì)胞儀細(xì)胞分選原理。答：當(dāng)某類細(xì)胞的特性與要分選的細(xì)胞相同時(shí)，流式細(xì)胞儀就會在這類細(xì)胞形成液滴時(shí)給含有這類細(xì)胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時(shí)，依所帶電荷的不同分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)，不帶電的液滴不發(fā)生偏轉(zhuǎn)，垂直落入廢液槽中被排出，從而達(dá)到細(xì)胞分類收集的目的。流式細(xì)胞儀依據(jù)什么進(jìn)行分類？各類型有什么特點(diǎn)？答：流式細(xì)胞儀根據(jù)功能不同可分為臨床型和科研型。臨床型只有分析功能，沒有分選功能，儀器的光路調(diào)節(jié)系統(tǒng)固定，自動化程度高，操作簡便，易學(xué)易掌握?？蒲行图扔蟹治龉δ苡钟蟹诌x功能，可快速將所感興趣的細(xì)胞分選出來，并可將單個(gè)或指定個(gè)數(shù)的細(xì)胞分選到特定的容器里，同時(shí)可選配多種波長和類型的激光器，適用于更廣泛更靈活的科學(xué)研究。流式細(xì)胞儀根據(jù)其結(jié)構(gòu)不同又可分為一般流式細(xì)胞儀和狹縫掃描流式細(xì)胞儀。前者的激光光斑為橢圓形，光斑直徑大于被檢細(xì)胞體積，只能提供細(xì)胞內(nèi)某種生物化學(xué)成分的參數(shù)，不能對細(xì)胞形態(tài)和亞細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行分辨。狹縫掃描流式細(xì)胞儀是一種高分辨率的檢測儀器，被檢細(xì)胞直徑大于激光光斑直徑，細(xì)胞通過光束時(shí)各部分被依次掃描，根據(jù)熒光信號的先后，就可得到一維的細(xì)胞輪廓組方圖，可計(jì)算出細(xì)胞直徑大小、核直徑大小、核漿比例等一系列的形態(tài)學(xué)信息。流式細(xì)胞儀主要應(yīng)用在哪些領(lǐng)域？答：流式細(xì)胞儀主要有下面的應(yīng)用領(lǐng)域：免疫學(xué)、血液學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、AIDS病檢測、自身免疫性疾病相關(guān)HLA抗原的分析和藥物學(xué)。流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)由哪幾部分組成？答：流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)可分為流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)，激光光源及光束成形系統(tǒng)，光學(xué)系統(tǒng)，信號

檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng)，細(xì)胞分選系統(tǒng)等五個(gè)部分。流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)的功能？答：流動室內(nèi)充滿了鞘液,鞘液的作用是將樣品流環(huán)包。鞘液流是一種穩(wěn)定流動的液體，操作人員無法隨意改變其流動的速度，樣品流在鞘流的環(huán)包下形成流體動力學(xué)聚焦，使樣品流不會脫離液流的軸線方向，并且保證每個(gè)細(xì)胞通過激光照射區(qū)的時(shí)間相等，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。流式細(xì)胞儀的流動室的作用是什么？答：流動室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央開一個(gè)孔徑為430|Jmx180pm的長方形孔，供細(xì)胞單個(gè)流過，檢測區(qū)在該孔的中心，這種流動室的光學(xué)特性良好，流速較慢，因而細(xì)胞受照時(shí)間長，可收集的細(xì)胞信號光通量大，配上廣角收集透鏡，可獲得很高的檢測靈敏度和測量精度。流式細(xì)胞儀的光源有什么特點(diǎn)？答：激光是一種相干光源，它能提供單波長、高強(qiáng)度及穩(wěn)定性高的光照，所以激光是細(xì)胞微弱熒光快速分析的理想光源。由于細(xì)胞的快速流動，每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過光照區(qū)的時(shí)間僅為川s左右，且細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號強(qiáng)弱，與被照射的時(shí)間和激發(fā)光的強(qiáng)度有關(guān)，因此細(xì)胞必須達(dá)到足夠的光照強(qiáng)度。流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)組成和各種濾光片的作用是什么？答：流式細(xì)胞儀的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片和小孔組成，它們分別將不同波長的熒光信號送入不同的電子探測器。濾光片分三類，主要作用是：長通濾光片使特定波長以上的光通過，特定波長以下的光不能通過；短通濾光片使特定波長以下的光通過，特定波長以上的光被吸收或返回；帶通濾光片允許一定波長范圍內(nèi)的光通過。流式細(xì)胞儀所檢測的信號有哪些？這些信號所代表的意義和作用是什么？答：流式細(xì)胞儀所檢測的信號有散射光和熒光信號。⑴散射光信號：散射光分為前向角散射和側(cè)向角散射，兩個(gè)參數(shù)組合，可區(qū)分經(jīng)裂解紅細(xì)胞處理后外周血白細(xì)胞中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞三個(gè)細(xì)胞群體，或在未進(jìn)行裂解紅細(xì)胞處理的全血樣品中找出血小板和紅細(xì)胞等細(xì)胞群體。⑵熒光信號：一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，另一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記細(xì)胞后，受激發(fā)照射得到的熒光信號，通過對這類熒光信號的檢測和定量分析能了解所研究細(xì)胞的存在和定量。流式細(xì)胞儀信號的測量方式和校正方法是什么？答：流式細(xì)胞儀信號的測量方式和校正方法分三類：熒光信號線性測量和對數(shù)測量主