DB15T 332-2000用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測豬瘟免疫抗體技術規(guī)程

用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測豬瘟免疫抗體技術規(guī)程TechnicalStandardsbymeans內(nèi)蒙古自治區(qū)質量技術監(jiān)督局發(fā)布用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測豬瘟血清抗體，制定出科學合理的免疫程序，達到有效防制豬瘟目的，制定本規(guī)程。本標準附錄A、附錄B是標準的附錄。本標準附錄C是提示的附錄。本標準由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧廳提出。本標準起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所。本標準主要起草人：李潤清、趙林立、王旭紅、楊冬梅、劉志剛。Ⅱ內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標準用酶聯(lián)檢疫吸附實驗檢測豬瘟免疫抗體技術規(guī)程TechnicalStandardsbymeansofEnzymeLink本規(guī)程規(guī)定了豬瘟免疫抗體檢測技術及操作方法。本規(guī)程檢測對象為內(nèi)蒙古自治區(qū)境內(nèi)飼養(yǎng)的生豬。本規(guī)程適用于內(nèi)蒙古自治區(qū)豬瘟免疫抗體檢測。根據(jù)具體情況，合理確定抽樣范圍，每群抽樣5%~20%。認真填寫抽樣送檢單，格式見附錄B(標2.2檢測樣品：無菌采集豬血，分離血清，檢驗所需血清約0.5～1ml,血清在冰凍狀態(tài)下保存和送2.3操作方法[試劑配制見附錄A(標準的附錄)]2.3.1用包被液將豬瘟抗原作100倍稀釋后加入ELISA板孔中，每孔加100μ1,置濕盒于4℃過夜。2.3.2棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液沖洗板3次，拍干。2.3.3用血清稀釋液將待檢血清作100倍稀釋，每孔加100μ1。同時，設豬瘟陽性、陰性血清對照，37℃培育1小時。2.3.4重復2.3.2操作一次。2.3.5用血清稀釋液將免抗豬IgG-辣根過氧化物酶結合物作100倍稀釋，每孔加入100μ1,37℃培2.3.6重復2.3.2操作一次。23.7每孔加入底物溶液100μ1,室溫下避光顯色30分鐘。23.8每孔加入終止液50μ1,于酶標儀中測定492nm波長的光密度值(OD值)。OD值>0.2為豬瘟免疫抗體陽性。檢測報告按附錄B格式填寫結果報告單。古自治區(qū)質量技術監(jiān)督局2000-02-14批準2000-04-15實施1(標準的附錄)EL1SA試劑配制加雙蒸水至1000ml。A3洗滌液(磷酸緩沖鹽水-吐溫)(PBS-T):稀釋液1000ml吐溫-20(Tween-20)0.5ml充分搖勻即成。洗滌液(PBS-T)100ml小牛血清充分搖勻即成。A5鄰苯二胺底物液(OPD):A5.10.1M檸檬酸溶液：雙蒸水加至1000m]A5.20.2M磷酸氫二鈉溶液：雙蒸水加至1000ml0.1M檸檬酸溶液0.2M磷酸氫二鈉溶液25.7mlA5.4底物溶液鄰苯二胺20mg底物稀釋液臨用前加30%H?O?A6終止液(2MH?SO?):濃硫酸76.00ml于500ml蒸餾水中緩慢加入濃硫酸。附錄B(標準的附錄)監(jiān)測報告單格式81采樣送檢單采樣地點采樣日期理人：理人：B2結果報告單采樣地點陽性數(shù)量陽性率備注