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超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定稻蝦中多類獸藥殘留

摘要:建立稻蝦中11種獸藥(氯霉素類、喹諾酮類、四環(huán)素類)同時測定的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。樣品以0.2%甲酸乙腈溶液提取,經(jīng)OasisPRiMEHLB柱凈化后用WatersHSST3柱分離,在ESI+/-多反應(yīng)監(jiān)測模式下采集,外標(biāo)法定量。11種獸藥在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)r>0.996,方法定量限低于5μg/kg,在5、10、20μg/kg加標(biāo)水平下回收率為72.5~114.5%,RSD為1.9~7.0%。該方法簡便、靈敏,適用于稻蝦中多類獸藥的快速測定和篩查。關(guān)鍵詞:超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;獸藥;稻蝦引言稻蝦綜合種養(yǎng)是為適應(yīng)新時期農(nóng)業(yè)農(nóng)村發(fā)展要求、穩(wěn)定水稻生產(chǎn)、促進漁業(yè)增效,在原稻田種植的基礎(chǔ)上發(fā)展的綜合種養(yǎng)技術(shù)。在濟寧市魚臺周邊縣區(qū)得到大力推廣。在稻蝦種養(yǎng)過程中由于疾病防控和飼料帶入的獸藥,對產(chǎn)品質(zhì)量造成潛在風(fēng)險,已受到廣泛關(guān)注[1]。當(dāng)前獸殘檢測標(biāo)準(zhǔn)中常用的固相萃取等技術(shù)存在前處理過程繁瑣、試驗周期時間長[2]等問題,檢測效率低;而近年來興起的多殘留通過式凈化前處理技術(shù)在獸藥殘留分析中獲得了良好的應(yīng)用。本文針對龍蝦中食品安全風(fēng)險較高的氯霉素類、喹諾酮類、四環(huán)素類殘留,采用同步通過式凈化技術(shù),建立可靠的稻蝦中高風(fēng)險藥物同時快速篩查的方法,為稻蝦產(chǎn)品藥物殘留風(fēng)險監(jiān)測、質(zhì)量安全監(jiān)管及隱患排查提供技術(shù)支撐。1實驗部分1.1儀器ExionLC-triplequad3500液質(zhì)聯(lián)用儀(美國SCIEX);高速冷凍離心機(湖南湘儀);全自動平行濃縮儀(美國Labtech);超純水儀(美國Millipore);XSE104天平(梅特勒-托利多)。1.2試劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):土霉素/金霉素/四環(huán)素/強力霉素、喹諾酮類、氯霉素/甲砜霉素/氟苯尼考(FirstStandard100μg/mL);試劑:乙腈(色譜純,F(xiàn)isher);甲酸(分析純,阿拉?。?;WatersOasisPRiMEHLB柱(3mL/60mg)。試驗樣品來源于我市50個養(yǎng)殖戶。1.3基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液制備采用“1.5”項下方法處理陰性樣品獲取基質(zhì)空白溶液,再采用上述標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(2μg/L~250μg/L(喹諾酮及四環(huán)素類)、0.5μg/L~50μg/L(氯霉素類))。1.4色譜和質(zhì)譜條件WatersHSST3柱(1.8μm,100mm×2.1mm);流動相:0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脫:0~1min90%A、1~6min90%~5%A、6-8min5%A~90%A;流速:0.3mL/min,進樣量:5μL.掃描模式:MRM,ESI+/-,電噴霧電壓:5500V(+)/4500V(-);離子源溫度:550℃。去簇電壓(DP)和碰撞氣能量(CE)見表1。1.5實驗方法將樣品去頭、殼,取可食部分打碎成肉泥。稱取5g樣品于50mL離心管中,加10.0mL含0.2%甲酸的乙腈-水(80:20)溶液,渦旋10min,8000r/min離心8min。取上清液過凈化柱,收集濾液5.0mL,N2下吹干,加1.0mL初始流動相復(fù)溶,過0.22μm濾膜,待測。2結(jié)果與分析2.1前處理方法優(yōu)化研究表明乙腈對喹諾酮及四環(huán)素類藥物共提取效果良好,且甲酸能夠提升其對藥物的提取能力[4],分析發(fā)現(xiàn)乙腈中添加適量水可有效改善基質(zhì)的蛋白沉淀效應(yīng),最終確定了80%乙腈-水提取效果較佳。在提取液中加入0.1%、0.2%、0.5%甲酸,結(jié)果表明0.2%甲酸對多數(shù)組分具有最優(yōu)回收率。2.2質(zhì)譜條件優(yōu)化對質(zhì)譜分析中對各物質(zhì)的DP和CE進行優(yōu)化,結(jié)合分析靈敏度和特征離子專屬性確定最優(yōu)參數(shù)(見表1)。表1

監(jiān)測離子對優(yōu)化參數(shù)母離子,m/z子離子,m/zDP/VCE/eV恩諾沙星360.0316.0a9027245.19038氧氟沙星362.1318.0a9527261.09539沙拉沙星386.1299.1a11540342.011527環(huán)丙沙星332.1230.9a9052314.09028氯霉素320.9151.9a-72-25256.9-72-26甲砜霉素353.8184.9a-80-29289.9-80-18氟苯尼考355.7335.8a-72-16184.9-72-25土霉素461.0426.1a7926443.27921四環(huán)素445.1410.0a9130427.19123金霉素479.1441.1a8231462.18221強力霉素445.2428.1a9125410.19126a定量離子2.3方法學(xué)驗證水產(chǎn)品中獸藥檢測易受到基質(zhì)效應(yīng)的干擾和影響[5],因此本法采用陰性基質(zhì)配制工作曲線。各組分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r≥0.996。以10倍信噪比確定各物質(zhì)定量限(0.29~4.5μg/kg),均低于同類國家標(biāo)準(zhǔn)方法。在5、10、20μg/kg水平下回收率為72.5~114.5%,RSD為1.9~7.0%,表明方法精密度和準(zhǔn)確度良好(見表2)。表211種獸藥線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、定量限、回收率及精密度線性范圍,μg/L定量限,μg/kg相關(guān)系數(shù)r加標(biāo)回收率(RSD),%5μg/kg10μg/kg20μg/kg土霉素2~2503.10.99785.7(3.9)83.4(2.1)80.5(1.9)四環(huán)素4.00.99979.0(4.2)72.5(7.0)86.1(3.6)金霉素3.80.99895.6(5.1)101.7(4.0)106.1(3.2)強力霉素4.30.99690.1(6.0)106.6(4.1)107.1(2.3)氧氟沙星2.10.99990.3(2.6)92.6(2.5)103.1(2.2)環(huán)丙沙星3.50.99891.5(6.6)98.6(4.3)101.9(5.0)沙拉沙星3.00.996113.5(4.9)109.3(2.6)114.5(6.5)恩諾沙星3.40.99786.7(5.1)82.6(3.4)81.5(4.5)氯霉素0.5~500.290.99781.3(6.1)84.0(5.5)86.7(6.2)甲砜霉素0.450.99676.8(4.5)78.9(4.9)82.5(3.7)氟苯尼考0.470.999475.5(6.5)85.0(5.2)79.2(5.0)2.5樣品測定本研究抽取了我市養(yǎng)殖戶的50個龍蝦樣本驗證本法的可靠性。其中1個樣本檢出恩諾沙星,含量為5.11μg/kg;采用國標(biāo)方法進行對比測定[2],結(jié)果為5.08μg/kg,一致性較高。3結(jié)論本法采用0.2%甲酸乙腈提取、OasisPRiMEHLB通過式凈化技術(shù)去除干擾物,能夠有效提升對稻蝦中多種獸藥的提取能力、保證分析準(zhǔn)確性并大幅提高分析效率。方法驗證結(jié)果表明本法具有良好的線性關(guān)系、較低的檢出限和定量限,及滿意的精密度和準(zhǔn)確度。表明本方法具有快速、簡單、靈敏度高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好、基質(zhì)適用性強等特點,適用于稻蝦中多類獸藥的快速測定和篩查。Reference[1]沈可伊,鄒曉霜,王軍.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定蝦肉中4種獸藥殘留及其熱穩(wěn)定性分析[J/OL].食品與發(fā)酵工業(yè).[2]GB31658.17-2021動物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[3]陳興連,林濤,劉興勇,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定魚和蝦中多類禁、限用獸藥殘留[J].色譜,2

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