儀器分析高效液相色譜

第一節(jié)、概述

一、含義液相色譜(LC)：以溶劑液體為流動相的色譜方法高效液相色譜（HPLC）：高效能固體細(xì)微粒為固定相高壓溶劑為流動相高靈敏度檢測器目前一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點二、高效液相色譜與其它色譜方法的比較1.HPLC與經(jīng)典LC的比較經(jīng)典LCHPLC固定相顆粒>100μm,不均勻固定相顆粒<10μm,均勻常壓下輸送流動相高壓下輸送流動相柱效較低（H↑，n↓）柱效較高（H↓，n↑）分析周期長分析周期短無法在線檢測可以在線檢測目前二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點2.HPLC與GC的比較分析對象及范圍流動相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品，占有機(jī)物的20%流動相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運載作用，對組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機(jī)物的80%流動相為液體或各種液體的混合。它除了起運載作用外，還可通過溶劑來控制和改進(jìn)分離。室溫、高壓下進(jìn)行相同：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線檢測目前三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點按固定相的聚集狀態(tài)分類：液-固色譜法液-液色譜法按分離機(jī)制分類：分配色譜法吸附色譜法離子交換色譜法空間排阻色譜法三、HPLC分類目前四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點其它分離機(jī)制色譜法：親合色譜法AC膠束色譜法MC手性色譜法CC毛細(xì)管電色譜法CEC三、HPLC分類當(dāng)前最常見的HPLC：化學(xué)鍵合相色譜法（bondedphasechromotography)目前五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點類型主要分離機(jī)理主要分析對象或應(yīng)用領(lǐng)域吸附色譜吸附能，氫鍵異構(gòu)體分離、族分離，制備分配色譜疏水分配作用各種有機(jī)物分離、分析與制備凝膠色譜溶質(zhì)分子大小高分子分離，分子量及其分布的測定離子交換色譜庫侖力無機(jī)離子、有機(jī)離子分析離子排斥色譜Donnan膜平衡有機(jī)酸、氨基酸、醇、醛分析離子對色譜疏水分配作用離子性物質(zhì)分析手性色譜立體效應(yīng)手性異構(gòu)體分離，藥物純化親和色譜生化特異親和力蛋白、酶、抗體分離，生物和醫(yī)藥分析目前六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點極性增加不溶于水溶于水非極性離子非離子極性吸附反向分配分配正向分配離子交換尺寸排阻凝膠滲透凝膠過濾分子量化學(xué)、生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等應(yīng)用廣泛。如氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、烴、碳水化合物、藥品、多糖、高聚物、農(nóng)藥、抗生素、膽固醇、金屬有機(jī)物等分析，大多(80%)是通過HPLC來完成的。四、應(yīng)用各種HPLC方法的應(yīng)用范圍及對象目前七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點第二節(jié)HPLC儀器目前八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點第二節(jié)HPLC儀器高壓輸液系統(tǒng)：儲液罐、吸濾器、高壓輸液泵、脫氣裝置及梯度洗脫裝置進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣器，進(jìn)樣閥分離系統(tǒng)：色譜柱，恒溫箱檢測系統(tǒng)：檢測器記錄系統(tǒng)：記錄裝置、色譜工作站目前十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點1、貯液器和吸濾器：一、高壓輸液系統(tǒng)貯液器:1-2L的玻璃瓶溶劑吸濾器:Ni合金，孔約0.45

m，防止顆粒物進(jìn)行泵內(nèi)。目前十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點2、高壓輸液泵一、高壓輸液系統(tǒng)要求流量準(zhǔn)確可調(diào)、可調(diào)范圍寬：流動相流速在0.5-2mL/min，輸液泵的最大流量5-10mL/min耐高壓：輸出壓力常達(dá)30-60MPa液流穩(wěn)定。結(jié)構(gòu)材料應(yīng)耐化學(xué)腐蝕目前十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點活塞型往復(fù)泵——液相色譜儀中使用最廣泛的恒流泵目前十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點雙活塞型往復(fù)泵目前十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、高壓輸液系統(tǒng)離線超聲波振蕩脫氣在線惰性氣體鼓泡吹掃脫氣在線真空脫氣裝置3、脫氣裝置：將相對分子量小的氣體從溶劑中除去目前十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、高壓輸液系統(tǒng)4、梯度洗脫裝置：為什么要進(jìn)行梯度洗脫？使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并達(dá)到相互分離梯度洗脫：在分離過程中逐漸改變流動相組成，如溶劑的極性、離子強度、pH值等。目前十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、高壓輸液系統(tǒng)高壓梯度：用于二元梯度，用兩個泵分別按設(shè)定的比例輸送A和B兩溶液至混合器

目前二十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、高壓輸液系統(tǒng)低壓梯度：只用一個高壓泵，在泵前安裝了一個比例閥，混合就在比例閥中完成。

目前二十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點二、進(jìn)樣系統(tǒng)將樣品溶液準(zhǔn)確送入色譜柱的裝置——手動方式、自動方式密封性好、死體積小、重復(fù)性好、進(jìn)樣時引起色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動要很小。進(jìn)樣器要求常用手動進(jìn)樣器——六通閥進(jìn)樣器，目前二十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點二、進(jìn)樣系統(tǒng)六通閥進(jìn)樣LoadInject目前二十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點三、色譜柱柱長15~30cm，內(nèi)徑4~5mm基質(zhì)(硅膠或高分子聚合物微球)功能層(固定在基質(zhì)表面對樣品分子保留起實質(zhì)作用的有機(jī)分子或功能團(tuán))目前二十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點四、檢測系統(tǒng)用來連續(xù)監(jiān)測經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。溶質(zhì)性檢測器：僅對被分離組分理化特性響應(yīng)紫外、熒光、電化學(xué)檢測器總體檢測器：對試樣和洗脫液總理化性質(zhì)響應(yīng)示差折光，電導(dǎo)檢測器目前二十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點石英窗接色譜柱UV光電倍增管廢液四、檢測系統(tǒng)1、紫外檢測器微量吸收池，光程為2-10mm,體積約為1~10L最小檢測量10-9g·ml-1對流量和溫度波動不敏感可用于梯度洗脫。

最常用的通用型檢測器目前二十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點四、檢測系統(tǒng)光電二極管陣列檢測器時間、光強度和波長三維譜目前二十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點2、熒光檢測器四、檢測系統(tǒng)靈敏度高選擇性好樣品量很小適合藥物和生化樣品分析目前二十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3、蒸發(fā)光散射檢測器四、檢測系統(tǒng)適于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測通用型和質(zhì)量型檢測器目前二十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點光源調(diào)零光學(xué)零參比樣品平面鏡透鏡光電轉(zhuǎn)換記錄儀放大器遮光板溶劑相和樣品+溶劑相對光的折射率不同，造成兩束光強度差變化，差示信號放大記錄代表樣品濃度通用型檢測器，靈敏度為10-7g/ml對溫度變化敏感，且不適于梯度淋洗4、示差折光檢測器四、檢測系統(tǒng)目前三十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點接參比電極和對電極接色譜柱Teflon塑料塊1cm工作電極(Pt,Au,碳糊)5、安培檢測器利用待測物在工作電極表面發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生電流，此電流大小與待測物濃度成正比。

流動相必須含電解質(zhì)，且呈化學(xué)隋性。只能檢測具有電活性的物質(zhì)。四、檢測系統(tǒng)目前三十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點檢測器梯度

主要特點紫外-可見光可對流速和溫度變化敏感；池體積可制作得很??；對溶質(zhì)的響應(yīng)變化大。熒光可選擇性和靈敏度高；易受背景熒光、消光、溫度、pH和溶劑的影響?；瘜W(xué)發(fā)光困難靈敏度高；發(fā)光試劑受限；受流動相和脈動的影響。電導(dǎo)不可是離子性物質(zhì)的通用檢測器；受溫度和流速影響；不能用于有機(jī)溶劑體系。電化學(xué)困難選擇性高；受流動相pH值和雜質(zhì)的影響；穩(wěn)定性差。蒸發(fā)光散射可可檢測所有物質(zhì)。示差折光不可檢測所有物質(zhì)；不適合微量分析；對溫度變化敏感質(zhì)譜可主要用于定性和半定量。原子吸收光譜可選擇性高。ICP發(fā)射光譜可可進(jìn)行多元素同時檢測。火焰離子化可柱外峰展寬。目前三十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點五、數(shù)據(jù)處理和計算機(jī)控制系統(tǒng)色譜工作站在線顯示自動采集處理儲存自動控制目前三十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點1、要求：粒徑小、顆粒分布均勻傳質(zhì)快、滲透壓小機(jī)械強度高、能耐高壓化學(xué)穩(wěn)定性好第三節(jié)、HPLC的固定相和流動相

一、固定相目前三十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、固定相（1）按承受壓力分剛性固體：硅膠為基質(zhì)

主要用于吸附、分配和鍵合色譜硬膠：以聚合物為基質(zhì)主要用于離子交換和尺寸排阻色譜2、固定相載體目前三十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點（2）按孔隙深度分表面多孔型：實心玻璃珠為基體，基體表面覆蓋一層多孔活性材料適于常規(guī)分離分析全多孔型：全部由硅膠或氧化鋁微粒聚集而成適于復(fù)雜混合物的分離。一、固定相2、固定相載體目前三十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3.常用固定相液固色譜固定相常用粒徑3~10μm，理論塔板數(shù)過5萬/米無定形全多孔硅膠：YWG球形全多孔硅膠：YQG高分子多孔微球：YSG一、固定相目前三十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3.常用固定相化學(xué)鍵合固定相以硅膠為載體，借化學(xué)反應(yīng)方法將有機(jī)分子以共價鍵連接在硅醇基上一、固定相目前三十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點Si-O-R：熱不穩(wěn)定、易水解，適于不含水或醇的流動相Si-R(或Si-N)：不水解，熱穩(wěn)定性較好。但格式反應(yīng)不方便。使用水溶液作流動相時，其pH應(yīng)在4-8之間。Si-O-Si-R：不水解，熱穩(wěn)定性好，pH2-8范圍內(nèi)對水穩(wěn)定3.常用固定相化學(xué)鍵合固定相一、固定相目前三十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3.常用固定相化學(xué)鍵合固定相非極性鍵合相：十八烷基鍵合相（ODS，C18）中等極性鍵合相：醚基鍵合相極性鍵合相：氨基、氰基鍵合相一、固定相目前四十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3.常用固定相其它固定相離子交換固定相：離子交換樹脂、鍵合型離子交換樹脂空間排阻色譜固定相：凝膠手性固定相：手性官能團(tuán)鍵合或天然手性物質(zhì)固著在載體上如環(huán)糊精親合色譜固定相：生物專一性配基+載體一、固定相目前四十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點二、流動相——淋洗液，洗脫劑對樣品有適宜溶解度，k=2~5；溶劑要與檢測器匹配。高純度、化學(xué)穩(wěn)定性好適宜的粘度。過高柱壓增加；過低易生氣泡1、流動相要求常用的低粘度溶劑：甲醇、乙晴等粘度過低的溶劑：戊烷、乙醚等目前四十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點2、流動相組成按組成不同：單組分和多組分；按極性：極性、弱極性、非極性；按使用方式：固定組成淋洗和梯度淋洗。二元或多元組合溶劑可靈活調(diào)節(jié)流動相極性常用溶劑:烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、甲醇、水。二、流動相——淋洗液，洗脫劑目前四十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點正相色譜：極性固定相——非極性流動相（加極性調(diào)節(jié)劑如氯仿）——極性柱（正相柱）三、固定相和流動相的選擇

反相色譜：非極性鍵合固定相（ODS）——極性流動相——非極性柱（反相柱）組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。流動相可選水或一定pH緩沖液，加甲醇或乙腈調(diào)節(jié)極性）目前四十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點正相色譜低極性流動相反相色譜高極性流動相中等極性流動相中等極性流動相時間時間時間時間待測物極性：A>B>C正、反相色譜中極性和保留時間的關(guān)系目前四十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點HPLC方法按流動相和固定相特征分為正相色譜、反相色譜按分離目的分為分析型、制備型按分離機(jī)理分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、空間排阻色譜等。目前四十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點第三節(jié)HPLC方法及原理

一、液-液分配色譜法（LLPC）二、化學(xué)鍵合相色譜法（CBPC）三、液-固吸附色譜法(LSAC)四、離子交換色譜法（IEC）五、離子對色譜法（IPC）六、尺寸排阻色譜法（SEC）七、親和色譜法（AC）目前四十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、液-液分配色譜法（LLPC）

1.固定相強極性固定液：β，β′一氧二丙睛中等極性固定液：聚乙二醇非極性固定液：角鯊?fù)?/p>

要求：流動相不與固定相互溶，流動相與固定相極性差別顯著——避免固定液流失2.流動相目前四十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點

一、液-液分配色譜法（LLPC）適于各種極性化合物的分離4.用途根據(jù)物質(zhì)在兩種互不相溶的液體中溶解度的不同，具有不同的分配系數(shù)。

3.分離原理缺點：固定液機(jī)械涂漬、固定液易流失目前四十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點1、反相鍵合相色譜法（RPBPC）固定相：采用極性較小的鍵合固定相，如硅膠-C18H37（ODS，C18）、硅膠-苯基等二、化學(xué)鍵合相色譜法（CBPC）流動相：

采用極性較強的溶劑，如甲醇、乙睛-水、水和無機(jī)鹽的緩沖溶液等。目前五十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點分離機(jī)理——疏溶劑作用理論非極性的烷基鍵合相——硅膠表面的十八烷基“分子毛”——較強的疏水特性。二、化學(xué)鍵合相色譜法（CBPC）1、反相鍵合相色譜法（RPBPC）目前五十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點分子中非極性部分——疏水烷基——締合作用，分子保留分子極性部分——極性流動相——離開固定相，減小保留兩種作用力之差，決定分子在色譜中的保留行為流動相——極性溶劑分離物——極性官能團(tuán)有機(jī)物目前五十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點改變流動相配比可分離極性化合物用水和無機(jī)鹽的緩沖液為流動相可分離易離解的樣品有機(jī)酸、有機(jī)堿等。用途

1、反相鍵合相色譜法（RPBPC）主要用于分離非極性至中等極性的各類有機(jī)化合物二、化學(xué)鍵合相色譜法（CBPC）目前五十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點固定相：極性的有機(jī)基團(tuán)，CN、NH2。雙羥基等鍵合在硅膠表面流動相：非極性或極性小的溶劑（如正已烷）中加入適量極性溶劑（如氯仿、醇等）

分離機(jī)理：范德華力、誘導(dǎo)力或氫鍵力用途：多用于分離極性或中等極性化合物2、正相鍵合相色譜法（NPBPC）二、化學(xué)鍵合相色譜法（CBPC）目前五十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3、離子鍵合相色譜法

固定相：硅膠為基質(zhì)，鍵合各種離子交換基團(tuán)，如一SO3H、一CH2NH2、－C00H流動相：一般采用緩沖溶液。二、化學(xué)鍵合相色譜法（CBPC）分離原理：與離子交換色譜類同用途：多用于分離離子形化合物如酸、無機(jī)陰陽離子、氨基酸等目前五十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點分離原理：物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同三、液-固吸附色譜法(LSAC)固定相：吸附活性強弱不等的吸附劑

硅膠、氧化鋁、聚酸膠等。流動相：各種極性的洗脫劑用途：非極性溶劑中、具有中等相對分子質(zhì)量且為非離子型的試樣。特別適用于分離異構(gòu)體目前五十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點原理：不同待測離子對固定相親和力的差別固定相：基質(zhì)：合成樹脂（聚苯乙烯）、纖維素和硅膠表面鍵合離子：陽離子和陰離子交換樹脂四、離子交換色譜法（IEC）流動相：一定pH和鹽濃度的緩沖溶液用途：適用無機(jī)離子、有機(jī)離子混合物的分離例如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子。目前五十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點

離子對AB具有疏水性，被非極性固定相提取不同待測離子A1，A2…與B離子間成對能力不同，形成不同疏水性離子對，從而保留值不同原理：將與待測物離子A電荷相反的離子B加入到流動相中形成離子對AB，間接改變待測離子保留特性五、離子對色譜法（IPC）如：固定相為非極性鍵合相，流動相為水溶液用途：主要用來分離強極性有機(jī)酸和有機(jī)堿目前五十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點固定相：

化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機(jī)多孔材料。流動相：

作用不是為了控制分離，而是為了溶解樣品或減小流動相粘度。六、尺寸排阻色譜法（SEC）常用流動相——四氫呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水原理：利用被測組分分子大小不同、在固定相上選擇性滲透實現(xiàn)分離。目前五十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點凝膠過濾色譜：以水或緩沖液作流動相主要適合于水溶性高分子的分離凝膠滲透色譜：以有機(jī)溶劑作流動相主要適合于脂溶性高分子的分離用途六、尺寸排阻色譜法（SEC）特點：固定相與分子間作用力趨于零，柱壽命長相對分子質(zhì)量差別必須大于10％才能分離目前六十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點七、親和色譜法（AC）原理：利用生物大分子和固定相表面存在生化特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離固定相：生物專一性配基+載體流動相：一定pH的緩沖液目前六十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點具有親和力特性吸附的生物大分子相互作用而被保留；沒有親和力作用的分子不被保留。用途：蛋白、酶、抗體分離，生物和醫(yī)藥分析目前六十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點第四節(jié)HPLC分離條件的選擇根據(jù)vanDeemter方程和色譜分離方程式選擇分析條件

在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴(kuò)散項B/U較小，可以忽略不計，而只有兩項，即：H=A+Cu目前六十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點（1）固定相：①粒度小，均勻，以減小渦流擴(kuò)散和流動相傳質(zhì)阻力；②改進(jìn)結(jié)構(gòu)，采用大孔徑和淺孔道的表面多孔型載體或全多孔微粒型載體，減少滯留流動相傳質(zhì)阻力。第四節(jié)HPLC分離條件的選擇目前六十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點（2）流動相：低粘度的流動相——增大組分在溶劑中的擴(kuò)散系數(shù)Dm——減少傳質(zhì)阻力（3）流速：最佳流速在流速很小處，減小流速有利提高柱效常采用比最佳流速高數(shù)倍的流速——加快分析速度第四節(jié)HPLC分離條件的選擇目前六十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點（4）柱溫：提高柱溫——降低流動相粘度——減少傳質(zhì)阻力——分辨率降低，柱壽命短，易產(chǎn)生氣泡，一般在室溫下進(jìn)行第四節(jié)HPLC分離條件的選擇目前六十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點第五節(jié)HPLC的建立與應(yīng)用一、建立HPLC分析方法的一般步驟

1、根據(jù)被分析樣品的特性選擇適用于樣品分析的一種HPLC分離方式。材料來源、濃度范圍組分特性、結(jié)構(gòu)、分子量、溶解性等目前六十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點

一、建立HPLC分析方法的一般步驟

目前六十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、建立HPLC分析方法的一般步驟

2、選擇合適的分析方法適用的色譜柱：柱的規(guī)格（柱內(nèi)徑及柱長）和選用固定相（粒徑及孔徑）流動相檢測器樣品預(yù)處理目前六十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、建立HPLC分析方法的一般步驟

3.分析條件的優(yōu)化流動相種類與配比梯度溫度流速檢測波長進(jìn)樣量目前七十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、建立HPLC分析方法的一般步驟

4、由獲得的色譜圖進(jìn)行定性分析和定量分析。目前七十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點二、HPLC定性定量分析方法1、定性分析色譜鑒定法：保留時間對照化學(xué)鑒定法：利用專屬化學(xué)反應(yīng)對分離后收集的組分定性色譜-光譜聯(lián)用定性非在線色譜光譜聯(lián)用法：色譜光譜聯(lián)用儀目前七十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點二、HPLC定性定量分析方法2、定量分析外標(biāo)法：外標(biāo)工作曲線法、外標(biāo)一點法、外標(biāo)二點法等不需知道校正因子，但需進(jìn)樣量準(zhǔn)確內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)工作曲線法、內(nèi)標(biāo)一點法、內(nèi)標(biāo)二點法、內(nèi)標(biāo)對比法目前七十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點1、在食品分析中的應(yīng)用食品營養(yǎng)成分分析：蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、礦物質(zhì)等；食品添加劑分析：甜味劑、防腐劑、著色劑、抗氧化劑等；食品污染物分析：霉菌毒素、微量元素、多環(huán)芳烴等。2、在環(huán)境分析中的應(yīng)用多環(huán)芳烴、農(nóng)藥（如氨基甲酸脂類）殘留等。三、HPLC的應(yīng)用目前七十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點3、在生命科學(xué)中的應(yīng)用分子水平上研究生命科學(xué)、遺傳工程、臨床化學(xué)、分子生物學(xué)等必不可少的工具低分子量物質(zhì)：氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等分離和測定高分子量物質(zhì)：多肽、核糖核酸、蛋白質(zhì)和酶的純化、分離和測定三、HPLC的應(yīng)用目前七十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點4、在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用體液中代謝物測定；藥代動力學(xué)研究；臨床藥物監(jiān)測：合成藥物：抗生素、抗憂郁藥、黃胺類藥等天然藥物：生物堿（吲哚堿、強心甙）等5、在無機(jī)分析中的應(yīng)用陽、陰離子的分析等。三、HPLC的應(yīng)用目前七十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點我國藥典收載HPLC法項目和數(shù)量比較表項目數(shù)量1985版1990版1995版2000版2010版鑒別934150檢查1240160含量測定7601173871385目前七十七頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點色譜柱類型品種數(shù)C18柱1210個C8柱93個氰基柱21個硅膠柱31個苯基柱9個色譜柱類型品種數(shù)氨基柱5個丁基柱3個三甲基硅烷柱2個二羥基丙基硅烷鍵合硅膠柱1個苯乙烯-二乙烯基柱1個2010版藥典二部中色譜柱的使用情況目前七十八頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點纈沙坦a-酸性糖蛋白柱鹽酸帕羅西汀瑞格列奈手性色譜柱α1酸性蛋白柱瑞格列奈片苯磺酸順阿曲庫銨手性色譜柱chiralcelOD-RH注射用苯磺酸順阿曲庫銨甲氨蝶呤牛血清白蛋白鍵合硅膠柱甲氨蝶呤片注射用甲氨蝶呤目前七十九頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前八十頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前八十一頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點目前八十二頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點第六節(jié)毛細(xì)管電泳法

CapillaryElectrophoresis目前八十三頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點一、含義電泳：在電場作用下，電解質(zhì)溶液中的帶電質(zhì)點向電荷相反的電極方向遷移的過程。毛細(xì)管電泳：在毛細(xì)管中進(jìn)行的電泳。目前八十四頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點電泳：帶電粒子在電場作用下遷移電滲：溶劑在電場作用下的單向流動正溶質(zhì)離子所受的力：電場力+電滲力負(fù)溶質(zhì)離子所受的力：電場力電滲力中性分子所受的力：電滲力二、基本原理目前八十五頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點電滲流速度是電泳流速度的5-7倍，混合物中所有的組份隨電滲流朝一個方向遷移。流出順序：①正離子②中性粒子③負(fù)離子目前八十六頁\總數(shù)九十四頁\編于二十二點