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高中生物選修知識(shí)點(diǎn)匯總第1頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四3.運(yùn)載體(1)作用:①作為運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)。②利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。(2)種類:質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒等。(3)條件:①有一個(gè)或多個(gè)限制酶切位點(diǎn)②能自我復(fù)制③有標(biāo)記基因(4)一般來說,天然載體往往不能滿足人類的所有要求,因此在基因工程中,對(duì)某些天然的載體進(jìn)行人工改造。第2頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四4.基因工程中形成的重組DNA是DNA分子片段的連接,而不是合成DNA分子或轉(zhuǎn)錄合成mRNA的過程5.DNA連接酶:不需要模板DNA聚合酶:需要模板DNA復(fù)制時(shí)都形成磷酸二脂鍵6.基因操作程序:Ⅰ獲取目的基因Ⅱ構(gòu)建表達(dá)載體(核心)Ⅲ導(dǎo)入受體細(xì)胞Ⅳ目的基因的檢測(cè)與鑒定第3頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四Ⅰ獲得目的基因(1)基因組文庫(所有的)部分基因文庫(部分的),如cDNA文庫(2)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因原理:DNA復(fù)制指數(shù)方式增加需要:模板DNA,原料(游離的四種脫氧核苷酸),引物,
DNA聚合酶(3)人工合成(基因較?。┗瘜W(xué)合成:DNA合成儀(已知序列)反轉(zhuǎn)錄法:未知序列第4頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四Ⅱ構(gòu)建表達(dá)載體(核心):目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因Ⅲ導(dǎo)入受體細(xì)胞(1)植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法:雙子葉植物、裸子植物的體細(xì)胞或受精卵基因槍法花粉管通道法(2)動(dòng)物細(xì)胞:顯微注射技術(shù)受體細(xì)胞:受精卵(a含有目的基因表達(dá)所需的物質(zhì);b具有全能性)(3)微生物細(xì)胞:原核生物(繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少)作為受體細(xì)胞大腸桿菌:Ca2+處理細(xì)胞(感受態(tài)細(xì)胞)Ⅳ目的基因的檢測(cè)與鑒定1)檢測(cè):DNA分子雜交技術(shù)(原理:堿基互補(bǔ)配對(duì))①目的基因作探針②轉(zhuǎn)錄出mRNA③翻譯成蛋白質(zhì):抗原抗體雜交2)鑒定:個(gè)體生物學(xué)水平第5頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四7.逆轉(zhuǎn)錄形成的目的基因不含內(nèi)含子原因:mRNA形成時(shí)切掉了內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的RNA內(nèi)含子:能轉(zhuǎn)錄不能翻譯外顯子:能轉(zhuǎn)錄能翻譯真核生物基因編碼區(qū):內(nèi)含子和外顯子原核和真核生物的非編碼區(qū):對(duì)遺傳起調(diào)控作用(啟動(dòng)子和終止子)8.植物基因工程技術(shù)①提高農(nóng)作物的抗逆能力②改良農(nóng)作物的品質(zhì)③利用植物生產(chǎn)藥物第6頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四9.殺蟲的基因:Bt毒蛋白基因(我國(guó)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉)、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因10.病原微生物:病毒、真菌、細(xì)菌等。11.轉(zhuǎn)基因玉米:賴氨酸含量比對(duì)照提高30%12.動(dòng)物基因工程:導(dǎo)入生長(zhǎng)素基因---提高生長(zhǎng)速度導(dǎo)入腸乳糖酶基因---改善畜產(chǎn)品品質(zhì)生產(chǎn)藥物---乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器優(yōu)點(diǎn):易提取、產(chǎn)量高、質(zhì)量好、成本低轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體優(yōu)點(diǎn):抑制抗原基因的表達(dá)、或除去抗原決定的基因、無免疫排斥反應(yīng)第7頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四13.工程菌第一種基因工程藥物---重組人胰島素細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。我國(guó)生產(chǎn):白細(xì)胞介素-2、干擾素(糖蛋白,為我國(guó)第一個(gè)批量生產(chǎn)的藥物)、乙肝疫苗14.體外基因治療和體內(nèi)基因治療:都處于初期臨床試驗(yàn)階段15.基因工程是在兩個(gè)物種間轉(zhuǎn)移基因,克服了兩個(gè)物種間由于生殖隔離不能進(jìn)行基因交流的障礙,能定向培育生物新品種。16.基因重組:1)有性生殖時(shí):非等位基因的重新組合
2)DNA的拼接技術(shù)---基因工程17.基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)18.蛋白質(zhì)工程:第二代基因工程基因修飾或基因合成第8頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四第二章細(xì)胞工程1.植物的組織培養(yǎng)離體的組織、器官或細(xì)胞愈傷組織植物體2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)生殖方式:無性生殖脫分化再分化外植體固體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng):蔗糖、礦質(zhì)元素(無機(jī)鹽)激素:生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素(也有赤霉素)注:愈傷組織之后需要給予光照條件原理:植物細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁的方法:酶解法(纖維素酶和果膠酶)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法:物理法:離心、振動(dòng)和電激化學(xué)法:聚乙二醇(PEG)生長(zhǎng)素含量>細(xì)胞分裂素:誘導(dǎo)脫分化和根原基形成生長(zhǎng)素含量<細(xì)胞分裂素:誘導(dǎo)再分化和芽原基形成
一、植物細(xì)胞工程第9頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志:生成新的細(xì)胞壁植物體細(xì)胞雜交的原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性意義:克服不同物種遠(yuǎn)緣雜交的障礙3植物細(xì)胞工程的應(yīng)用(1)微型繁殖意義:保持親本優(yōu)良性狀、快速繁殖(2)作物脫毒取材部位:莖尖、根尖(分生區(qū))(3)人工種子:由胚狀體和人工種皮(營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、殺菌劑)(4)單倍體育種(5)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)例如:從愈傷組織中提取紫草素第10頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四二、動(dòng)物細(xì)胞工程(一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、過程:原代培養(yǎng)幼齡動(dòng)物的組織塊分散成單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液細(xì)胞貼壁接觸抑制胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶?jìng)鞔囵B(yǎng)2、原理:細(xì)胞的增殖10代以內(nèi),保持正常的二倍體核型3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件:①無菌、無毒②營(yíng)養(yǎng):糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清(液體培養(yǎng)基)③溫度和PH④氣體環(huán)境(CO2、O2)第11頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原理目的結(jié)果培養(yǎng)液成分細(xì)胞增殖細(xì)胞全能性獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白脫毒植株、微型繁殖、人工種子獲得新植株獲取大量細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物無機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸、葡萄糖、血清液體培養(yǎng)基蔗糖、礦質(zhì)元素、維生素、植物激素、有機(jī)添加劑固體培養(yǎng)基第12頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四(二)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植(卵母細(xì)胞:減二中期)原理:動(dòng)物細(xì)胞核的全能性(三)動(dòng)物細(xì)胞融合1、誘導(dǎo)方法:聚乙二醇、電激、滅活的病毒2、原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性(四)單克隆抗體1、原理:免疫原理、動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2、細(xì)胞類型(5種)、融合的細(xì)胞類型(3種)3、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):無限增殖、產(chǎn)生單一抗體4、優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量大5、應(yīng)用:診斷試劑、治療疾病和運(yùn)載藥物(生物導(dǎo)彈)第13頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四第三章胚胎工程1.精子的發(fā)生:從初情期----生殖機(jī)能衰退(哺乳動(dòng)物的睪丸的曲細(xì)精管里)1)精原細(xì)胞有絲分裂大量精原細(xì)胞其中部分初級(jí)精母細(xì)胞2)初級(jí)精母細(xì)胞MⅠMⅡ
四個(gè)單倍體精子細(xì)胞3)變形:形似蝌蚪,分頭頸尾。細(xì)胞核---精子頭部的主要部分高爾基體---精子頭部的頂體中心體---精子的尾部線粒體---聚集在尾的基部形成線粒體鞘其他物質(zhì):濃縮為原生質(zhì)滴,脫落和。2.卵子的發(fā)生1)場(chǎng)所:卵巢內(nèi),輸卵管中2)時(shí)間:從性別分化到生殖機(jī)能衰退3)過程:卵原細(xì)胞有絲分裂大量卵原細(xì)胞其中部分初級(jí)卵母細(xì)胞(被卵泡細(xì)胞包圍)第14頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四形成卵泡減分成熟卵子MⅠ:排卵前后完成(進(jìn)入輸卵管),產(chǎn)生1個(gè)極體和1個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞MⅡ:精子與卵子結(jié)合時(shí),生成成熟卵子和1個(gè)第二極體4)卵子是否受精的重要標(biāo)志卵黃膜和透明帶的間隙可觀察到兩個(gè)極體第15頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四3.排卵:卵子從卵泡中排出4.受精場(chǎng)所:輸卵管中1)精子獲能2)卵子準(zhǔn)備:進(jìn)一步成熟,達(dá)到減二中3)過程①頂體反應(yīng),釋放頂體酶,穿越放射冠②透明帶反應(yīng)---防止多精入卵的第一道屏障③卵黃膜封閉作用---防止多精入卵的第二道屏障④入卵后,尾部脫離,核膜破裂,形成雄原核同時(shí)卵子被激活,完成減二分裂,形成雌原核第16頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四5.卵裂期:透明帶內(nèi)進(jìn)行,胚胎總體積略減小,細(xì)胞行有絲分裂6.桑椹胚(32個(gè)),之前每個(gè)細(xì)胞都具全能性7.囊胚:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)發(fā)育成各種組織滋養(yǎng)層胎膜胎盤8.透明帶破裂:孵化9.原腸胚:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)表層細(xì)胞外胚層(細(xì)胞分化最旺盛)下方細(xì)胞內(nèi)胚層包圍的原腸腔10.體外受精1)卵母細(xì)胞采集和培養(yǎng)①促性腺激素處理(小)②已屠宰母畜卵卵巢中采集③超聲波探測(cè)儀…用真空泵吸取2)精子采集和獲能采集:①假陰道法②手握法③電刺激法④獲能:①培養(yǎng)法②化學(xué)誘導(dǎo)法:肝素或鈣離子載體第17頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四11.胚胎早期培養(yǎng):無機(jī)鹽有機(jī)鹽維生素激素氨基酸核苷酸血清等12.胚胎移植:1)供受體生殖器官的生理變化相同,相同生理環(huán)境2)處于游離態(tài)3)不發(fā)生免疫排斥4)可與受體子宮正常生理和組織聯(lián)系13.胚胎移植基本程序:1)供受體選擇處理2)配種或人工受精3)胚胎收集,檢查,保存4)移植5)檢查14.胚胎的分割:桑葚胚或囊胚15.胚胎干細(xì)胞(ES或EK):1)特點(diǎn):體積小,細(xì)胞質(zhì)核大,核仁明顯,具發(fā)育的全能性2)體外:可增殖不分化3)應(yīng)用:細(xì)胞壞死,退化,功能異常引起的疾病,如帕金森,少年糖尿病,老年癡呆癥等4)分化誘導(dǎo)因子:誘導(dǎo)ES分化第18頁,共19頁,2023年,2月20日,星期四
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