差示分光光度法測定藥物制劑中的四環(huán)素

差示分光光度法測定藥物制劑中的四環(huán)素四環(huán)素是生物合成的廣譜抗菌素。臨床研究表明，病人服用四環(huán)素后，定時測定體液中四環(huán)素含量可診斷胃癌，四環(huán)素還可作為熒光探針用以診斷癌癥。近年來，四環(huán)素還廣泛被用作飼料添加劑，以增強(qiáng)動物的抗病能力。關(guān)于四環(huán)素的測定方法，已有許多報道，如微生物法、分光光度法差示導(dǎo)數(shù)光譜法、FIA、RHPL、ISE、吸附SV、三氯化鐵比色法等。本文利用四環(huán)素與鉆離子在PH為11.5的Na2HPO4-NaOH緩沖溶液中生成黃綠色絡(luò)合物，并根據(jù)其光譜變化的牲性，采用差示光度法不經(jīng)分離直接測定了藥物制劑中的四環(huán)素。四環(huán)素濃度在0.80-25ug/ml范圍內(nèi)符合比耳定律。1實驗部分1.1儀器與試劑TU-1221型紫外一可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；PH-HJ908OB數(shù)字酸度計時北京海淀航天計算機(jī)公司）；XYJ80-2離心沉淀機(jī)（江蘇醫(yī)療器械廠）。鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)液：用標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所提供）配成2mg/ml的儲備液，使用時用水稀釋成0.2mg/ml；鉆離子溶液:用CoCl2-6H2O配成1mg/ml的儲備液，使用時稀釋成0.1mg/ml；Na2HPO4-NaOH緩沖溶液。以上試劑均為分析純，水為市售二次去離子水。1.2實驗方法于兩支25ml的比色管中，分別加入0.2mg/ml的鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)使用液2.0ml，一支用水稀釋至刻度作參比液，另一支加入0.1mg/ml的鉆離子溶液2ml，Na2HPO4-NaOH緩沖2ml，用水稀釋至刻度。前者置參比池中，后者置樣品池中，于405nm處測其吸光度。2結(jié)果與討論2.1實驗條件的選擇絡(luò)合物的形成受諸多因素的影響，本文對酸度，緩沖溶液的種類及用量、鉆離子的用量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間等條件的影響作了討論。2.1.1吸收光譜將鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)使用液按實驗方法處理后，在380-500nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描。鹽酸四環(huán)素在405nm處最大吸收，可作為測定波長。2.1.2酸度對絡(luò)合物形成的影響溶液的酸度對四環(huán)素與鉆離子生成絡(luò)合物影響較大。對不同酸度條件下絡(luò)合物的形成進(jìn)行了研究，在酸性、中性介質(zhì)中，絡(luò)合物不易形成。隨著溶液PH值的升高，溶液顏色逐漸加深，吸光度逐漸增大。PH在10.5-13.0范圍內(nèi)吸光度最大且穩(wěn)定；當(dāng)PH>13.0，絡(luò)合物的吸光度開始減小，這說明絡(luò)合物在強(qiáng)堿性介質(zhì)中開始離解，PH值越大，離解越歷害。這是由于大量的OH-和鉆離子形成了Co（OH）的絡(luò)離子，促使四環(huán)素一鉆離子絡(luò)合物離解。故本實驗選擇pH11.5。》2.1.3緩沖溶液種類及用量緩沖溶液的種類及用量對絡(luò)合物的形成有一定的影響。在Na2HPO4-NaOH，H3PO4-檸檬酸一NaOH，NaOH等不同的緩沖體系中，以在Na2HPO4-NaOH緩沖液中絡(luò)合物的吸光度最大且穩(wěn)定，用量以控制在2ml最為合適，用量太小不利于絡(luò)合物的形成，太大形成的絡(luò)合物又開始離解。在H3PO4—檸檬酸一NaOH緩沖液中，由于檸檬酸對Co2+有較強(qiáng)的絡(luò)合能力，消弱了Co2+與四環(huán)素的絡(luò)合。故本實驗選擇Na2HPO4-NaOH作為緩沖溶液。2.1.4鉆離子用量的影響在Na2HPO4—NaOH緩沖液中，足夠量的Co2+對對絡(luò)合物的形成是必要的，隨鉆離子用量的增加，絡(luò)合物的吸光度了相就增加。鉆離子用量在1.5—3.0ml范圍內(nèi)，吸光度值最大且穩(wěn)定。故本驗選擇鉆離子的用量為2ml。2.1.5溫度及時間對形成絡(luò)合物的影響溫度升高，吸光度略有減小，同時，隨溫度升高，絡(luò)合物的最大吸收波長會發(fā)生紅移，故本研究選擇在室溫（20°C）下進(jìn)行。另外，實驗還表明，絡(luò)合物的形成速度比較快，按實驗方法加入試劑后（約需10min），立刻進(jìn)行時間掃描，發(fā)現(xiàn)1h內(nèi)絡(luò)合物的吸光度值的變化僅為0.005,24h內(nèi)吸光度值無顯著變化，說明生成的絡(luò)合物很穩(wěn)定。2.1.6線性范圍在12支25ml的比色管中，依次加入0.1、0.5、1.0、1.5、2.0，2.5ml鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)工作液各兩份，其余按實驗方法處理后測定，所得結(jié)果線性處理后，線性回歸方程為：A=—0.0095+0.0305c（c為四環(huán)素的濃度：ug/ml），相關(guān)系數(shù)r=0.9997，￡=1.33X104L-mol-1?cm-1o根據(jù)IUPAC規(guī)定，計算得檢出限為0.40ug/ml，結(jié)果表明四環(huán)素濃度在0.80—25ug/ml范圍內(nèi)符合比耳定律。2.2干擾性實驗四環(huán)素制劑中加有淀粉、滑石粉、糊精、葡萄糖、硬脂酸鎂等賦形劑。按實驗方法作同樣處理，所有賦形劑的差示光譜在測定波長處無吸收。因此，可以不用任何分離直接測定片劑中四環(huán)素的含量。2.3 回收率測定精密稱取適量已知含量的樣品，加入一定量的鹽酸四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品，按實驗方法處理，用測得的吸光度值減去樣品的吸光度，用線性回歸方程計算，結(jié)果見表1。表1回收率實驗結(jié)果加入量檢測量RSD回收率(mg)(mg)(n=4)(%)(%)4.254.230.4699.54.254.310.85101.53.753.651.3497.83.753.700.7298.73樣品的測定

精密稱取四環(huán)素片10片，分別研成粉末，再適量稱取，按前述實驗方法處理測定，用回歸方程計算其含量，結(jié)果見表2。本法較紫外法結(jié)果略偏低，經(jīng)t檢驗，本法與紫外法間并無系統(tǒng)誤差。表2樣品中四環(huán)素的測定樣品本法測得值RSD（n=4