基因結構與表達的基本策略

1基因結構與表達分析的基本策略StrategyforStructureandExpressionAnalysesofGenes分子生物學系22分子生物學的三大核心技術DNA序列分析—DNA測序，1977聚合酶鏈式反應—DNA擴增，1985DNA重組技術—基因克隆，19733一、DNA序列分析二、核酸分子雜交三、聚合酶鏈式反應四、基因芯片和微陣列五、Western免疫印跡主要內(nèi)容4（一）雙脫氧末端終止法

(Sanger,1977)一、DNA序列分析（二）DNA自動化序列分析（三）化學降解法(Gilbert,1977)5FrederickSanger1918～

WalterGilbert1932～

TheNobelPrizeinChemistry1980PaulBerg1926～6DNA測序技術基礎：高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE）技術，可分離差別僅1個堿基的單鏈寡核苷酸DNA片段。

7(一）雙脫氧末端終止法

（dideoxychaintermination）8ATP、dATP和ddATP的結構ATPAOHOHHHdATPddATPNTP:核苷三磷酸ATP、GTP、CTP、UTP的合稱；dNTP:脫氧核苷三磷酸dATP、dGTP、dCTP、dTTP；ddNTP:ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP；9摻入N個核苷酸DNA合成反應模式圖10DNA單鏈模板引物摻入ddNTP延伸的新合成鏈

末端終止111.雙脫氧末端終止法原理

DNA合成反應中，ddNTP不存在3′-OH末端，故不能與下一個核苷酸的5′-磷酸基團形成3′，5′-磷酸二酯鍵，導致DNA新鏈的延伸提前終止于ddNTP

。12ddCTPddATPddTTPddGTPdCTPdATPdTTPdGTPAGCT5′T4711GAATGA3′ACGCT132.DNA測序主要步驟14A反應管G反應管G反應管T反應管C反應管T反應管1516G逆A著T艘C17●變性棍聚丙倦烯酰嘗胺凝殿膠電角泳●配單幸鏈DN系A模板紡的制盾備●DN往A模板跨與測烏序引它物退昆火●叮摻存入法渠標記朵反應●顫延容伸-終止追反應●厲放理射自象顯影●據(jù)閱菠讀測賠序結茂果測序涼步驟18（二迎）DN張A測序錫自動截化原剛理采用4種不塌同的恒熒光嫂分別滲標記4種dd驚NT快P終止紹反應石產(chǎn)物廢，替幟代放好射性浩同位爭素標惑記是卵實現(xiàn)DN挺A測序殖自動江化的者基礎奧。19dd斥CT題Pdd寇AT疊Pdd途TT蘿Pdd醫(yī)GT猾PdC認TPdA疾TPdT動TPdG艱TP5′TGAATGA3′ACGCT2021表示牲一個SN住P位點幣，該籠位點賭出現(xiàn)膜了雙眠峰，只對應簽的核疑苷酸坊分別妄為C和T,因此豬該位結點為CT雜合盡型，存如果動該位驗點只砍有一畫個峰C或者T，則姓該位掛點基閉因型肥為CC或TT純合悉型22DN幻玉A自動壞測序硬步驟4種不漲同熒謀光染敘料標墓記終亦止物dd殺NT糧PsSa狼ng亮er測序偵反應反應鹽產(chǎn)物同一泳道匪電泳岔分離激光牌激發(fā)把不同導大小DN娛A片段何上的午熒光低分子層，發(fā)炸射出圈四種役不同撫波長忍的熒潮光熒光雨信號定采集陷、計在算機瘡分析梢與DN冒A自動賴排序23Dy高e鍋la霧be憂le約d蠅di框de帽ox撞yt康er現(xiàn)mi霸na妻to死rs希o紹n蝕AB村I平37婦30漁c允ap財il互la假ri延es24

與末端終止法不同，化學降解法是建立在對原有DNA的化學降解過程基礎上。

（三）化學降解法25

將待測DNA片段3′或5′端進行同位素標記，標記的DNA片段分成五個反應，分別用不同的化學試劑處理，造成堿基特異性切割，使DNA片段分別于某一種（類）堿基處斷裂。電泳分離5組DNA混合物，放射自顯影檢測末端標記的DNA鏈的電泳區(qū)帶位置。化學降解法原理26化學漠降解G反應助模式吊圖硫酸二甲酯哌啶Me蓮tMe梯tMe竄tMe夜t27最新堂測序活技術45半4技術(Ro免ch寫e)焦磷屯酸測鬧序（Py靈ro突se洞qu銀en潑ci蹈ng）So滔le召xa測序忙技術(Il算lu足mi路na)SO具Li山D技術(AB或I)連接釀法測者序28舉例僵：So孫le栗xa測序Hi握Se色q集20循0029So豎le藏xa測序治：在缸一個憑反應宏中同持時加河入4種核蔬苷的端標簽漫，采能用邊每合成路邊測浩序（SB逢S－se遲qu乘en瞎ci恢ng封b虜y續(xù)sy歲nt拍he吧si省s）。完成聰人類萌基因靠組草沫圖不抵同測砌序儀漂的比采較圖30二、核酸猜分子抽雜交（Nu棕cl槽ei峽c瞇Ac翠id花H戰(zhàn)yb陜ri彈di犁za廳ti逐on）（一貨）So千ut揮he隆rn印跡侍雜交繡：檢余測DN攜A(S唉ou滴th竄er趨n荷bl織ot潑h聾yb糧ri謹di爸za抓ti仍on何)惠So適ut客he艷rn蛋E完M,魂19懸75（二弟）No翻rt肥he慢rn印跡觸雜交巨：檢施測RN粉A(N泡or單th虜er州n走bl占ot耍h斑yb肚ri首di銹za炊ti期on咐)妙S堂ta嶼rk貿(mào)G靈R，19雨7731核酸謙分子姨雜交撫原理標記劑的單鏈驗核酸誓探針與待常檢測封的靶彼單鏈DN固A或RN炒A局部秤互補飼結合少形成搭雜交俊雙鏈棗。應用雪：核酸忽靶DN拾A或RN駁A序列狠的定蜓性與年定量皺分析森。323333印跡番技術利用魔各種功物理琴方法賺使電異泳膠壓中的浮生物機大分犁子轉染移到NC等各往種膜磁上，柜使之占成為殿固相毀化分輕子。這一燙技術巷類似嗽于用禾吸墨盛紙吸燒收紙優(yōu)張上陰的墨韻跡，桃因此番稱之休為“bl桑ot拿ti繳ng”,譯為蜂印跡立技術榮。3434探針劃技術用放竟射性炭核素爆、生掙物素館或熒忽光染吼料標繳記其找末端虹或全叼鏈的叨已知濤序列漂的多舒聚核吉苷酸繞鏈被截稱為“探針”。探針押可以罰與固摩定在NC膜上算的核喚苷酸司結合緒，判菠斷是多否有晨同源站的核烘酸分萬子存疼在。35So謠ut隆he筑rn印跡刊雜交衰原理將電療泳分悅離的待測DN頓A片段去結合狹到一盼定的立固相類支持喜物上竄，然往后與語存在財于液仔相中約標記乘的核叔酸探煎針進續(xù)行雜橋交的管過程臣。（一奸）So擇ut鑄he支rn印跡各雜交應用小：DN君A（基揚因組DN騙A）分偵子的忠定性抗或定量分抗析。361.制備圓基因推組DN惰A2.用限姑制性股內(nèi)切饒核酸閱酶消缺化基奧因組DN厭A3.瓊脂臂糖凝尖膠電置泳分匆離DN示A酶切崖片段4.凝膠邁預處葉理（如煉強堿悶，DN域A雙鏈洞變?yōu)閵^單鏈種）5.劉S兩ou皺th聚er畜n印跡達轉移6.標記抬核酸瓣探針練、探輩針與DN倆A片段楚雜交7.雜交剛結果萄顯示So檢ut啄he祖rn印跡史雜交棉基本腎過程37So廁ut逆he只rn印跡遲雜交姻示意曾圖38將電啦泳分槐離的待測DN近A片段衣結合蛇到一陽定的贏固相偶支持磨物上謝，然飛后與交存在撈于液來相中才標記血的核墳酸探纏針進厲行雜厚交的勁過程策。3940地中瞞海貧帆血的So辭ut夕he益rn弓b涂lo塊t基因刮診斷（1）僅影一條盆染色覽體上韻的一宮個α基因?qū)毴笔[或缺吊陷，母則α鏈的士合成挑部分疏受抑貍制，孔稱為α+地貧第；（2）每師條染饅色體臭上的2個α基因皂均缺邁失或那缺陷角，稱住為α0地貧外；(3傘)婚α旗1、α2序列松基本蔬一致牙；基泰因不青同程脅度的鵲缺失懲可引漂起不遇同類拐型的脖地中判海貧紹血。α1α2αααα+α+α+αα0α+α0α0α041Ba訴mH款IBa繞mH充Iα2α1α210璃k血b14童k裁bprobe地中婆海貧鬼血的羅直接旋基因麥診斷42αα/白αα頑αα充/α煮-迷α刻α/讓-寺-板α釣-難/-濱-服-森-襪/效-斑-正常陡缺1缺2缺3缺414央kb10細kb43（二恩）No禽rt纏he施rn印跡侍雜交(N犧or溜th赴er嚼n好bl望ot浮h征yb間ri押di它za側ti床on扇)指將RN姻A變性壟及電扮泳分包離后鐵，并幟轉移雙到固貫相支哈持物夢上，瘡用雜客交反箱應來環(huán)鑒定翁其中刃特定mR倉NA分子緣瑞的含純量及會其大街小。用于mR礙NA進行漠定性柱和定堵量分白析。44RN弱A瓊脂鬼糖凝膠膠電餓泳3kb0.4kbNt36382604623No忍rt知he鹽rn盾b黃lo剛t哲hy決br虧id狹iz茄at摔io蔬n28S18S應用做舉例45GAPDH0d2d4d6d8dNo所rt籠he級rn闊b炕lo照t雜交煮分析mR執(zhí)NA的表臘達靶mR她NA3-磷酸予甘油鼻醛脫趴氫酶4646三、貧其他嚼雜交登技術1.斑點禍雜交(d曉ot膀b血lo名t刊hy卡br睡id鐮iz眾at遭io勵n）將RN述A或DN致A變性銹后直壩接點悉樣于宏硝酸悼纖維挺素膜悶或尼矛龍膜弄上，振用于輸基因校組中搬特定胡基因增及其青表達柔的定迎性及唱定量衣研究睡。47472.原位交雜交血（in粗s勻it凡uhy灰br買id巨iz梢at造io址n）用標魯記的樣核酸抬探針泳與組攪織切字片或棟細胞礙中的搏待測默核酸匠互補思序列耐雜交剖，可萍對核質(zhì)酸進卻行定鈔性、液定位怪和相酒對定此量分錘析。483．核寨酸酶S1保護超分析濾法(n競uc網(wǎng)le尺as果e斬S1鋪p布ro鬼te艷ct吹io風n捐as間sa陽y）單鏈DN全A探針與待暑測RN載A形成DN寧A/善RN存A雜交池雙鏈林，加五入核靜酸酶S1專一慌性地遭降解男未形榴成雜疫交體州的DN耍A或RN佛A單鏈舉，DN全A/刊RN妄A雜交汪雙鏈推則受從到保楚護而撓不被鐘降解衛(wèi)。494．RN緊A酶保直護分冒析法（RN掉as倉e抱pr揚ot化ec槽ti泡on扯a活ss尿ay，RP裙A）50RP墾A基本布程序控：●待測RN償A的分乒離●體外慮轉錄散標記RN桶A探針●待測RN加A與探膛針RN園A進行哲液相值雜交●RN頑A酶消喘化●不同蓮大小相雜交創(chuàng)片段壺凝膠似電泳號分離51三、緒聚合順酶鏈睬式反顫應(P賭ol剩ym軋er姜as阻e斤Ch臭ai技n欄Re啄ac噸ti誰on淚,萄PC熔R)（一胡）PC辣R技術異原理（二覺）耐圈熱DN置A聚合率酶（三梳）PC早R引物囑及設限計原亦則（四否）PC帝R條件潮的優(yōu)佳化（五念）PC牛R改進薄技術（六耍）其貢它PC冠R技術52聚合穿酶鏈末式反其應(P喂CR漠)習:（一忘）PC甘R技術粘原理

Mullis

K.

1985年發(fā)明的一種模擬天然DNA復制過程的核酸體外擴增技術。

TheNobelPrizeinChemistry199353Th耳e喬re慢pl熊ic勵at絞io匯n道of曉D刻NA54原理吹：PC埋R是模承擬天訪然DN戲A復制躁過程巖，利蘿用DN蘆A聚合殺酶催課化一底對引雕物間咬特異DN按A片段訂合成施的體矛外擴基增技興術。地其瞇主要殖熱循脈環(huán)過瞞程為秋：變座性、視退火慨、延旬伸三習個步蛾驟。551.姻P安CR循環(huán)各由三岡步組悶成：①變拼性（de窩na樂tu燦ra漠ti狗on）②退款火（an門ne每al夢in咱g）③延匠伸（ex僻te召ns鎖io慕n）高溫合適慕溫度合適李溫度5657582.撫P把CR擴增補終產(chǎn)逮物大折小:介于還兩條駁退火則引物5′末端艘之間壤的雙鏈DN家A片段。循環(huán)企一59循環(huán)盜二60循環(huán)焦三61一對尋引物綿：正衫向和迅反向載限射制了PC礦R擴增稀的片拐段的毀范圍5/——5/—3/3/—5/——5/—3/3/—625′CA錯GT寶TA激AG扒GG齡GG未CA焦GG箱AG濁TG書GC贈GC筋TG谷CT蹤蝶CA煌CC問TC餅TG期GT裝GC辨CA科AA船GG遮GC伸GG鍋CG施CA說GC五GG虜CT迅GC悅CG母AG赴CT得CG榆GC傻CC新TG夾GA似GG姓CG付GCAG補AA服CA畏TG皂GT丸GC急GC爭AG軍GT電TC麗TT鍋GG蹲TG無AC榆CC壩TC男CG批GA枝TT或CG誘GC釘GC幕GC朝GT苦GC到GG自CC著CG澆CC股GC蚊GA孕GT促GA量GG拜GT慮TT禮TC幫GT萬GG欣TT淚CA頌CA石TC肆CC殊GC戲GG隊CT屑CA御CG景GG要GG異AG溉TG覺GG含CA燙GC貫GC鉗CA吊GG摔GG隙CG番CC部CG幅CC螞GC托TG駁TG防GC測CC谷TC必GT稍GC戒TG踢AT饅GC酷TA妄CT乞GA忙GG權AG快CC選AG碗CG減TC算TA沾GG畝GC蹤蝶AG煉CA尊GC自CG俗CT懷TC儀CT炮AG桐AA擦GA岔CC偵AG顯GT腰CA蓄TG至AT姨GA萌TG烘GG穗CAGCG兄CC蝴CGAG淺TG這GC若GG淹AG眉CT擾GC漸TG卸CT窯GC河TC紙CA龍CG拒GC君GC齒G室3′GG姿TC國CA僑GT吊AC極TA洪CT驕AC間CC臺GTAG砌AA領CA餡TG蠢GT謊GC綠GC斥AG沈GT祝T3.引物念設計口實例63Y=疼A（1+修E）nY:擴增放產(chǎn)物霉的量A:最初場靶DN返A分子飾數(shù)E:PC絹R擴增匠效率n:循環(huán)壘次數(shù)3.胃P女CR產(chǎn)量當E＝10偉0％,孝A=防1時Y=油2n>>條2n(引物徑延伸針產(chǎn)物粥的量綿）64（二焦）平暢臺期偶與平爆臺效樂應1.平臺趣效應（pl摘at攜ea應u笨ef閑fe端ct）：PC屢R經(jīng)過嗚一定示數(shù)量騾的循糖環(huán)后夢，DN策A片段揀不再隊呈指鑼數(shù)累鍬積，潔而是予進入看線性冶增長裁期或皮靜止盜期，即平劣臺效沙應。影響經(jīng)因素赴：①扎引家物及dN酸TP底物件濃度鞏降低圍。②拳酶斜與模悄板比混例下舒降。65PC浸R平臺碌效應66（二雅）耐破熱DN示A聚合遍酶Ta胃qDN盲A聚合糕酶（實現(xiàn)軍了PC考R自動東化）從嗜老熱水涂生菌th陰er串mu福s拋aq而ua揮ti碑csYT總-1株中浪直接齡分離刪出來粥?！?5讀℃的半吃衰期:40長m假in●最適覆溫度:謊7鄉(xiāng)豐2妄℃～80怎℃●催化兼反應速率:15定0～30苦0核苷任酸/秒/酶分論子6768Ta翻qDN褲A聚合就酶特揚性：●5′皂→3物′聚合逮酶活返性；●5′拒→3雪′外切彎酶活境性；●泡較恩弱的捎非模姨板依觸賴性童；●渣缺板乏3′梯→5爹′外切遷酶活招性。69PC須R攤th舞er屢ma晶l薪cy抹cl躁er70PC御R產(chǎn)物耳的瓊脂糖護凝膠候電泳覽分析50艇0b百p40藍0b船p20棟0b階p30取0b旅p10貞00罷bp60獲0b迫p70制0b剪p80夾0b擠p90粉0b鈔pMa令rk維erPC惱R產(chǎn)物71無機綢離子墾及抑扎制劑鴿的影雙響Ta禁qDN才A聚合糖酶的揭活性對Mg2+濃度靠和單劑價離樣子（K+或NH榆4+）的環(huán)性質(zhì)間和濃傾度較舟敏感梢。最適Mg2+濃度：2淚mm少ol愉/LK+濃度：50吉m槍mo趕l/狡L72幾種容高保慈真的吃耐熱DN越A聚合帶酶1.Tt天hDN俊A聚合戴酶2.Ve化ntDN族A聚合余酶3.Pf辮uDN皮A聚合鹽酶73（三娛）PC群R引物灣設計拔原則引物塑的化慶學本寫質(zhì)是是什么千？單鏈前寡核獵苷酸DN窯A或RN悲A片段濟。DN蜂A復制可引物掘：單游鏈RN詢A片段PC領R引物煮：踏單虛鏈DN湖A片段74PC突R引物腦設計野原則：1.引物娘與模域板的行序列凳要完毒全互難補2.引物殖與引親物之嬸間避健免形閘成穩(wěn)余定的視二聚圈體或幅發(fā)夾墻結構3.引物簡不能成在模君板的稻非目拋的位嫩點引史發(fā)DN溉A聚合滲反應(錯配)755′C碌AC眨TG鉛AA獻CG每TAG謀GC籠CT見3′3′G啄CA哨GG喜TT軟CAGT舊GA唇CT晶TG渠CA販TC扔CG杯GA歌TG彈CA晝AC東5′特異袍擴增5′C喬AC遣TG鏟AA魯CG襯TAG尼GC釋CT喊3′3′G沫GA樂TC記TA杯CATG汗CG膊AC芝TT我AA沈TC碗CG香GA貌GA謊TA油CC緣瑞5′錯誤隨引發(fā)1.引物攜與模嚷板的經(jīng)序列泄要緊企密互墨補2.引物潑不能才在模怨板的魔非目坡的位柏點引斤發(fā)DN刮A聚合血反應(錯配)76引物套之間顯應避粱免3′端互駛補3.引物鑰與引宵物之遷間避堤免形顯成穩(wěn)禮定的幕二聚炎體或除發(fā)夾介結構77引物改自身攔不應蚊形成奮發(fā)夾擦結構784.其它貢原則:①引物賀長度:印1那0～30始n染t②堿基環(huán)分布:默A、T、G、C隨機擇分布③G+尿C含量：40～60品%廈Tm軍=4慘(G侍+C飾)+拉2(緣瑞A+凡T)④引物3′末端喊堿基：最呢好選T、C、G，不禾選A避免福出現(xiàn)3個以蛛上的帖連續(xù)吸堿基腿，如GG噴G或CC鏡C⑤引物5′末端領堿基的可不缺與模陰板DN燙A互補791輩A26任0ol吐ig榨o餡DN伶A≈33舉μgN:引物堿基帶數(shù)X：合鋤成的ol陳ig論o拌DN你AA26遙0單位Y：引余物的pm番ol數(shù)106Y（pm斷ol）=壺X·匙33異×─求─33砍0超.惑NX=貴──饑×1樹05N2.引物據(jù)用量曬計算80模板引物Ta武q離DN價A聚合泛酶dN法TPMg2+退火變性延伸PC爹R反應81（四痛）PC例R條件中的優(yōu)窮化1.Ta勺qDN換A聚合馬酶濃魂度：1.銳0～2.鐮5哄U/增10節(jié)0鬧μl反應彼液2.鄰d蔬NT援P濃度育：20～20牽0差μm旦ol疼/L3.樹M巴g2+濃度喇：0.壞5～2.鄉(xiāng)豐5尤mm績ol樹/L4.引物欄濃度逆：0.碑1～0.首5坊μm燭ol扯/L82（五嘩）PC激R改進后技術1.抬R種T-侄PC籃R(r文ev籠er插se怠t饑ra到ns你cr喇ip塘ti卸on劍P斑CR境)以mR奶NA為模蚊板逆蠅轉錄臭合成cD閣NA，再蒸以此cD艷NA為模虧板進森行PC勒R反應。83RT-PCR原理84逆轉曬錄酶①AM慮V（av踏ia痰n涉my忘el芝ob株la熱st瘦os垂is從v你ir妨us）酶活列性最陽適溫櫻度42掃℃②熱MM袖LV（Mo雙lo腹ne弓y蛾mu催ri稅ne疑l艷eu絡ke駝mi欲avi外ru喬s）：拼最適么溫度37論℃852.定量RT臉-P膛CR（QR蠶T-袖PC樣R）半定蔑量RT胞-P昂CR以樣浙本mR翻NA為模須板逆蒸轉錄準合成cD穴NA，在群不同顏引物搞對引烤導下件共同PC紋R擴增“看畝家”躁基因和目的象基因cD帥NA。86①選擇掩內(nèi)對則照基樣因組織米中普折遍表爺達、盞表達饞量比粱較恒繁定的娛“看獅家”去基因mR耽NA。如GA桐PD隱H和β士-a飯ct葵in班m跡RN躁A等。②半定菊量標輪準計算PC蒼R產(chǎn)物紋：靶cD引NA防/弓GA丟PD毀H予cD認NA87③KP廈NA沸2在內(nèi)正常遮生理粗狀態(tài)斃東方竹田鼠值和小會鼠體素內(nèi)表材達分穗析88893.實時幸熒光障定量RT仁-P婆CR贊R聚ea劉l-脂ti承me摟f爽lu尋or蹤蝶es叼ce性nt炎q鹿ua光nt言it儉at郵iv蜻e莫–P學CR，F(xiàn)Q悄-P艙CRPC賞R擴增丙指數(shù)佳期內(nèi)銳極小屬的擴痛增效武率改蜜變會乘極大準地影卷響產(chǎn)潛量。應用禽：用于基限因DN率A拷貝顆數(shù)和mR擺NA表達分定量莫分析牌。90①熒光華染料9192每形維成一連個DN括A雙鏈遵，就強有一已定數(shù)醒量的胳染料脊結合悲上去顫，染眨料一盛結合瞧就產(chǎn)乓生熒濕光信掀號，信號延強度寨與DN資A分子勒總數(shù)協(xié)目成頓正比。93②Ta餐qM味an厚P液ro膏be一種家水解渴式熒肉光標許記探胳針。母寡核拐苷酸澇探針的5′端標廈記一印個熒憤光報謎告基新團（re有po獎rt地er），3′端標為記一獎個熒光淬滅基團（qu搏en耗ch昨er）。94每產(chǎn)求生一紙條DN高A鏈，降就切淺斷一飼條探裝針，稍每切舅斷一指條探摘針，慈就產(chǎn)數(shù)生一支個單敏位信茂號，信號云強度襲與結推合探揀針的DN缸A分子動數(shù)成蔽正比。95。③分子斥信標庸探針趨（Mo使le狡cu裹la射r葡Be渣ac購on晨P落ro持be）該探盜針具評有發(fā)鋤夾結裳構，5′端標絕記熒僵光報聯(lián)告基章團，3′端標鳥記淬營滅基勉團。96探針蓋與靶縣序列擇雜交偵結合牧，報詠告熒艦光染坑料與型淬滅沉染料領分離者，發(fā)效出熒護光。97④實余時熒脂光定拐量PC未R計算非原理PC季R擴增麻效率陵的差服異使善相同場的樣惕品最爽終產(chǎn)諷量有兆很大童差異9899CT或Tc或Ct值：臨界督點循漏環(huán)（Th危re茂sh沫ol簽d容cy白cl糊e），侮即從魄基線販到指真數(shù)增絡長的原拐點巴所對捎應的榨循環(huán)膏數(shù)10鈴010唉1●傳染閘病診壓斷、辯監(jiān)測縱與療出效預雖后評芝估：●揭示槽疾病個發(fā)病醬機制10械2⑤熒光痰定量PC棚R儀帶有泊激發(fā)已光源收和熒浩光信卷號檢灰測系業(yè)統(tǒng)的PC討R儀，跨配有洪電腦甲系統(tǒng)俱及分宜