第十九章色譜法導論

第十九章色譜法導論任課教師:陳磊中藥分析教研室CHROMATOGROPHY第1頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三第十九章色譜法導論fundamentalofchromatographanalysis第一節(jié)概述generalizationofchromatographanalysis

色譜法chromatograph是一種物理或物理化學分離分析方法，特別適宜于分離多組分的試樣，是各種分離技術中效率很高和應用最廣的一種方法。它是利用各物質(zhì)在兩相中具有不同的分配系數(shù)，當兩相作相對運動時，這些物質(zhì)在兩相中進行多次反復的分配來達到分離的目的。色譜的起源和發(fā)展:(1)起源:俄國植物學家茨維特（Tswett)在1906年使用的色譜原型裝置如右圖所示。色譜法的產(chǎn)生固定相、流動相、色譜柱第2頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜歷史與發(fā)展第3頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜歷史與發(fā)展(2)色譜的發(fā)展40年代50年代薄層色譜1941年Martin和Synge提出色譜塔板理論1952年Martin和James發(fā)明了氣相色譜20世紀60年代末70年代初隨著氣相色譜的發(fā)展,高效液相色譜得到了飛快發(fā)展(3)色譜的發(fā)展趨勢色譜—光譜聯(lián)用技術GC-MS、GC-FTIR、LC-MS、LC-NMR大大提高了分離分析能力色譜—色譜聯(lián)用技術GC-HPLC、GLC-GSC、HPLC-TLC模式識別與人工神經(jīng)網(wǎng)絡色譜專家系統(tǒng)：知識庫、推理機、動態(tài)數(shù)據(jù)庫等紙色譜第4頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三儀器的發(fā)展五十年代第一臺色譜儀問世第5頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三六十年代就有數(shù)臺5公斤重的色譜儀隨阿波羅飛船同登月球，自動取樣分析，1970年更有一臺100克重的色譜儀飛上了火星。1967年時全世界共有色譜儀7萬臺1972年就發(fā)展到20萬臺現(xiàn)在我國的儀器就有數(shù)百萬臺過去龐大的體積，到現(xiàn)在的越來越小巧過去只有進口的，現(xiàn)在國產(chǎn)的也很好,比如說大連依利特公司第6頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜分析技術有廣泛的應用領域色譜分離是目前應用最廣泛的分離方法。已廣泛地用于石油化工、有機合成、生理生化、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測、刑事偵查、生產(chǎn)在線控制，乃至空間探索等許多領域，以解決各種分離分析課題。石油化工石油產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控油田開發(fā)（吸附絲技術）第7頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三醫(yī)藥衛(wèi)生提純凈化—如手性色譜分離有效成分藥物中間體的處理食品衛(wèi)生監(jiān)測（瘦肉精、農(nóng)殘、抗生素）化學研究樣品提純—如合成產(chǎn)品的檢驗等物質(zhì)性質(zhì)與其配比的相關性——色譜法和化學計量學方法結合第8頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三生命科學研究DNA測序—用CE、HPLC技術、生物工程下游技術—細胞的培養(yǎng)、分離、純化和分析檢測

第9頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三教材特點及參考書教材:新世紀全國高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材《分析化學》下冊(供中藥類專業(yè))黃世德梁生旺主編參考書:(1)專著:付若農(nóng)主編的《色譜技術叢書》化學工業(yè)出版社，涵蓋所有色譜技術：色譜分析概論離子色譜方法及應用色譜定性和定量毛細管電泳技術及應用氣相色譜檢測方法色譜分析樣品處理第10頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三液相色譜檢測方法色譜聯(lián)用技術氣相色譜方法及應用色譜柱技術高效液相色譜方法及應用色譜儀器維護與故障排除平面色譜方法及應用等等(2)雜志色譜科學雜志（J，ChromatographySci）1963年創(chuàng)刊,原名氣相色譜雜志（J,GasChromat）,1969年改為現(xiàn)名,主要發(fā)表氣相、液相原始論文和總結性文章（英文）和色譜標準圖譜。色譜雜志（J，Chromatograpy）1958年創(chuàng)刊,系多科性（包括氣相、液相色譜，薄層色譜，紙色譜，離子交換色譜等）國際雜志，刊登各種原始論文及講座性文章，并附有定性、定量數(shù)據(jù)及色譜文摘，文章以英文、法文或德文發(fā)表，從1993年起分A、B卷發(fā)行，每年還有Review專輯。第11頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三《色譜》，1984年創(chuàng)刊，刊登各種原始論文和綜述，為雙月刊?？巧V文章和評論性文章的還有各種分析化學相關的雜志，如各國的“分析化學”（中、美、英、日、德等），中文的《理化檢驗》、《環(huán)境化學》等專業(yè)文獻上也有相當比例的色譜論文發(fā)表。（3）手冊手冊是最方便地查閱相關文獻的工具，盡管所列數(shù)據(jù)并非最新的。如1999年3月起再版的《分析化學手冊》第二版，共10個分冊：1-基礎知識與安全知識2-化學分析3-光譜分析4-電分析化學5-氣相色譜分析6-液相色譜分析7-核磁共振波譜分析8-熱分析9-質(zhì)譜分析10-化學計量學第12頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（4）學術會議文集每年都有不同組織者組織召開的國際國內(nèi)的各種分析界的學術報告會，會議的文集也是一種很好的參考文獻，值得收集閱讀。全國色譜學術報告會和浙江省色譜學術報告會均每兩年舉辦一次，全國會議每次能征集到論文500篇以上，省會議也能征集到60篇以上。（5）色譜網(wǎng)站我們的工作與生活已經(jīng)離不開網(wǎng)絡,已有很多國際網(wǎng)站，包括美國化學會的網(wǎng)站，可搜索后查取相關文獻。關于色譜方面的網(wǎng)站有：

第13頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜法的原理(兩個相和一個裝置)（1）兩個相：固定相和流動相試樣混合物的分離過程也就是試樣中各組分在色譜分離柱中的兩相間不斷進行著的分配過程。當流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，其與固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結構上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經(jīng)過反復多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序從色譜柱中流出。

色譜柱第14頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三其中的一相固定不動，稱為固定相(stationaryphase)

；另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動相(mobilephase)

。（2）一個裝置：柱子裝有固定相的柱子稱為色譜柱(chromatographiccolumn)GCGC填充柱HPLC填充柱C保護柱填料第15頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜法的分類（一）按兩相的狀態(tài)不同分類：按流動相的狀態(tài)分為：(1)氣相色譜：流動相為氣體（稱為載氣）；(2)液相色譜：流動相為液體；(3)超臨界色譜：流動相為超臨界流體（常用CO2）；按固定相的不同：(1)氣相色譜分為：氣固色譜（GSC）和氣液色譜（GLC）；(2)液相色譜分為：液固色譜（LSC）和液液色譜（LLC）；第16頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（二）按分離機理分類：1．吸附色譜法(absorptionchromatography)2．分配色譜法(partitionchromatography)3.離子交換色譜法(ionexchangechromatography)4.尺寸排阻色譜法(sizeexclusionchromatography)除以上四種外，還有親和色譜法(affinitychromatography)，是利用不同組分與固定相(固定化分子)的高專屬性親和力進行分離的方法。

（三）按極性分類1.正相色譜法2.反相色譜法第17頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（四）按操作形式分類：1．柱色譜法（columnchromatography）：填充柱色譜和毛細管柱色譜；2．平面色譜法((planechromatography)：（1）紙色譜法(paperchromatography)（2）薄層色譜法(thinlayerchromatography)（3）薄膜色譜法(thinfilmchromatography)

第18頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜法的分類氣—液色譜法（GLC）填充柱色譜法氣—固色譜法（GSC）氣相色譜法涂壁毛細管柱（WCOT）（GC）毛細管柱色譜法多孔層毛細管柱（PLOT）普通柱色譜法液-液色譜法（LLC）柱色譜法液-固色譜法（LSC）高效液相色譜法離子交換色譜法(IEC)液相色譜法尺寸排阻色譜法(SEC)（LC）紙色譜法（PC）平面色譜薄膜色譜法(TFC)

薄層色譜法（TLC）超臨界流體色譜法（SFC）第19頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜法的特點（1）分離效率高復雜混合物，有機同系物、異構體。手性異構體。（2）靈敏度高可以檢測出μg.g-1(10-6)級甚至ng.g-1(10-9)級的物質(zhì)量。（3）分析速度快一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個試樣的分析。（4）應用范圍廣

氣相色譜：沸點低于400℃的各種有機或無機試樣的分析。

液相色譜：高沸點、熱不穩(wěn)定、生物試樣的分離分析。

第20頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜法不足之處：因為定性需要已知物質(zhì)，被分離組分的未知物質(zhì)定性較為困難，需要借助MS，NMR，IR等手段。A：樣品；B：對照品1；C：對照品2第21頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜分離過程色譜分離過程是在色譜柱內(nèi)完成的。以氣相色譜為例。氣固(液固)色譜和氣液(液液)色譜，兩者的分離機理不同(一)氣固(液固)色譜的固定相:多孔性的固體吸附劑顆粒。固體吸附劑對試樣中各組分的吸附能力的不同。氣固色譜的分離機理:吸附與脫附的不斷重復過程；(二)氣液(液液)色譜的固定相:由擔體和固定液所組成。固定液對試樣中各組分的溶解能力的不同。氣液色譜的分離機理：溶解與揮發(fā)的反復多次分配過程。第22頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三例:氣相色譜分離過程當試樣由載氣攜帶進入色譜柱與固定相接觸時，被固定相溶解或吸附;隨著載氣的不斷通入，被溶解或吸附的組分又從固定相中揮發(fā)或脫附;揮發(fā)或脫附下的組分隨著載氣向前移動時又再次被固定相溶解或吸附;隨著載氣的流動，溶解、揮發(fā)，或吸附、脫附的過程反復地進行；較難被吸附（溶解）的組分隨載氣較快地向前移動，較易被吸附（溶解）的組分則隨載氣較慢地移動。經(jīng)過一定時間后，各組分就彼此分離。第23頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三基本過程：相平衡-相轉(zhuǎn)移①平衡觀點儀器：色譜柱+檢測器②動力學觀點各組分分配系數(shù)不等，產(chǎn)生差速遷移第二節(jié)色譜流出曲線與術語第24頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三第二節(jié)色譜流出曲線與術語一.色譜流出曲線圖色譜流出曲線：由檢測器輸出的電信號強度對時間作圖，所得曲線。色譜峰：當某組分從色譜柱流出時，檢測器對該組分的響應信號隨時間變化所形成的峰形曲線稱為該組分的色譜峰。第25頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三二.基線(Baseline)

無試樣通過檢測器時，檢測到的信號即為基線。三.峰高(h)

色譜峰頂?shù)交€的垂直距離,上圖BA段。色譜流出曲線和色譜峰基線（a）;峰高（h）信號進樣空氣峰色譜峰ha第26頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三四.色譜峰區(qū)域?qū)挾?/p>

(w)(衡量柱效)

是色譜流出曲線的重要參數(shù)之一，用于衡量柱效率及反映色譜操作條件的動力學因素。用來衡量色譜峰寬度的參數(shù)，有三種表示方法：（1）標準偏差()：即0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半，上圖EF段；（2）半峰寬(W1/2)：色譜峰高一半處的寬度W1/2=2.354，上圖GH段；（3）峰底寬(W)：即色譜峰兩側拐點上的切線在基線上截距間的距離。W=4，上圖IJ段。)W1/21/2h第27頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三

五、拖尾因子（tailingfactor）用于衡量色譜峰的對稱性。不正常色譜峰：拖尾峰、前延峰T=0.95-1.05，對稱峰T<0.95，前延峰T>1.05，拖尾峰第28頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三六.保留值（一）保留時間

1.死時間tM：不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)進入色譜柱時，從進樣到出現(xiàn)峰極大值所需的時間稱為死時間，它正比于色譜柱的空隙體積，如下圖。

信號進樣tM第29頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三死時間的測定很難：

無合適樣品（完全不保留并有足夠強的紫外信號）一般測定方法為（紫外檢測器）：1.正向-四氟乙烯;反向-苯甲酸、硝酸等。2.比流動相少一個C的同系物3.不具備條件時可用下式計算：

第30頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三2.保留時間tR組分從進樣到在柱后出現(xiàn)峰極大點所需的時間，稱為保留時間，如圖19-1中O′B。3.調(diào)整保留時間tR′

tR′=tR－tM

（二）保留體積1.死體積VM

VM=tM×

FC

2.保留體積VR

VR=tR×

FC

3.調(diào)整保留體積VR′

VR′=VR－VM=tR′×

FC

第31頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（三）相對保留值ri，s

r2，1=t′R2

/t′R1=V′R2/V′R1

相對保留值是衡量分離情況的重要參數(shù)，大多數(shù)手冊上可查到。因其只與色譜柱種類及柱溫有關，故也是重要的定性指標。七.分配系數(shù)和容量因子

（1）分配系數(shù)(K)：在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動相之間分配達平衡時的濃度之比值

第32頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（2）容量因子（k）

在一定溫度和壓力下，兩相平衡時，組分在兩相中的質(zhì)量比。

k

第33頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三使A、B兩組分完全分離的前提：第一，兩組分的分配系數(shù)必須有差異；第二，足夠長的色譜柱。(3)相平衡常數(shù)與保留時間的關系第34頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三八.分離度（resolution,反映柱效）R≤1，兩峰有部分重疊R=1.5，分離程度可達99.7%R=2，完全分離《中國藥典》規(guī)定：R>1.5，相鄰兩組分分離第35頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三九.等溫線分類：直線型凸型凹型溶液濃度影響等溫線形狀CsCm第36頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三例：用一根固定相的體積為0.148mL，流動相的體積為1.26mL的色譜柱分離A,B兩個組分，它們的保留時間分別為14.4min，15.4min，不被保留組分的保留時間為4.2min，試計算：

（1）各組分的容量因子

（2）各組分的分配系數(shù)

（3）AB兩組分的選擇因子rB,A解：（1）kA=(14.4min-4.2min)/4.2min=2.43

kB=(15.4min-4.2min)/4.2min=2.67K=kβ=kVm/VsKA=kAVm/Vs=2.43×1.26mL/0.148mL=20.7KB=kBVm/Vs=2.67×1.26mL/0.148mL=22.7(3)rB,A=KB/KA=22.7/20.7=1.10第37頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜流出曲線的意義由色譜流出曲線可以實現(xiàn)以下目的：（1）根據(jù)色譜峰的數(shù)目，可以判斷試樣中所含組分的最少個數(shù)。（2）根據(jù)色譜峰的保留值進行定性分析。（3）依據(jù)色譜峰的面積或峰高進行定量分析。（4）依據(jù)色譜峰的保留值以及峰寬評價色譜柱的分離效能。第38頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三第三節(jié)色譜法基本理論色譜理論需要解決的問題：色譜分離過程的熱力學和動力學問題。影響分離及柱效的因素與提高柱效的途徑，柱效與分離度的評價指標及其關系。組分保留時間為何不同？色譜峰為何變寬？組分保留時間：色譜過程的熱力學因素控制；（組分和固定相的結構和性質(zhì),如分配系數(shù)）色譜峰變寬：色譜過程的動力學因素控制；（兩相中的運動阻力，擴散）兩種色譜理論：塔板理論和速率理論第39頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（一）塔板理論-柱分離效能指標1.塔板理論（platetheory）

半經(jīng)驗理論：將色譜分離過程比擬作蒸餾過程，將連續(xù)的色譜分離過程分割成多次的平衡過程的重復類似于蒸餾塔塔板上的平衡過程）；在每一個塔板上，被分離組分達到一次分配平衡。塔板理論的假設：(1)在每一個平衡過程間隔內(nèi)，平衡可以迅速達到；這一小段間隔的柱長稱為理論塔板高度。(2)將載氣看作成脈動（間歇）過程；(3)試樣沿色譜柱方向的擴散可忽略；(4)

每次分配的分配系數(shù)相同。第40頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜柱長：L，虛擬的塔板間距離（理論塔板高度）：H，色譜柱的理論塔板數(shù)：n，則三者的關系為：

n=L/H理論塔板數(shù)與色譜參數(shù)之間的關系為：單位柱長的塔板數(shù)越多，表明柱效越高。用不同物質(zhì)計算可得到不同的理論塔板數(shù)。保留時間包含死時間，在死時間內(nèi)不參與分配!第41頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三2.有效塔板數(shù)和有效塔板高度組分在t0時間內(nèi)不參與柱內(nèi)分配。需引入有效塔板數(shù)和有效塔板高度：第42頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三示例例：用一根柱長為1m的色譜柱分離含有A，B，C，D四個組分的混合物，它們的保留時間tR分別為6.4min,14.4min,15.4min,20.7min,其峰底寬Wb分別為0.45min,1.07min,1.16min,1.45min。

試計算：各譜峰的理論塔板數(shù)。解：第43頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三3.塔板理論的特點和不足(1)當色譜柱長度一定時，塔板數(shù)n

越大(塔板高度H越小)，被測組分在柱內(nèi)被分配的次數(shù)越多，柱效能則越高，即使分配系數(shù)只有微小的差別，仍可獲得好的分離效果。所得色譜峰越窄。(2)不同物質(zhì)在同一色譜柱上的分配系數(shù)不同，用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為衡量柱效能的指標時，應指明測定物質(zhì)。(3)柱效不能表示被分離組分的實際分離效果，當兩組分的分配系數(shù)K相同時，無論該色譜柱的塔板數(shù)多大，都無法分離。(4)塔板理論無法解釋同一色譜柱在不同的載氣流速下柱效不同的實驗結果，也無法指出影響柱效（如塔板高度H）的因素及提高柱效的途徑。第44頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（二）速率理論-影響柱效的因素

1956年荷蘭學者范弟姆特（VanDeemter)等提出了色譜過程的動力學理論，他們吸收了塔板理論的概念，并把影響塔板高度的動力學因素結合進去，導出了塔板高度H與載氣線速度u的關系。1.速率方程（也稱范.弟姆特方程式）

H=A+B/u+C·u

H：理論塔板高度;u：載氣的線速度(cm/s)

減小A、B、C三項可提高柱效；存在著最佳流速；

A、B、C三項常數(shù)各與哪些因素有關？第45頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三A─渦流擴散項第46頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三A─渦流擴散項

A=2λdp

dp：固定相的平均顆粒直徑λ：固定相的填充不均勻因子固定相顆粒越小dp↓，填充的越均勻，A↓，H↓，柱效n↑。表現(xiàn)在渦流擴散所引起的色譜峰變寬現(xiàn)象減輕，色譜峰較窄。對于空心毛細管柱，A項為零。第47頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三B/u—分子擴散項第48頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三B/u—分子擴散項

B=2γDgγ：彎曲因子，空心毛細管,γ=1；填充柱色譜,γ

<1。Dg：試樣組分分子在氣相中的擴散系數(shù)（cm2·s-1）(1)存在著濃度差，產(chǎn)生縱向擴散;(2)擴散導致色譜峰變寬，H↑(n↓)，分離變差;(3)分子擴散項與流速有關，流速↓，滯留時間↑，擴散↑;(4)擴散系數(shù)Dg與組分及載氣的性質(zhì)有關：

Dg

∝(M載氣)-1/2；M載氣↑，B值↓。Dg∝（M組分）-1(5)擴散系數(shù)Dg隨柱溫升高而增加。第49頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三C·u—傳質(zhì)阻力項第50頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三C·u—傳質(zhì)阻力項

傳質(zhì)阻力系數(shù)包括氣相傳質(zhì)阻力Cg和液相傳質(zhì)阻力CL系數(shù)即：C=（Cg+CL）k為容量因子；Dg、DL為擴散系數(shù)。減小擔體粒度，選擇小分子量的氣體作載氣，可降低傳質(zhì)阻力。第51頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三2.載氣流速與柱效——最佳流速載氣流速高時：

傳質(zhì)阻力項是影響柱效的主要因素，流速，柱效。載氣流速低時：

分子擴散項成為影響柱效的主要因素，流速,柱效。H-u曲線與最佳流速：

由于流速對這兩項完全相反的作用，流速對柱效的總影響使得存在著一個最佳流速值，即速率方程式中塔板高度對流速的一階導數(shù)有零值點。以塔板高度H對應載氣流速u作圖，曲線最低點的流速即為最佳流速。第52頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三最佳流速uopt與最小理論塔板高度Hmin第53頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三3.速率理論的要點(1)組分分子在柱內(nèi)運行的多路徑與渦流擴散、濃度梯度所造成的分子擴散及傳質(zhì)阻力使氣液兩相間的分配平衡不能瞬間達到等因素是造成色譜峰擴展，柱效下降的主要原因。(2)通過選擇適當?shù)墓潭ㄏ嗔６?、載氣種類、液膜厚度及載氣流速可提高柱效。第54頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三3.速率理論的要點(3)速率理論為色譜分離和操作條件選擇提供了理論指導。闡明了流速和柱溫對柱效及分離的影響。(4)各種因素相互制約，如載氣流速增大，分子擴散項的影響減小，使柱效提高，但同時傳質(zhì)阻力項的影響增大，又使柱效下降；柱溫升高，有利于傳質(zhì)，但又加劇了分子擴散的影響，選擇最佳條件，才能使柱效達到最高。第55頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（三）分離度

塔板理論和速率理論都難以描述難分離物質(zhì)對的實際分離程度。即柱效為多大時，相鄰兩組份能夠被完全分離。難分離物質(zhì)對的分離度大小受色譜過程中兩種因素的綜合影響：保留值之差──色譜過程的熱力學因素；

區(qū)域?qū)挾醛ぉどV過程的動力學因素。

第56頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三色譜分離中的四種情況的討論：①柱效較高，△K(分配系數(shù))較大,完全分離；②△K不是很大，柱效較高，峰較窄，基本上完全分離；③柱效較低，△K較大,但分離的不好；④△K小，柱效低，分離效果更差。第57頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三分離度的表達式：定義為相鄰兩組分色譜峰保留值之差與兩個組分色譜峰峰底寬度總和一半的比值。R=0.8：兩峰的分離程度可達89%，有部分重疊；R=1：分離程度98%；R=1.5：達99.7%（相鄰兩峰完全分離的標準）。第58頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三（四）色譜分離方程式1.選擇因子：第59頁，共68頁，2023年，2月20日，星期三令Wb(2)=Wb(1)=Wb（相鄰