第十六抗生素類藥物分析演示文稿

第十六抗生素類藥物分析演示文稿目前一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點優(yōu)選第十六抗生素類藥物分析目前二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點一、抗生素的定義及特點◆低化學純度－同系物多、異構體多、降解物多◆活性組分的變異性－生產(chǎn)過程中條件的變化◆不穩(wěn)定性－不穩(wěn)定性結構

是指“生物在其生命活動中產(chǎn)生的，能在低微濃度下有選擇地抑制或影響它種生物機能的化學物質(zhì)的總稱”目前三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點抗生素的分類β－內(nèi)酰胺類抗生素四環(huán)素類抗生素氨基糖苷類抗生素大環(huán)內(nèi)酯類抗生素多烯大環(huán)類抗生素－制菌霉素、兩性霉素多肽類抗生素－放線菌素、多黏菌素酰胺醇類抗生素－氯霉素抗腫瘤類抗生素其他抗生素二、抗生素類藥物的分類按化學結構分目前四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點三、抗生素類藥物的細菌耐藥性目前五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點三、抗生素類藥物的細菌耐藥性◆1、耐藥性的種類固有耐藥性：天然耐藥性，由細菌染色體基因決定獲得性耐藥性：◆2、耐藥的機制（1）產(chǎn)生滅活酶，使抗菌藥失活如β-內(nèi)酰胺酶（2）抗菌藥物作用靶位改變（3）降低細菌外膜通透性（4）影響主動流出系統(tǒng)目前九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點四、抗生素藥物的質(zhì)量分析鑒別試驗㈠1、官能團的顯色反應－特殊基團的反應2、光譜法－特征吸收3、色譜法－保留行為4、生物學方法－抗菌能力目前十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點㈡檢查1、影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的檢查項目－水份、酸堿度等2、控制有機和無機雜質(zhì)的檢查項目3、與臨床安全性密切相關的檢查項目－異常毒性、熱原等4、其他檢查項目－其他共存組分目前十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點㈢含量或效價測定1、微生物檢定法比濁法管碟瓊脂擴散法－抑菌圈Potency:是指每ml或每mg中含有某種抗生素有效成分的多少U/mg是以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標來判斷效價的一種方法方法目前十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點靈敏度高、需用量少適用范圍廣－純品、不純品、已知的和新的可一次測定同類型抗生素的總效價－無需分離純化與臨床的應用要求一致操作繁瑣、費時費力誤差較大是結構復雜和多組分抗生素效價測定的首先方法優(yōu)點㈢含量或效價測定1、微生物檢定法缺點目前十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點2、物理化學法

HPLCLC-MSUV

容量法準確可靠、專屬性高、操作簡單、省時、樣品用量少1、對結構已知或提純的抗生素2、需要標準品對照儀器分析方法㈢含量或效價測定目前十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素目前十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點β-內(nèi)酰胺類抗生素6-氨基青霉烷酸（6-APA）；青霉素類；7-氨基頭孢菌烷酸（7-ACA）；頭孢菌素類；一、結構及分類氫化噻嗪環(huán)氫化噻唑環(huán)目前十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點青霉素（青霉素鉀、鈉）目前十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點氨芐西林

（氨芐青霉素）目前十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點阿莫西林

（羥氨芐青霉素）目前二十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點普魯卡因青霉素目前二十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點頭孢氨芐目前二十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點頭孢羥氨芐目前二十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點㈡理化性質(zhì)1、酸性與溶解性2、旋光性3、紫外吸收特性4、不穩(wěn)定性目前二十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點酸性一、結構特點與性質(zhì)Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽

（一）羧基

易溶于水

目前二十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點與有機堿(普魯卡因)成鹽

難溶于水普魯卡因青霉素目前二十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點（二）手性C

頭孢菌素類

C6C7青霉素類C3C5C6

旋光性﹡﹡﹡﹡﹡目前二十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

（三）共軛體系

頭孢菌素類母核有共軛體系

青霉素類母核無明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基

UV目前二十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點（四）β–內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性

水溶液

不穩(wěn)定

干燥純凈

穩(wěn)定

不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大

酰胺鍵易水解

含水量純度

目前二十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點青霉素類

某些氧化劑酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（溫度）降解失效（四）β–內(nèi)酰胺環(huán)

目前三十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點與含水量和純度密切相關青霉素的降解途徑目前三十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點青霉素的降解產(chǎn)物青霉噻唑酸－青霉素酶青霉酸－強酸性環(huán)境青霉烯酸－弱酸性環(huán)境青霉醛－強酸性-加熱青霉胺－強酸性-加熱/青霉素酶-重金屬降解產(chǎn)物目前三十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點二、鑒別反應（一）顯色反應1、異羥肟酸鐵反應目前三十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點2.茚三酮反應

α-氨基-氨基茚三酮藍紫色目前三十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點3.雙縮脲反應（開環(huán)分解）-內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅紫目前三十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前三十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點4.與重氮苯磺酸反應橙黃色重氮苯磺酸--56OHHC（偶合）酚羥基頭孢哌酮目前三十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點1.K+、Na+的火焰反應（二）各種鹽的反應

焰色→鮮黃色

+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+

焰色→紫色

+0.1%四苯硼鈉→↓白

K+目前三十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點2.沉淀反應（青霉素鹽）遇酸→↓在過量HCl或有機溶劑中溶解白青霉素青霉素鈉

青霉素鉀

+H+目前三十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點3.重氮化-偶合反應

重氮化-偶合反應芳伯氨基目前四十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點光譜法（三）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物Cu2+頭孢氨芐λmax=262nm青霉素V鈉

A280nm/A264nm=1.30～1.50目前四十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前四十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點2、IR法3180cm-1N-Hβ–內(nèi)酰胺C=O1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1C-O以阿莫西林為例目前四十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點色譜法（四）1、TLC法對照品對照法2、HPLC法目前四十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點三、雜質(zhì)檢查

藥物

檢查項目

檢查方法

頭孢他啶聚合物HPLC法

頭孢曲松鈉

頭孢哌酮鈉

頭孢噻肟鈉

頭孢呋辛酯有關物質(zhì)和異構體HPLC法

頭孢氨芐有關物質(zhì)反相TLC法

青霉素鉀（鈉）吸收度紫外分光光度法

目前四十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

1.頭孢他啶聚合物的測定分子排阻色譜法

固定相：葡聚糖凝膠G-10

流動相A：3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液

流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉

對照品溶液：頭孢他啶對照品100μg/ml

目前四十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點1）系統(tǒng)適用性試驗：理論塔板數(shù)和拖尾因子用1mg/ml藍色葡聚糖2000、流動相A測定；重復性用對照品溶液、流動相B測定。

N不低于900，拖尾因子0.75~1.5，峰面積的RSD應小于5.0%

2）測定方法

進樣供試液，用流動相A；進樣對照液，用流動相B。以外標法計算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%。目前四十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點2.頭孢呋辛酯中有關物質(zhì)和異構體的檢查

固定相：ODS

流動相：0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）

1）頭孢呋辛酯Δ2-異構體的制備：頭孢呋辛酯對照品+流動相頭孢呋辛酯Δ2-異構體。

2）系統(tǒng)適用性試驗：各異構體之間的R>1.5，以頭孢呋辛酯A異構體計算n>1500。目前四十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

3）異構體：

相對保留時間1--被測物

2--標準物異構體相對保留時間判斷B異構體0.85供試液譜圖中A異構體的峰面積A異構體1.0與A、B異構體峰面積和之比應為0.48~0.55。

異構體A異構體B頭孢呋辛目前四十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點3.頭孢氨芐中有關物質(zhì)的檢查-反相TLC法

固定相：活化后的硅膠G板置5%（V/V）正十四烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干展開劑：0.1mol/L枸櫞酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉-丙酮（120：80：3）

供試液：本品50mg/ml

對照液（1）：本品0.5mg/ml

對照液（2）：α-苯甘氨酸0.5mg/ml

對照液（3）：7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸

0.5mg/ml目前五十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點結果判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，與對照液（2）（3）位置相同上所的斑點比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質(zhì)斑點，與對照液（1）所顯的主斑點比較，其顏色不得更深。目前五十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點4.青霉素鈉（鉀）的吸收度檢查：供試液1.80mg/ml，

結果判斷：A280不得大于0.10目前五十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點（一）高效液相色譜法原理：利用青霉素類抗生素在一定條件下在反相硅膠上的保留行為的不同而實現(xiàn)高效分離，并與標準品相對照，而對其進行定量的一種方法。優(yōu)化色譜分析條件（1）Column-CNODSC18C8-Ben（2）mobilephase/flowrate（3）columntemperature（4）detectionwavelength（5）workstationsamplepreparation四、含量測定-容量法和儀器分析法目前五十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點實驗注意事項（1）色譜峰要達到較好的分離－基線分離(baseseparation)（2）需要標準品對照，用外標法定量（3）可同時測定多個組分的含量（4）需要排除制劑中輔料等雜質(zhì)對測定的干擾目前五十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點（二）生物樣本中β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析血漿尿樣唾液膽汁生物樣本色譜柱：HypersilODSC18(200mm×4.6mm,I.D.5μm)樣品制備：取血漿200μL，加入內(nèi)標5μL，再加入HCLO4，窩旋提取InternalstandardIS目前五十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前五十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點第三節(jié)氨基糖苷類抗生素目前五十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點第三節(jié)氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素卡那霉素慶大霉素巴龍霉素目前五十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元糖鏈霉雙糖胺目前五十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點鏈霉素：鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺目前六十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點巴龍霉素D-葡萄糖胺+脫氧鏈霉胺+D-核糖+巴龍霉糖巴龍胺苷元巴龍二糖胺

糖目前六十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點慶大霉素

糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖目前六十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺目前六十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點慶大霉素C復合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3目前六十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點一、結構與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素

3個慶大霉素5個堿性中心堿性（一）水溶性溶解性（二）目前六十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點鏈霉素

pH5～7.5慶大霉素

pH2～12

穩(wěn)定穩(wěn)定性（四）UV（三）目前六十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點坂口反應N-甲基葡萄糖胺反應麥芽酚反應目前六十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點二、

鑒別

茚三酮反應（一）△羥基胺結構目前六十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

（2）Molisch反應具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，加入α–萘酚（紅紫色）或蒽酮（藍紫色）目前六十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點紅紫色目前七十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

（3）Elson-Morgan反應水解產(chǎn)生的N-甲基-L-葡萄糖胺在堿性溶液中與乙酰丙酮合成吡咯衍生物，再與對二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反應，生成櫻桃紅色縮合物。藍紫色目前七十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

（4）麥芽酚反應－鏈霉素的特征反應鏈霉素水解得到的鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)擴大形成六元環(huán)，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再消除鏈霉胍，生成α-甲基-β-羥基-γ-吡喃酮（麥芽酚），該化合物與Fe3+在弱酸性溶液中形成紅紫色配位化合物。目前七十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點紫紅麥芽酚目前七十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點（5）坂口反應－鏈霉胍的特有反應向鏈霉素的水解產(chǎn)物鏈霉胍與NaBrO2反應得產(chǎn)物1；8-羥基喹啉也和NaBrO2反應得產(chǎn)物2。產(chǎn)物1和產(chǎn)物2再相互作用生成橙紅色化合物。目前七十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點（八）色譜法（1）TLC法：硫酸慶大霉素的鑒別

點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色

對照液

判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位置應一致。

點樣：供試液

對照液①：硫酸鏈霉素標準品

對照液②：硫酸鏈霉素標準品+硫酸新霉素標準品+硫酸卡那霉素標準品

目前七十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、大小應與對照液①相同，

對照液②應顯示分離清晰的3個斑點否則試驗無效。

（2）HPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別

比較供試液與對照液各組分的保留時間。目前七十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

特殊雜質(zhì)的檢查（1）鏈霉素中鏈霉素B的檢查－TLC法硅膠G板（使用前需活化）、展開劑甲苯-冰乙酸-甲醇（50:25:25）、0.2％二羥萘的乙醇－20％硫酸混合液（2）慶大霉素中組分C的檢查－衍生化后HPLC色譜柱、流動相、檢測波長、衍生化條件的摸索

組分C的毒副作用和耐藥性與慶大霉素有差異，導致產(chǎn)品的效價和臨床療效目前七十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點++410.pH吲哚衍生物巰基醋酸鄰苯二醛氨基λmax=330nm衍生化原理

1.目前七十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物目前七十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點RP－HPLC方法

2.規(guī)定C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%計算

3.峰面積歸一化法目前八十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點目前八十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點四、

含量測定微生物檢定法各國藥典主要采用HPLC法常用于體內(nèi)藥分

返回目前八十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點第四部分：四環(huán)素類抗生素TrtracyclinesTC目前八十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點

理化特性（1）酸堿兩性－C4（二甲氨基）、C10（酚羥基）（2）旋光性－含有手性中心（一般為左旋）（3）紫外吸收特性－具有共軛雙鍵體系（吸收波長為長波方向）（4）與金屬離子的配位化合物反應－酚羥基和烯醇基（5）不穩(wěn)定性－對各種外界條件，包括氧化劑、酸、堿，易形成差向、脫水和異四環(huán)素，顏色加深目前八十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點弱酸性環(huán)境ETC差向四環(huán)素目前八十五頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點強酸性環(huán)境ATC脫水四環(huán)素目前八十六頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點堿性環(huán)境EATC異四環(huán)素差向脫水四環(huán)素目前八十七頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點二、

鑒別試驗

濃H2SO4反應（一）黃色朱紅色綠藍深紫色鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素42SOH鹽酸美他環(huán)素橙紅色目前八十八頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點FeCl3反應（二）褐色橙褐色深褐色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素3FeCl目前八十九頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點TLC法（三）鹽酸土霉素的鑒別

HPLC法（五）EDTA

克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象比較保留時間目前九十頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點三、

特殊雜質(zhì)檢查

·

4-差向四環(huán)素（ETC）

·脫水四環(huán)素（ATC）

·差向脫水四環(huán)素（EATC）

·鹽酸金霉素（CTC）

有關物質(zhì)（一）HPLC法（2000版）鹽酸四環(huán)素目前九十一頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點四環(huán)素有關物質(zhì)TLC圖I.供試液(5mg/ml)ETC(0.2mg/ml)

ATC(0.025mg/ml)IV.EATC(0.025mg/ml)CTC(0.1mg/ml)VI.混合液4％0.5％0.5％2％目前九十二頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點吸收度（二）nmmax355268l、鹽酸四環(huán)素目前九十三頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點雜質(zhì)吸收度

取供試品配成每10mg/ml的溶液至4cm的吸收池中，在530nm處測定，其吸收度不得超過0.12。應嚴格控制溫度和時間目前九十四頁\總數(shù)一百零三頁\編于十點四、

含量測定HPLC法

鹽酸四環(huán)素的測定

系統(tǒng)適用性試驗：鹽酸四環(huán)素、有關物質(zhì)及ATC峰間的分離度均應符合要求。

定量方法：外標法以峰面積計。