家畜人工授精課件

第七章

人工授精目錄第一節(jié)概述第二節(jié)采精第三節(jié)精液品質(zhì)檢查第四節(jié)精液的稀釋與保存第五節(jié)輸精第六節(jié)冷凍精液第一節(jié)概述一、人工授精的發(fā)展概況人工授精的發(fā)展經(jīng)歷下列三個(gè)階段：1.試驗(yàn)階段：1780年，意大利生理學(xué)家Spallanzani，第一次成功地用狗進(jìn)行了人工授精試驗(yàn)。

2.實(shí)用階段：上世紀(jì)40-60年代，人工授精的應(yīng)用蓬勃發(fā)展成為繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，發(fā)展最快，技術(shù)水平較高。

3．冷凍精液階段：50年代英國的Smith和Polge研究牛精液的冷凍保存方法，人工授精技術(shù)進(jìn)入了一個(gè)新的發(fā)展階段。

二、人工授精的優(yōu)越性1.提高了優(yōu)良種公畜的配種效能和種用價(jià)值

2.加速家畜品種改良，促進(jìn)育種工作

3.降低了飼養(yǎng)管理費(fèi)用

4.防止各種疾病，特別是生殖道傳染病的傳播

5.有利于提高母畜的受胎率

6.可以進(jìn)行精液的長期保存

7.這開展科學(xué)研究提供了有效手段

三、人工授精的限制1、通過人工授精可能使不良的公畜影響范圍更大2、必須投入一定資金，進(jìn)行房舍建設(shè)和設(shè)備購置3、必須進(jìn)行人員的技術(shù)培訓(xùn)，不良的操作會造成更嚴(yán)重的問題采精的基本要求安全：對種公畜、對人員必須確保安全潔凈：采集的精液不能受到任何生物和化學(xué)污染全部：能夠采集到種公畜全部的精液一、采精前的準(zhǔn)備（一）采精場地

采精要有一定的采精環(huán)境，以便雄性動物建立起鞏固的條件反射，同時(shí)防止精液污染。采精場地應(yīng)該寬敞、平坦、安靜、清潔，場內(nèi)設(shè)有采精架以保定臺畜，或設(shè)立假臺畜，供公畜爬跨進(jìn)行采精，采精場應(yīng)與人工授精操作室和公畜舍相連。室內(nèi)采精場的面積一般為10×10平方米，并附設(shè)噴灑消毒和紫外線照射殺菌設(shè)備。

（二）臺畜的準(zhǔn)備

臺畜有真假臺畜之分真臺畜是指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺畜。真臺畜應(yīng)健康、體壯、大小適中、性情溫順。選發(fā)情的母畜比較理想，經(jīng)過訓(xùn)練的公、母畜也可作臺畜。假臺畜即采精臺，是模仿母畜體型高低大小，選用金屬材料或木料做成的一個(gè)具有一定支撐力的支架。（三）調(diào)教種公畜爬跨假臺畜利用假臺畜采精，要事先對種公畜進(jìn)行調(diào)教，使其建立條件反射。調(diào)教的方法有如下幾種：

1.在假臺畜的后軀涂抹發(fā)情母畜的陰道粘液或尿液，公畜則會受到剌激而引起性興奮并爬跨假臺畜，經(jīng)過幾次采精后即可調(diào)教成功；

2.在假臺畜旁邊牽一發(fā)情母畜，誘使公畜進(jìn)行爬跨，但不讓交配而把其拉下，反復(fù)多次，待公畜性沖動達(dá)到高峰時(shí)，迅速牽走母畜，令其爬跨假臺畜采精；

3.將待調(diào)教的公畜拴系在假臺畜附近，讓其目睹另一頭已調(diào)教好的公畜爬跨假臺畜，然后再誘其爬跨。

公畜調(diào)教時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)

1.調(diào)教過程中，要反復(fù)進(jìn)行訓(xùn)練，耐心誘導(dǎo)，切勿施用強(qiáng)迫、恐嚇、抽打等不良剌激，以防止性抑制而給調(diào)教造成困難；

2.調(diào)教時(shí)應(yīng)注意公畜外生殖器的清潔衛(wèi)生；

3.最好選擇在早上調(diào)教，早上精力充沛，性欲盛；

4.調(diào)教時(shí)間、地點(diǎn)要固定，每次調(diào)教時(shí)間不宜長；

(四)種公畜的準(zhǔn)備

種公畜采精前的準(zhǔn)備，包括體表的清潔消毒和誘情（性準(zhǔn)備）兩個(gè)方面。這和精液的質(zhì)量和數(shù)量都有密切的關(guān)系。采精前應(yīng)擦拭公畜下腹部，用0.1%高錳酸鉀溶液等洗凈其包皮外并抹干，擠出包皮腔內(nèi)積尿和其他殘留物并抹干。在采精前，需以不同誘情方法使公畜有充分的性興奮和性欲，一般采取讓公畜在臺畜附近停留片刻，進(jìn)行幾次假爬跨。

二、采精技術(shù)

采精方法雄性動物的采精方法很多，主要有假陰道法、手握法、電剌激法、按摩法、海綿法等。

假陰道法適用于各種家畜和部分小動物，手握法是當(dāng)前公豬采精普遍應(yīng)用的方法，按摩法主要用于禽類和犬類，電剌激法主要用于野生動物的采精。

2.假陰道的準(zhǔn)備

假陰道應(yīng)具備五個(gè)條件：

1)適宜溫度：采精時(shí)假陰道內(nèi)腔溫度應(yīng)保持在38-40℃，集精杯也應(yīng)保持34-35℃。

2)適當(dāng)壓力：借助注入水和空氣來調(diào)節(jié)假陰道的壓力。

3)適當(dāng)潤滑度：涂抹潤滑劑的部位是假陰道前段1/3-1/2處到外口周圍，但涂布不可過長過多。。

4)無菌：凡接觸精液的部分均須經(jīng)消毒。

5)無破損漏洞：假陰道不得漏水或漏氣。牛羊假陰道安裝充氣后理想的狀態(tài)不太理想的狀態(tài)（但可以用）羊的假陰道法采精(二)手握法適用于豬的采精。是目前廣泛使用的采集的一種方法。操作時(shí)，采精員要戴上滅菌膠手套，蹲在假臺畜左側(cè)，待公豬爬跨臺畜后，當(dāng)陰莖從包皮內(nèi)開始伸出時(shí)，立即緊握龜頭，待其抽送片刻后，鎖定公豬的龜頭。待陰莖充分勃起時(shí)，順勢牽引向前，就能導(dǎo)致公豬射精。另一只手持帶有一次過濾網(wǎng)的的集精杯收集精子濃厚部分的精液，其它稀薄精液及顆粒狀膠凍分泌物排出時(shí)可隨時(shí)棄掉。分段采精：棄掉含副性腺分泌物多、精子較少、精液清亮白色的第一段和精液較稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液濃、精子多、呈乳白色的第二段。

目錄(四)按摩法此法適用于牛、犬和禽類。這里重點(diǎn)介紹禽的按摩采精。

雞的按摩采精一般二人進(jìn)行，一人用兩手分別握著公雞兩腿，以自然寬度分開，使雞頭向后，尾部朝向術(shù)者。術(shù)者先以剪子剪去公雞泄殖腔周圍的羽毛，再以酒精棉花球消毒泄殖腔周圍，待酒精干后再進(jìn)行采精。采精時(shí)術(shù)者用右手中指和無名指夾著經(jīng)消毒、清洗、烘干的采精器，使器口握在手心內(nèi)，手心朝向下方，以避免按摩時(shí)公雞排糞污染，左手沿公雞背鞍部向尾羽方向，撫摩幾次，以減輕公雞驚恐并引起性感。接著術(shù)者左手順勢翻轉(zhuǎn)手掌，將尾羽翻向背側(cè)，并以拇指與食指跨在泄殖腔兩上側(cè)，右手拇指與食指跨在泄殖腔兩下側(cè)腹部柔軟部，以迅速敏捷手法，抖動觸摸腹部柔軟處，然后迅速輕輕地用力向上抵壓泄殖腔，左手拇指和食指即可在泄殖腔兩上側(cè)作微微擠壓，精液即可順利排出。與此同時(shí)，迅速將右手夾著的集精器口翻上，承接精液流入集精器中。三、采精頻率采精頻率是指第周對雄性動物的采精次數(shù)。為了既能最大限度地采集精液，又能維持其健康體況和正常生殖機(jī)能，必須合理安排采精頻率。牛：每周2天采精，當(dāng)日采2次豬：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，當(dāng)日采2次。

犬：隔日一次

第三節(jié)精液品質(zhì)檢查一、目的二、項(xiàng)目三、方法一、檢查的目的1.檢查種公畜的配種能力2.公畜的繁殖問題3.確定精液可稀釋的倍數(shù)4.檢查精液的處理方法是否正確5.檢查精液產(chǎn)品的質(zhì)量二、檢查的項(xiàng)目（一）直觀項(xiàng)目

（二）微觀項(xiàng)目(一)直觀檢查項(xiàng)目射精量色澤氣味云霧狀PH值美蘭退色試驗(yàn)(二)微觀檢查項(xiàng)目精子活力估測精子活力計(jì)數(shù)密度測定:計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)、比色計(jì)測定畸形率：形態(tài)畸形率、頂體畸形率三、主要項(xiàng)目檢查方法（一）直觀項(xiàng)目檢查（二）微觀項(xiàng)目檢查（一）直觀項(xiàng)目檢查1.射精量2.色澤3.氣味4.云霧狀(1)射精量的測定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因1、射精量(1)射精量的測定方法概念:射精量是指每次射精的體積測定:以連續(xù)3次以上正常采集到的精液的平均值代表測定方法:可用體積測量容器如刻度試管或量筒,也可用電子秤稱重近似代表體積(2)公畜的正常射精量影響射精量的因素:種類、睪丸大小質(zhì)地、季節(jié)、健康狀況不同畜種的正常射精量：畜種奶牛水牛馬豬綿羊山羊射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5不同畜種的射精量比較（3）射精量不正常的原因現(xiàn)象原因過少采精過頻、性機(jī)能衰退、睪丸炎、發(fā)育不良過多副性腺發(fā)炎、假陰道漏水、尿潴留、采精操作不熟練2.色澤色澤：是指精液的顏色及其濃厚程度，它某種程度反應(yīng)精液是否正常，精子的濃度高低正常的精液：豬：淺灰白至白色牛羊：乳白色或乳黃色

不正常精液原因分析正常精液特征依從濃到?。喝辄S-乳白-白色-灰白淡紅（鮮紅）生殖道下段出血或龜頭出血淡紅（暗紅）副性腺或生殖道出血綠副性腺或尿生殖道化膿褐混有尿液3.氣味正常的精液：應(yīng)沒有很濃的氣味，或略帶動物特有的腥膻味腥味：有膿液臊味：有尿液或包皮液4.云霧狀是指新鮮精液在33-35℃溫度下，精子成群運(yùn)動所產(chǎn)生的上下翻卷的現(xiàn)象。云霧狀的明顯程度代表高濃度的精液中精子活力的高低。云霧狀分級標(biāo)準(zhǔn)+++翻明顯而且較快++翻明顯但較慢+仔細(xì)看才能看到精液的移動-無精液移動（二）微觀項(xiàng)目檢查1.活力估測2.密度測定3.畸形率測定1.活力的估測(1)概念:37℃下,精液中前進(jìn)運(yùn)動精子占總精子數(shù)的百分率(2)主要測定方法:估測法活力測定時(shí)精液的稀釋用品例：牛精子活力檢查的程序載玻片預(yù)溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺上，打開電源并調(diào)整控制溫度至37℃，然后放在載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預(yù)溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片用100倍和400倍觀察判斷視野中前進(jìn)運(yùn)動精子占的百分率

按10級制評分和記錄2.精子的密度檢查(1)密度的概念及表示方法單位體積精液中所含的精子數(shù)表示方法:個(gè)/ml或億/ml(2)各種家畜精液的精子密度畜種牛羊豬馬雞密度億/ml8-1220-302-31.5-330-50(3)各種家畜精子密度比較(4)精子密度的測定方法精子密度計(jì)數(shù)板(器)簡介精液的稀釋精液注入計(jì)數(shù)室精子計(jì)數(shù)精子密度計(jì)算精子密度計(jì)數(shù)板(器)簡介精子計(jì)數(shù)室長寬各1mm,面積1mm2高度0.1mm,體積0.1mm3由雙線或三線組成25個(gè)(5X5)中方格每個(gè)中方格內(nèi)有16個(gè)小方格(4X4)共計(jì)400個(gè)小方格精子計(jì)數(shù)室及一個(gè)中方格精液的稀釋將精液注入計(jì)數(shù)室前必須對精液進(jìn)行稀釋,以便于計(jì)數(shù)稀釋的比例根據(jù)動物精液的密度范圍確定稀釋方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小試管中進(jìn)行組合不同的稀釋.如牛精液稀釋100倍,為5ul原精+500ul稀釋液稀釋液:3%氯化鈉溶液,用以殺死精子,便于計(jì)數(shù)注入計(jì)數(shù)室前

各種家畜精液建議稀釋比例畜種牛羊豬馬雞稀釋倍數(shù)10020040404003%氯化鈉ul原精液ul500510005200-55200-5520005返回精液注入計(jì)數(shù)室將潔凈的計(jì)數(shù)板放在載物臺上固定好,蓋上干凈的蓋玻片。取25ul稀釋后的精液,將吸咀放于蓋玻片與計(jì)數(shù)板的接縫處。緩慢注入精液,使精液依靠毛細(xì)作用吸入計(jì)數(shù)室。注意：讓稀釋后的精液通過毛細(xì)作用自行吸入！用吸管稀釋后精液注入計(jì)數(shù)室共有兩個(gè)對稱的計(jì)數(shù)室用移液器注入精液精子計(jì)數(shù)將計(jì)數(shù)板固定在顯微鏡的推進(jìn)器內(nèi)，用100倍放大找到計(jì)數(shù)室，再用400倍找到計(jì)數(shù)室的第一個(gè)中方格。計(jì)數(shù)左上角至右下角五個(gè)中方格的總精子數(shù)，以精子的頭部為準(zhǔn)，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左右不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)格線上的精子。進(jìn)行精子計(jì)數(shù)的中方格數(shù)可以是四角一中心共5個(gè)中方格也可以是從左角到右下角五個(gè)中方格以圖示次序計(jì)數(shù)，精子的頭部為準(zhǔn)，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左右不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)格線上的精子。白色精子不計(jì)數(shù)計(jì)算精子密度精子密度=5個(gè)中方格總精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)例：牛精子密度測定程序放計(jì)數(shù)板于載物臺上取樣稀釋精液精液注入計(jì)數(shù)室鏡檢精子計(jì)數(shù)密度計(jì)算計(jì)數(shù)板和蓋玻片一定要清潔取500ul3%氯化鈉于小試管中,加入5ul原精液,混合均勻取25ul小心地從計(jì)數(shù)板與蓋玻片的接縫中加入,使其自行吸入計(jì)數(shù)室中用100倍和400倍觀察計(jì)數(shù)五個(gè)中方格的總精子數(shù),計(jì)數(shù)以頭部為準(zhǔn),在格線上的數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右精子密度=5個(gè)中方格總精子數(shù)5×10×1000×100（四）畸形率檢查1、染色劑0.5克龍膽紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，過濾至試劑瓶中備用。美蘭、純蘭或紅墨水。2、稀釋稀釋液0.9%NaCl牛：1:10

羊:1:20豬:1:23、抹片左手食指和拇指向上捏住載玻片兩端，使載玻片處于水平狀態(tài)，取10ul稀釋后的精液滴至載玻片右側(cè)。右手拿一載玻片或蓋玻片，使其與左手拿的載玻片呈向右的45度角，并使其接觸面在精液滴的左側(cè)。將載玻片向右拉至精液剛好進(jìn)入兩載（蓋）玻片形成的角縫中，然后平穩(wěn)地向左推至左邊。抹片后，使其自然風(fēng)干。4、固定在抹片上滴95%的酒精數(shù)滴，固定4分鐘，甩去多余的酒精。5、染色將載玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龍膽紫或其它染色劑5-10滴，5分鐘后，用洗瓶或自來水輕輕沖去染色劑，甩去水分涼干。6、檢查畸形率將載玻片放在400或640倍的顯微鏡下進(jìn)行觀察，共記錄若干個(gè)視野100-200個(gè)左右的精子。7、畸形率種類頭部膨大、頭部小于正常、雙頭、頭部不完整尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、雙尾、斷尾有近端原生質(zhì)小滴畸形精子視野中的畸形精子雙頭和雙尾精子第四節(jié)精液的稀釋一、精液稀釋的目的

精液稀釋是向精淮中加入適宜于精子存活的稀釋液。其目的有兩個(gè)：1.擴(kuò)大精液容量，從而增加輸精頭數(shù)，提高公畜利用率；2.延長精子的保存時(shí)間及受精能力，便于精液的運(yùn)輸，使精液得以充分利

用。

二、精液稀釋液的成分及作用

1．營養(yǎng)物質(zhì)

2．保護(hù)性物質(zhì)

1)緩沖劑

2)防冷抗凍物質(zhì)

3)抗菌物質(zhì)

3.稀釋劑

4.其它添加劑

1)酶類

2)激素類

3)維生素類

4)有機(jī)酸、二氧化碳等二、精液稀釋液的成分及作用

1．營養(yǎng)物質(zhì)

2．保護(hù)性物質(zhì)

1)緩沖劑

2)防冷抗凍物質(zhì)

3)抗菌物質(zhì)

3.稀釋劑

4.其它添加劑

1)酶類

2)激素類

3)維生素類

4)有機(jī)酸、二氧化碳等三、稀釋液的配制方法用品的清洗與消毒藥品的稱量、水的量取基礎(chǔ)液的配制：溶解—過濾—消毒（水浴或直接加熱）—放涼稀釋液的配制：基礎(chǔ)液按比例加入抗生素、卵黃Ⅰ液：按比例加入卵黃和抗生素的稀釋液Ⅱ液：按比例加入抗凍劑四、稀釋倍數(shù)和稀釋方法

1．稀釋倍數(shù)確定

精液適宜稀釋倍數(shù)與家畜種類和稀釋液種類有關(guān)。確定稀釋倍數(shù)應(yīng)根據(jù)原精液的質(zhì)量，尤其是精子的活率和密度、每次輸精所需的精子數(shù)、稀釋液的種類和保存方法。一般牛4-6倍，豬1-3倍，免3-5倍。

稀釋倍數(shù)的表示方法正確的表示方法：N倍稀釋：即1份精液:N份稀釋液1:N稀釋：意思同上實(shí)際應(yīng)用表示方法：稀釋后體積是原精液體積的多少倍。因此所謂的N倍稀釋，實(shí)際上是1:(N-1)，但這種方法有利于進(jìn)行相關(guān)計(jì)算。如N倍稀釋后，精子密度為原來的1/N，體積為原精液體積的N倍，可分裝的份數(shù)為：原精液體積×稀釋倍數(shù)/每份精液體積2.普通稀釋倍數(shù)的計(jì)算

3.冷凍精液稀釋倍數(shù)的計(jì)算

4．稀釋方法

1）精液經(jīng)檢查合格后應(yīng)立即進(jìn)行稀釋，越快越好；2）稀釋時(shí)，稀釋液的溫度和精液的溫度必須調(diào)整一致，以30-35℃為宜；3）稀釋時(shí)，將稀釋液沿精液瓶或插入的滅菌玻璃棒緩慢倒入，防止劇烈震蕩；4）若作高倍稀釋，應(yīng)先低倍后高倍，分次進(jìn)行稀釋；5）稀釋后立即鏡檢，活力應(yīng)和稀釋前一樣；6）稀釋后精液立即進(jìn)行分裝（一般按一頭母畜的輸精量）保存。

5.冷凍精液稀釋第一次稀釋倍數(shù)的計(jì)算：應(yīng)為最終稀釋后體積的50%。第二次稀釋為1:1稀釋意義：總稀釋倍數(shù)受總有效精子密度的影響，第二次稀釋時(shí)，稀釋液中含有防凍劑，而防凍劑應(yīng)在稀釋后在精液中含有固定的濃度。最后一次稀釋時(shí)，1:1稀釋，可以保證稀釋后防凍劑的濃度為Ⅱ液的1半。這樣無論總稀釋倍數(shù)是多少，最終精液中含的防凍劑濃度是不變的。第四節(jié)精液保存

一、精液的保存方法現(xiàn)行精液保存的方法按保存的溫度分：常溫保存（15-25℃）低溫保存（0-5℃）冷凍保存（-79--196℃）三種。按精液的狀態(tài)分：液態(tài)保存：常溫保存和低溫保存溫度都在0℃以上，故稱液態(tài)精液保存冷凍保存：超低溫保存精液以凍結(jié)形式作長期保存，故稱冷凍精液保存。二、低溫保存原理：低溫能抑制精子的代謝和微生物的繁殖，但迅速降溫會使精子遭受冷休克，加低溫保護(hù)劑和緩慢降溫并保持較低溫度，可使精液保存數(shù)天。稀釋液主要成分：抗生素、15-25%的卵黃、基礎(chǔ)液保存方法：用紗布包數(shù)層于裝冰塊的保溫瓶中或冰箱中保存。保存溫度：2-5℃低溫保存的關(guān)鍵性環(huán)節(jié)1、含卵磷脂、抗生素的稀釋液2、等溫稀釋3、緩慢降溫4、保持恒溫（2-4℃）5、在保質(zhì)期內(nèi)使用，用前進(jìn)行活力檢查二、常溫保存原理：精子自身所產(chǎn)生的酸性物質(zhì)和稀釋液中的酸性物質(zhì)使精液的PH降低到一定的水平，能夠抑制精子的代謝，從而延長精子的存活時(shí)間?？股啬軌蛞种莆⑸锏姆敝场Ｏ♂屢撼煞郑嚎股?、單糖、緩沖劑保存溫度：15-25℃常溫保存的關(guān)鍵1、含緩沖劑、營養(yǎng)、抗生素的稀釋液2、等溫稀釋及緩慢降溫3、保持恒溫（15-25℃）4、防止精子沉淀堆積時(shí)間過久5、在保質(zhì)期內(nèi)使用，用前進(jìn)行活力檢查第五節(jié)輸精操作一、輸精前的準(zhǔn)備（一）輸精器械的準(zhǔn)備與精液接觸的用品，必須經(jīng)過清洗、消毒滅菌，并且不能有任何不利于精子存活的化學(xué)物質(zhì)殘留。用前最好用稀釋液或生理鹽水沖洗，確保對精液無毒害作用。最好一頭母畜準(zhǔn)備一個(gè)輸精槍或槍頭，一次性輸精器只能一畜一支開膣器最好一畜一個(gè)，用前在消毒劑中浸過，用涼開水沖過后，放入干燥箱中干燥后，放涼使用（冬季應(yīng)防止過冷）。（二）精液的準(zhǔn)備輸精前應(yīng)將精液準(zhǔn)備好，應(yīng)確定精液品質(zhì)符合要求方可用輸精大劑量低溫或解凍后精液，應(yīng)將溫度升至20-30℃后輸精常溫保存精液不須要升溫小劑量冷凍精液也應(yīng)正確解凍后輸精（三）母畜的準(zhǔn)備牛、馬、羊等家畜輸精前應(yīng)進(jìn)行保定，以確保順利輸精。大家畜可保定在輸精欄內(nèi)或六柱保定架內(nèi)，羊也可倒提保定。豬輸精前應(yīng)對母豬進(jìn)一步發(fā)情檢查，并刺激相應(yīng)部位，以促進(jìn)母豬產(chǎn)生宮縮，有利順利輸精。由助手將動物的尾部拉向一側(cè)，馬輸精前應(yīng)將尾毛用繃帶扎好，防止帶入陰道內(nèi)。輸精前應(yīng)將母畜外陰部用肥皂水清洗后，用清水洗凈，擦干。母豬的外陰可用干紙巾擦凈即可。（四）輸精人員準(zhǔn)備輸精人員可戴一次性長臂或PE手套操作，也可洗凈雙手即可。操作人員應(yīng)指甲剪短，銼光馬輸精時(shí)手要伸入陰道內(nèi)，手臂應(yīng)用75%酒精消毒涼干后，涂少量石蠟油牛輸精時(shí)，手臂要伸入到直腸內(nèi)，應(yīng)清洗雙手，戴長臂手套醮少量水或石蠟油或肥皂水，也可不戴手套操作。（一）牛的輸精牛的輸精方法開膣器法直腸把握子宮頸深部輸精法子宮頸口尿道口膀胱卵巢子宮頸子宮體牛的輸精對母牛進(jìn)行發(fā)情鑒定，母牛發(fā)情結(jié)束，不再爬跨其它母牛，精神趨于穩(wěn)定時(shí)輸精。將母牛保定，尾部拉向一側(cè)，外陰用高錳酸鉀水棉球擦拭，并擦干。將冷凍精液解凍，剪去封口端，剪口端向前放外套管中，輸精器通針向后拉出15厘米。將外套管套在輸精器上。分開外陰，將套管連同外塑料膜向前上方伸入陰道10厘米，將輸精器捅透外膜。牛的輸精左手（或右手）戴上長臂手套涂少量石蠟油伸入直腸，排出宿糞。手伸至直腸狹窄部后，將直腸向后移，向骨盆腔底下壓，找到子宮頸（棒狀，質(zhì)地較硬有肉質(zhì)感，長約10-20厘米。手移至子宮頸后端（子宮頸陰道部），使子宮頸呈水平方向，并用力將子宮頸向前推，使陰道壁拉直，方便輸精器向前推進(jìn)。右手將輸精器前端伸到子宮頸外口附近，左手配合，使前端對準(zhǔn)子宮頸外口。左右手配合，上下調(diào)整，使輸精器前端進(jìn)入子宮體內(nèi)。牛的輸精等確認(rèn)輸精器到達(dá)子宮體時(shí)（短距離前后移動時(shí)，沒有明顯阻力），不要再向前推送輸精器。將精液緩慢注入，并慢慢抽出輸精器。注意：輸精器插入陰道時(shí)，應(yīng)向前上方。當(dāng)遇到阻力時(shí)，切忌用蠻力。輸精器插入子宮頸管時(shí)，推進(jìn)力量要適當(dāng)，以免損傷子宮頸、子宮體粘膜。如果輸精器后端為膠頭，將精液壓子宮內(nèi)后，不要松開膠頭，以免精液流回輸精器內(nèi)。牛直腸把握子宮頸輸精示意圖直肥輸精示意圖（二）羊的輸精羊輸精前準(zhǔn)備用試情公羊?qū)Πl(fā)情母羊進(jìn)行發(fā)情鑒定，發(fā)現(xiàn)允許試情公羊爬跨的母羊應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記，并安排輸精時(shí)間在母羊允許公羊爬跨后的6-12小時(shí)第一次配種將母羊保定在保定架內(nèi)或兩將其倒提，前肢著地。消毒外陰部，開膣器上涂以石蠟油。羊輸精操作將開膣器側(cè)扁方向與陰道呈同一方向，插入母羊陰道內(nèi)，向下轉(zhuǎn)動開膣器，并保持打開狀態(tài)。將準(zhǔn)備好的輸精器前端對準(zhǔn)子宮頸外口，伸入1厘米或更深。將精液緩慢注入后抽出。注意：開膣器應(yīng)保持開張狀態(tài)，以免夾傷陰道粘膜。如果無法找到子宮頸口，應(yīng)撥動粘液，使子宮頸口暴露。如果仍無法確認(rèn)，可將精液注入顏色較深的區(qū)域。羊的輸精（三）豬的輸精輸精時(shí)間掌握用種公豬試情的后備母豬發(fā)現(xiàn)發(fā)情（有壓背反應(yīng)），24小時(shí)后作第一次輸精，間隔12小時(shí)第二次輸精經(jīng)產(chǎn)母豬發(fā)現(xiàn)發(fā)情12小時(shí)后第一次輸精，12小時(shí)后第二次輸精。地方品種均推遲6小時(shí)無種公豬試情的后備豬壓背反應(yīng)后6-12小時(shí)，經(jīng)產(chǎn)豬立即輸精，地方品種均推遲6小時(shí)輸精清單（1）拿到消毒過的輸精導(dǎo)管存儲精液在16-20℃的恒溫箱中每天都用公豬檢查發(fā)情２次在出現(xiàn)靜立發(fā)情的當(dāng)天進(jìn)行第1次輸精輸精清單（2）清洗雙手清潔母豬陰戶、潤滑輸精導(dǎo)管，將輸精導(dǎo)管向上、向前插入陰道并按逆時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)直到鎖定搖動輸精瓶幾次，充分混合精液，剪掉輸精瓶的頂端慢慢地向輸精瓶加壓：輸精將要持續(xù)5-10分鐘精液流出陰戶時(shí)，要重新鎖定輸精導(dǎo)管輸精清單（3）使用后，立即用清水和去離子水清洗輸精導(dǎo)管記錄公母豬耳號間隔12-24小時(shí)后重復(fù)輸精蒸煮10分鐘消毒輸精導(dǎo)管－避免使用洗滌劑和消毒劑來清洗人工授精設(shè)備－將輸精導(dǎo)管頭部向上掛在有熱空氣處使其干燥－當(dāng)輸精導(dǎo)管內(nèi)外部干燥后，保存在清潔的輸精導(dǎo)管袋中－第二次輸精時(shí)要用不同的、清潔的、干燥的輸精導(dǎo)管輸精操作—擦拭外陰部輸精操作—在輸精器上涂潤滑劑輸精操作—分開外陰將輸精器前端向上呈45度角向左旋轉(zhuǎn)插入母豬陰道內(nèi)輸精過程第六節(jié)精液冷凍保存技術(shù)一、精液冷凍概述1950年英國科學(xué)家Polge和Smith采用卵黃和甘油作保護(hù)劑，用干冰作冷源進(jìn)行精液的冷凍，解凍后授精成功，開創(chuàng)了世界人工授精的新世代。到90年代，發(fā)達(dá)國家的全部奶牛和絕大多數(shù)肉牛采用凍精輸精。精液冷凍保存成為最可靠的保存方法。精液冷凍保存是目前精液保存最有效的方法二、精液冷凍的原理（一）1、超低溫使精子處于零代謝狀態(tài)，升溫后能使精子復(fù)蘇并且不失去受精能力。2、但精子冷凍過程會由于形成冰晶使精子受到損害，這些損害包括：精子外的水分先形成冰晶，而形成精子內(nèi)外的滲透壓差，導(dǎo)致精子水分外滲，精子內(nèi)滲透壓增高，電解質(zhì)濃度提高，酸堿失去平衡。冰晶的形成造成：產(chǎn)生機(jī)械壓力，導(dǎo)致細(xì)胞表層破壞冰晶滲透入精子內(nèi)部，破壞精子結(jié)構(gòu)3、如果在冷凍過程只形成微小冰晶，即玻璃化狀態(tài)，則精子就不容易受到損傷，解凍后能恢復(fù)活力。精液冷凍的原理（二）4、形成玻璃化狀態(tài)的條件：防凍劑干擾晶格的排列形成“過冷溶液”快速降溫，使水分子來不及移動和排列，就失去了能量，形成更“過冷溶液”快速降溫使液體只能形成極微小的“微晶”5、保存和解凍過程的變化：冰晶很微小，所以表面能很高，微晶總是力圖合并成大冰晶一旦吸收一定的能量，冰晶就會合并成大冰晶，從而使精子受到破壞。保存過程中，即使凍精溫度只升高到-60℃，也可能使精子死亡凍精在解凍時(shí)也需要快速升溫，才能保證防止微晶在解凍過程中形成大冰晶三、精液冷凍的稀釋液低溫保護(hù)劑：糖類：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖卵黃、奶類冷凍保護(hù)劑甘油二甲基亞砜乙二醇抗生素類：慶大霉素、青霉素、鏈霉素等四、冷凍精液稀釋液的組成基礎(chǔ)液：由糖類和鹽類、水配制的等滲液第一液：由基礎(chǔ)液和卵黃（15-20%）組成的低溫保存稀釋液。用于在33℃下稀釋和逐步降溫。第二液：由第一液和甘油或其它防凍劑組成。甘油含量通常比稀釋后濃度高一倍。用于精液的第二次稀釋（2-4℃）五、解凍液的配制一般采用2.9%的檸檬酸鈉作解凍液豬的凍精解凍液用常溫保存稀釋液BTS也可用VB12注射液作解凍液如果解凍液中加入2mmol的咖啡因有利于提高受胎率六、冷凍精液的程序1、精液的采集：牛羊采精可采用一次采精兩個(gè)射精量的方法2、品質(zhì)檢查：精液的密度和活力都必須符合要求3、稀釋前處理：羊、豬的精液在稀釋前進(jìn)行離心或清洗（羊）有利于提高解凍后活力4、稀釋：可采用一次稀釋也可采用二次或三次稀釋。最常用的是二次稀釋冷凍精液的程序5、稀釋第一次稀釋：在30℃溫度下，根據(jù)計(jì)算的稀釋倍數(shù)進(jìn)行第一次稀釋，放在500毫升的燒杯中與第二液一起緩慢降溫至2-5℃。第二次稀釋：在2-5℃下進(jìn)行6、平衡：是精液與防凍劑（甘油）相互的時(shí)間。一般2-4小時(shí)。7、分裝：凍精的劑型有細(xì)管（0.25ml、0.5ml），安瓿（2.5ml、5ml)、顆粒（0.1ml）、袋裝等。冷凍精液的程序8、冷凍：冷源：干冰（-79℃）、液氮（-196℃）冷凍用品：冷凍面：銅網(wǎng)、氟板（聚四氟乙烯）、鋁板冷凍槽：廣口液氮罐、液氮槽鋼匙、鑷子、低溫溫度計(jì)冷凍方法：干冰埋藏法液氮熏蒸法不同劑型冷凍方法：顆粒凍精細(xì)管凍精9、解凍檢查：活力0.3以上精液冷凍儀七、顆粒凍精的制作（一）冷凍條件1、冷源：液氮或干冰2、冷凍面：可以用銅網(wǎng)、聚四氟乙烯板、鋁板等3、冷凍溫度：-98—--110℃4、液氮槽（二）顆粒凍精制作流程1、冷凍面的預(yù)冷：將冷凍面放入液氮中浸數(shù)分鐘，待不再有大量氣體放出時(shí)，取出，架在液氮面上1.5cm高處，數(shù)分鐘后即可冷凍。2、凍前精子活力檢查：平衡的精液應(yīng)進(jìn)行活力檢查，如果活力合格方可滴凍3、滴凍：預(yù)冷至2-4℃的滴管吸取精液，均勻地滴在冷凍板上，并使之間距為一個(gè)顆粒直徑。每個(gè)顆粒0.1ml顆粒凍精制制作流程4、滴凍練習(xí)：每次用取樣器取1ml精液，將其滴成10個(gè)大小相等的顆粒。5、熏蒸：一塊冷凍板滴滿后，可將冷凍板面加蓋（也可不加）。6、將冷凍板浸入液氮：并用預(yù)冷后的不銹鋼勺將顆粒鏟下，倒入下面的網(wǎng)面上。7、將紗布袋浸入液氮中，將一塑料漏斗口插入紗布袋中。取出液氮中的紗網(wǎng)將顆粒凍精倒入漏斗中顆粒凍精制制作流程8、取樣解凍檢查精子活力9、將紗布袋口抽緊，在袋口的線上作好標(biāo)記。10、將提漏從液氮罐中取出，放入液氮槽中，將紗布袋放入提漏中1