牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備與滅菌

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備與滅一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、 學(xué)習(xí)并掌握培養(yǎng)基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基的方法和步驟。2、 學(xué)習(xí)并了解高壓蒸汽滅菌的原理和操作技術(shù)。二、 實(shí)驗(yàn)原理：（一）微生物分離與純化1、牛肉膏蛋白東培養(yǎng)基的制備與滅菌牛肉膏蛋白東培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，它含有牛肉膏、蛋白東和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白東主要提供氮源，而NaCl提供無機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96°C時(shí)溶化，一般實(shí)際應(yīng)用時(shí)在下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40C時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用。由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長繁殖。三、 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1、 儀器：分析天平；錐形瓶；移液管；高溫電爐；容量瓶；燒杯；無菌培養(yǎng)皿；pH試紙；膠頭滴管；玻璃試管；酒精燈；高壓蒸氣鍋；玻璃棒；2、 試劑：牛肉膏；蛋白東；NaCl；瓊脂；蒸餾水；四、 實(shí)驗(yàn)步驟：（一）分離純化制備試驗(yàn)菌種的菌懸液1、培養(yǎng)基的配置配置牛肉膏蛋白胨的液體培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻后進(jìn)行分裝。將分裝完畢后的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；稱量：按試驗(yàn)用微生物培養(yǎng)基配方，逐一稱取各種藥品放入燒杯中。液體培養(yǎng)基配方：牛肉膏蛋白胨NaCl葡萄糖蒸餾水0.6g2g1g2g200ml溶解：將去蒸餾水加入到上述燒杯中使各種成分溶解，難溶的物質(zhì)，例如蛋白胨、加熱促進(jìn)其溶解，待全部溶解后，加水補(bǔ)足加熱蒸發(fā)的水量。制備固體培養(yǎng)基，加熱融化瓊脂時(shí)要不斷的攪拌，避免瓊脂糊底燒焦。調(diào)節(jié)pH值；初配好的培養(yǎng)基往往不能符合所需要的pH值，故需用pH試紙檢測(cè)，并以一定濃度的鹽酸溶液和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基溶液pH值至7—8。分裝：將調(diào)節(jié)好pH值的培養(yǎng)基分裝于十支試管和兩個(gè)錐形瓶中（注意防止培養(yǎng)基沾污管口或瓶口，避免浸濕橡皮塞塞引起雜菌污染）。分裝液體培養(yǎng)基時(shí)，每支試管裝的量為試管高度的1/3?1/2，錐形瓶中各加入250—300ml培養(yǎng)基。分裝完畢后，將試管及錐形瓶用橡皮塞塞緊，防止高壓蒸汽滅菌時(shí)管內(nèi)壓力過大沖開。包扎：加塞后，在全部試管膠塞外包裹雙層報(bào)紙，并用棉繩捆扎好，同樣的，將兩個(gè)錐形瓶也用同樣的方法包扎好。最后，用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱，日期。2、滅菌本試驗(yàn)采用高壓蒸氣滅菌法。加水，立式鍋是直接加水至鍋內(nèi)底部隔板以下1/3處。把需滅菌的器物放入鍋內(nèi)（器物不要裝得太滿，否則滅菌不徹底），關(guān)嚴(yán)鍋蓋（對(duì)角式均勻擰緊螺旋），打開排氣閥。啟動(dòng)電源開關(guān)。待爐內(nèi)水沸騰后，蒸氣將爐內(nèi)冷空氣驅(qū)凈，關(guān)閉排氣閥。升壓，升溫。關(guān)閉排氣閥以后，鍋內(nèi)成為密閉系統(tǒng)，蒸氣不斷增加，壓力計(jì)和溫度計(jì)的指針上升，當(dāng)壓力達(dá)到1.05kg/cm2（溫度為121°C）即滅菌開始，這時(shí)開、關(guān)電源，保證壓力維持在1.05kg/cm2,20min左右。

中斷熱源，達(dá)到滅菌時(shí)間要求后停止加熱，任其自然降壓，當(dāng)指針回到“0”時(shí)，打開排氣閥（排氣閥不能過早打開，否則培養(yǎng)基因壓力突降，溫度沒下降而翻騰沖到棉塞處，既損失培養(yǎng)基又沾污了棉塞）。揭開鍋蓋，取出器物，分裝至無菌培養(yǎng)皿中，靜置。二十四小時(shí)后觀察是否有