2023年電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告

化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告之電泳

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模航Y(jié)識(shí)膠體粒子是帶電粒子

實(shí)驗(yàn)原理：帶電顆粒在電場(chǎng)作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)

實(shí)驗(yàn)器材及藥品：鐵架臺(tái)、U形管、石墨碳棒、粗銅絲、滴管、導(dǎo)線、直流電源、fe

(oh)3膠體、定量nacl溶液

實(shí)驗(yàn)操作：1、將燒杯中的蒸儲(chǔ)水加熱至沸騰，向沸水中逐滴滴加入6滴fec13飽和溶

液。繼續(xù)煮沸至溶液呈紅褐色，停止加熱。觀測(cè)制得的fe(oh)3膠體

2、取一支u形管，注入fe(oh)3膠體到距離管口5.0cm處，固定在鐵架臺(tái)上，用滴管

給u形管的兩端沿壁慢慢注入一定濃度的nac1溶液，使u形管兩端明顯分層，形成清楚的

液面

3、給u形管兩端插入碳棒電極，并分別連接電源的正負(fù)極，觀測(cè)現(xiàn)象并記錄時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象：u形管和陰極連接的一端液面上升，出現(xiàn)明顯的液面差，陰極一端顏色加深，陽(yáng)

極一端顏色變淺

實(shí)驗(yàn)分析：在外加直流電源的作用下，fe(oh)3膠體微粒在分散介質(zhì)里向陰極作定向

移動(dòng)，注意碳棒不要和膠體接觸，，否則膠體放電或電解水，nacl溶液的濃度不要太大最佳是

51毫摩每升。

篇二：電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)十二電泳

一、目的規(guī)定

1)掌握電泳法測(cè)<電勢(shì)的原理和技術(shù)；

2)從實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象中加深對(duì)膠體的電學(xué)性質(zhì)的理解，即在外電場(chǎng)作用下，膠粒和介質(zhì)分別向帶

相反電荷的電極移動(dòng)，就產(chǎn)生了電泳和電滲的電動(dòng)現(xiàn)象(因電而動(dòng))。

二、基本原理

1.電泳

由于膠粒帶電，而溶膠是電中性的，則介質(zhì)帶與膠粒相反的電荷。在外電場(chǎng)作用下，膠粒

和介質(zhì)分別向帶相反電荷的電極移動(dòng)，就產(chǎn)生了電泳和電滲的電動(dòng)現(xiàn)象。影響電泳的因素有：

帶電粒子的大小、形狀；粒子表面電荷的數(shù)目；介質(zhì)中電解質(zhì)的種類、離子強(qiáng)度，ph值和粘

度；電泳的溫度和外加電壓等。從電泳現(xiàn)象可以獲得膠粒或大分子的結(jié)構(gòu)、大小和形狀等有關(guān)

信息。

2.三種電勢(shì)

,固體表面相對(duì)溶液的電勢(shì)，？0=f（固體表面電荷密？0：熱力學(xué)電勢(shì)（或平衡電勢(shì)）

度，電勢(shì)決定離子濃度）。

??：斯特恩電勢(shì)。

離子是有一定大小的，并且離子與質(zhì)點(diǎn)表面除了靜電作用外，尚有范德華吸引力。所以在

靠近表面1-2個(gè)分子厚的區(qū)域內(nèi)，反離子由于受到強(qiáng)烈的吸引，會(huì)牢固的結(jié)合在表面，形成一

個(gè)緊密的吸附層，稱為固定吸附層或斯特恩層；在斯特恩層中，除反離子外，尚有一些溶劑分

子同時(shí)被吸附。反離子的電性中心所形成的假想面，稱為斯特恩面。在斯特恩面內(nèi)，電勢(shì)呈直

線下降，由表面的？0直線下降到斯特恩面？？。？？稱為斯特恩電勢(shì)。

?：電動(dòng)電勢(shì)。

當(dāng)固、液兩相發(fā)生相對(duì)移動(dòng)時(shí)，緊密層中吸附在固體表面的反離子和溶劑分子與質(zhì)點(diǎn)作

為一個(gè)整體一起運(yùn)動(dòng)，其滑動(dòng)面在斯特恩面稍靠外一些?；瑒?dòng)面與溶液本體之間的電勢(shì)差，稱

為？電勢(shì)。？電勢(shì)與？？電勢(shì)在數(shù)值上相差甚小，但卻具有不同的含義。應(yīng)當(dāng)指出，只有在固、

液兩相發(fā)生相對(duì)移動(dòng)時(shí)，才干呈現(xiàn)出？電勢(shì)。

?電勢(shì)的大小，反映了膠粒帶電的限度。？電勢(shì)越高，表白膠粒帶電越多，其滑動(dòng)面與溶

液本體之間的電勢(shì)差越大，擴(kuò)散層也越厚。當(dāng)溶液中電解質(zhì)濃度增長(zhǎng)時(shí)，介質(zhì)中反離子的濃度

加大，將壓縮擴(kuò)散層使其變薄，把更多的反離子擠進(jìn)滑動(dòng)面以內(nèi)，使？電勢(shì)在數(shù)值上變小當(dāng)電

解質(zhì)濃度足夠大時(shí)，可使？電勢(shì)為零。此時(shí)相應(yīng)的狀態(tài)，稱為等電態(tài)。處在等電態(tài)的膠體質(zhì)點(diǎn)

不帶電，因此不會(huì)發(fā)生電動(dòng)現(xiàn)象，電泳、電滲速度也必然為零，這時(shí)的

溶膠非常容易聚沉。

3.電泳公式

當(dāng)帶電膠粒在外電場(chǎng)作用下遷移時(shí)，膠粒受到的靜電力fl為：

fl?qe（1）

其中q為膠粒的電荷，e為電場(chǎng)強(qiáng)度（或稱為電位梯度）

本次實(shí)驗(yàn)研究的fe（。h）3為棒形膠粒。棒形膠粒在介質(zhì)中運(yùn)動(dòng)受到的阻力f2按

stokes定律為:

f2?4??r?(2)

其中r為膠粒的半徑，？為電泳速度，？為介質(zhì)的粘度，當(dāng)膠粒運(yùn)動(dòng)速度即電泳速度達(dá)成

穩(wěn)定期，fl=f2,結(jié)合(1)、(2)式得到：

??qe(3)4??r

根據(jù)靜電學(xué)原理可知

??q(4)?r

其中r為膠粒的半徑，？為介質(zhì)的界電常數(shù)，

所以有

????e(5)4??

4???(6)?e??

由該式可知，若已知？、？，可通過(guò)測(cè)定？和e算出？電勢(shì)。該式只適合于c-g-s單位

制，且得出？電勢(shì)的單位為靜電伏特。若各物理量都采用si單位，r的單位為m；?的單位為

m-s-1;?的單位為pa-s;e的單位為v此時(shí)公式為：

??

三、儀器與試劑4????9?109伏特(7)?e

界面移動(dòng)電泳儀；213型伯電極兩個(gè)；高壓數(shù)顯穩(wěn)壓電源；滴管2根；燒杯(250m

1)；

-1玻璃棒一根；fee13溶液(10之)；kc1溶液(0.02mo1-1)；

四、實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)

1.儀器裝置圖如下。

圖1.實(shí)驗(yàn)裝置圖

2.溶膠的制備：

在不斷攪拌的條件下、將fecl3稀溶液滴入沸騰的水中水解，即可生成棕紅色、透明f

e(oh)3溶膠：

fecl3+3h2

ofe(oh)3i+3hcl

部分氫氧化鐵跟鹽酸作用

fe(oh)3+hcl=feocl+2h2o

feocl=feo++c1-

氫氧化鐵吸附溶液中帶正電荷的離子（feo+）,膠團(tuán)結(jié)構(gòu)為：

{[fe（oh）3]m?yfeo+,（y-z）cl-}z+?zc1-

分子團(tuán)選擇吸附離子緊密層擴(kuò)散層

膠粒帶正電荷，因此在電場(chǎng)作用下向陰極移動(dòng)，出現(xiàn)電泳現(xiàn)象。

3.測(cè)定電泳速度和電位梯度

打開(kāi)活塞，在電泳儀中裝上待測(cè)fe（。h）3溶膠至一定高度（便于觀測(cè)界面的移動(dòng)）。

用滴管將kcl溶液從電泳儀兩臂的玻璃管壁等量緩慢加入，出現(xiàn)清楚界面才可以，否則重新灌

裝，繼續(xù)加入kcl溶液至接近支管，注意不能擾動(dòng)界面，保持界面清楚并使兩臂界面等高。輕

輕地將Pt電極垂直插入kcl溶液，記下兩邊界面的高度位置。接通電源，調(diào)節(jié)電壓至1

80v左右，開(kāi)始記時(shí)，觀測(cè)液面的變化。

根據(jù)通電時(shí)間和界面下降的刻度計(jì)算電泳速度。

注意事項(xiàng)：

a:氫氧化鐵膠體的電泳速度跟氫氧化鐵膠粒的帶電量有關(guān)，膠粒帶電量越大，電泳速度

越大。滲析可以減少膠粒中的氯離子，增大膠粒的帶電量。

b:實(shí)驗(yàn)時(shí)，一旦通電，手就不能再觸及電極，拆卸裝置時(shí)也一定要先切斷電源。

c:耍使氯化鉀溶液浮在膠體的液面上，并跟膠體之間保持清楚的界而，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意使

膠體的密度比使氯化鉀溶液的密度大。這樣，使氯化鉀溶液加入后不會(huì)下沉而跟膠體混在一

起。為此，氯化鉀溶液的濃度不能太大。

五、數(shù)據(jù)記錄與解決

從直流電源讀得電壓u=v,用直尺測(cè)得兩電極間的距離1=m,計(jì)算e=u

/1=-1-lv，m;記錄界面下降高度m,通電時(shí)間s,計(jì)算？=

m?s

將e、？數(shù)據(jù)代入？？

據(jù)代入求出？。

m-1?（20℃水）=80.37f-4???,?為介質(zhì)的界電常數(shù)，？為介質(zhì)的粘度，初略地以

水的數(shù)？e

?（20。。水）=0.00]「2三篇三：氫氧化鐵膠體電動(dòng)電位的測(cè)定（電泳法）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

深圳大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

課程名稱：

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱：氫氧化鐵膠體電動(dòng)電位的測(cè)定(電泳法)

學(xué)院：化學(xué)與化工學(xué)院

專業(yè)：指導(dǎo)教師：

報(bào)告人：學(xué)號(hào)：班級(jí)：同組人：

實(shí)驗(yàn)時(shí)間：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交時(shí)間：

教務(wù)處制

氫氧化鐵膠體電動(dòng)電位的測(cè)定(電泳法)

一、目的規(guī)定

(1)掌握電泳法測(cè)定fe(oh)3溶膠電動(dòng)電勢(shì)的原理和方法。(2)通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀測(cè)并熟

悉膠體的電泳現(xiàn)象。

二、基本原理

在膠體溶液中，分散在介質(zhì)中的微粒由于自身的電離或表面吸附其他粒子而形成帶一定

電荷的膠粒，同時(shí)在膠粒附近的介質(zhì)中必然分布有與膠粒表面電性相反而電荷數(shù)量相同的反離

子，形成一個(gè)擴(kuò)散雙電層。

在外電場(chǎng)作用下，荷點(diǎn)的膠粒攜帶起周邊一定厚度的吸附層向帶相反電荷的電極運(yùn)動(dòng)，在

荷電膠粒吸附層的外界面與介質(zhì)之間相對(duì)運(yùn)動(dòng)的邊界處相對(duì)于均勻介質(zhì)內(nèi)部產(chǎn)生一電勢(shì)，為

C電勢(shì)。

它隨吸附層內(nèi)離子濃度，電荷性質(zhì)的變化而變化。它與膠體的穩(wěn)定性有關(guān)，〈絕對(duì)值越

大，表白膠粒電荷越多，膠粒間斥力越大,膠體越穩(wěn)定。

本實(shí)驗(yàn)用界面移動(dòng)法測(cè)該膠體的電勢(shì)。在膠體管中，以kcl為介質(zhì)，用fe(oh)3溶

膠通電后移動(dòng)，借助測(cè)高儀測(cè)量膠粒運(yùn)動(dòng)的距離，用秒表記錄時(shí)間，可算出運(yùn)動(dòng)速度。

當(dāng)帶電膠粒在外電場(chǎng)作用下遷移時(shí)，膠粒電荷為q,兩極間的的電位梯度為e,則膠粒受到

靜電力為f1=eq膠粒在介質(zhì)中受到的阻力為f2=knr|ru

若膠粒運(yùn)動(dòng)速率u恒定，則fl=f2qe=knr]ru

(1)根據(jù)靜電學(xué)原理<=q/er

(2)將(2)代入(1)得u=Cee/knri

(3)利用界面移動(dòng)法測(cè)量時(shí)，測(cè)出時(shí)間t時(shí)膠體運(yùn)動(dòng)的距離s,兩伯極間的電位差<p和電極

間的距離1,則有

e=<p/1,u=s/t(4)

代入(3)得s=(C<pe/4nri1)?t作s-t圖，由斜率和已知

得￡和山可求C電勢(shì)。三、儀器及試劑

fe(oh)3膠體，kcl輔助溶液，高位瓶，電泳管，直尺，電泳儀。

1.電極2kcl溶液3fe(oh)3溶膠

三、實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)

1.洗凈電泳管和高位瓶，然后在電泳管中加入kcl輔助溶液，使其高度至電泳管的一

半，將電泳管固定在鐵架臺(tái)上。插入電極。(注意兩電極口必須水平)2.在高位瓶中加入

40ml的fe(oh)3膠體溶液，趕走導(dǎo)管中的氣泡，將其固定在鐵架臺(tái)上。

3.將高位瓶的毛細(xì)管由電泳管中間插入底部。緩慢打開(kāi)活塞入fe(oh)3膠體。一直

沒(méi)過(guò)電極。將導(dǎo)管從電泳管中慢慢取出。

4.打開(kāi)電泳儀，將電壓設(shè)立60v,將電泳管比較清楚的一極插入陰極中，另一端插陽(yáng)

極。

5.調(diào)好測(cè)高儀的水平儀，并記錄電泳管陰極溶液界面的初始位置。6.將電泳儀置于工

作位置，同時(shí)記時(shí)，每4分鐘記一次界面高度。

7.測(cè)量7個(gè)點(diǎn)后停止實(shí)驗(yàn)，關(guān)閉電泳儀開(kāi)關(guān)，用細(xì)繩測(cè)量電極兩端的距離，測(cè)三次，記

錄數(shù)據(jù)。

8.拋棄電泳管中的試液，并沖洗干凈。、

四、數(shù)據(jù)記錄與解決

實(shí)驗(yàn)前溫度：28.3℃大氣壓：101.87kpa

實(shí)驗(yàn)后溫度：27.7℃大氣壓：100.76kpa電壓：60.00

V

兩極間距離1(Cm):32.90cm

已知：？=0.000894pa.s?=78.36u=60v1=32.90cm

根據(jù)上表作圖得：

依據(jù)公式：s=(<(ps/4nr]1)?t和已知的n和￡就可算出C電位：

由圖得斜率：k=C<p￡/4nnl=0.0531cm-min-1查得：￡=78.36f

/mr)=0.8904mpa.s測(cè)得電極間距為：1=32.90cm實(shí)驗(yàn)電

壓：(p=60v將數(shù)值代入得：C=4.172xiO-6v

五.結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)測(cè)得fe(。h)3的電動(dòng)勢(shì)<=4.172x10-6V。

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，掌握了電泳法測(cè)定fe(。h)3溶膠電動(dòng)電勢(shì)的原理和方法，同時(shí)觀測(cè)和熟

悉了膠體的電泳現(xiàn)象。

導(dǎo)致誤差的也許因素：

(1)儀器的干凈限度規(guī)定很高，否則也許發(fā)生膠體凝聚，導(dǎo)致毛細(xì)管堵塞。故一定要將

儀器清洗干凈。

(2)觀測(cè)界面移動(dòng)時(shí)，應(yīng)由同一個(gè)人觀測(cè)，從而減小誤差。

(3)實(shí)驗(yàn)中輔助液的選擇十分重要，規(guī)定輔助液的電導(dǎo)率與溶膠的一致，避免因界面處電

場(chǎng)強(qiáng)度的突變導(dǎo)致兩臂界面移動(dòng)速度不等產(chǎn)生界面模糊。(4)fe(oh)3膠體帶正電。

六、思考題：

1、要準(zhǔn)確測(cè)定膠體的電泳速度必須注意哪些問(wèn)題？答：①U壓要足夠，穩(wěn)定；

碘路暢通；

函液保證暢通無(wú)氣泡；篇四：瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

2023-11-0309：43：56來(lái)源：生物秀評(píng)論：0我要評(píng)論

實(shí)驗(yàn)二瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的基本原理；(2)

掌握使用水平式電泳儀的方法；(3)學(xué)習(xí)在具有甲醛的凝膠上進(jìn)行rna電泳的方法?！緦?shí)驗(yàn)

原理】瓊脂糖凝膠電泳是基因工程實(shí)驗(yàn)室中分離鑒定核酸的常規(guī)方法。核酸是兩性電解質(zhì)，其

等電點(diǎn)為ph2-2.5,在常規(guī)的…

實(shí)驗(yàn)二瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

(1)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的基本原理；

(2)掌握使用水平式電泳儀的方法；

(3)學(xué)習(xí)在具有甲醛的凝膠上進(jìn)行rna電泳的方法。

【實(shí)驗(yàn)原理】

瓊脂糖凝膠電泳是基因工程實(shí)驗(yàn)室中分離鑒定核酸的常規(guī)方法。核酸是兩性電解質(zhì)，其等

電點(diǎn)為ph2-2.5,在常規(guī)的電泳緩沖液中(ph約8.5),核酸分子帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正

極移動(dòng)。核酸分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，具有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，但重要為分子篩效

應(yīng)。因此，核酸分子的遷移率由下列幾種因素決定：

(1)dna的分子大小。線狀雙鏈dna分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與dn

a分子量對(duì)數(shù)成反比，分子越大則所受阻力越大，也越難于在凝膠孔隙中移動(dòng)，因而遷移得越

慢。

(2)dna分子的構(gòu)象。當(dāng)dna分子處在不同構(gòu)象時(shí)，它在電場(chǎng)中移動(dòng)距離不僅和分子量

有關(guān)，還和它自身構(gòu)象有關(guān)。相同分子量的線狀、開(kāi)環(huán)和超螺旋質(zhì)粒dna在瓊脂糖凝膠中移動(dòng)

的速度是不同樣的，超螺旋dna移動(dòng)得最快，而開(kāi)環(huán)狀dna移動(dòng)最慢。如在電泳鑒定質(zhì)粒純

度時(shí)發(fā)現(xiàn)凝膠上有數(shù)條dna帶難以擬定是質(zhì)粒dna不同構(gòu)象引起還是由于具有其他dna引

起時(shí)，可從瓊脂糖凝膠上將dna帶逐個(gè)回收，用同一種限制性內(nèi)切酶分別水解，然后電泳，如

在凝膠上出現(xiàn)相同的dna圖譜，貝I為同一種dna。

(3)電源電壓。在低電壓時(shí)，線狀dna片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電

場(chǎng)強(qiáng)度的增長(zhǎng)，不同分子量的dna片段的遷移率將以不同的幅度增長(zhǎng)，片段越大，因場(chǎng)強(qiáng)升高

引起的遷移率升高幅度也越大，因此電壓增長(zhǎng)，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大于

2kb的dna片段的分辨率達(dá)成最大，所加電壓不得超過(guò)5v/cm。

(4)離子強(qiáng)度影響。電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響dna的電泳遷移率。在沒(méi)有

離子存在時(shí)(如誤用蒸儲(chǔ)水配制凝膠)，電導(dǎo)率最小，dna幾乎不移動(dòng)；在高離子強(qiáng)度的緩沖

液中(如誤加10、電泳緩沖液)，則電導(dǎo)很高并明顯產(chǎn)熱，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起凝膠熔化或dna變

性。

澳化乙咤(ethidiumbromide,eb)(1)能插入dna分子中形成復(fù)合物，在波長(zhǎng)

為254nm紫外光照射下eb能發(fā)射熒光，并且熒光的強(qiáng)度正比于核酸的含量，如將已知濃度

的標(biāo)準(zhǔn)樣品作電泳對(duì)照，就可估算出待測(cè)樣品的濃度。由于澳化乙唬有致癌的嫌疑，所以現(xiàn)

在也開(kāi)發(fā)出了安全的染料，如sybergreen。

常規(guī)的水平式瓊脂糖凝膠電泳適合于dna和rna的分離鑒定；但經(jīng)甲醛進(jìn)行變性解決

的瓊脂糖電泳更合用于rna的分離鑒定和northern雜交，由于變性后的rna是單鏈，

其泳動(dòng)速度與相同大小的dna分子量同樣，因而可以進(jìn)行rna分子大小的測(cè)定，并且染色后

條帶更為銳利，

也更牢固結(jié)合于硝酸纖維素膜上，與放射性或非放射性標(biāo)記的探針發(fā)生高效雜交。

【試劑與器材】

(-)材料

電泳儀、水平電泳槽、樣品梳子、瓊脂糖等

(-)試劑

1、50?tae(1000ml):242gtris,

57.1ml冰醋酸，

18.6gedta。

2,eb溶液：100ml水中加入1g漠化乙咤，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以保證其完全溶解，

分裝，室溫避光保存。

3、dna加樣緩沖液：0.25%漠酚藍(lán)，0.25%二甲苯青，50%甘油(w/v)。

4、rna甲醛變性膠上樣緩沖液：0.25%溟酚藍(lán)，0.25%二甲苯青，1mmedta

(ph8.0),50%甘油(w/v),用depc水配制，高壓滅菌備用。

5、5?甲醛變性膠電泳緩沖液：0.1mmops(ph7.0),40mm醋酸鈉，5mm

edta(ph8.0),用depc水配制，過(guò)濾除菌，室溫避光保存。淡黃色緩沖液可正常使用，深

黃色應(yīng)棄用。

【操作方法】

(-)常規(guī)的水平式瓊脂糖電泳

制備瓊脂糖凝膠：按照被分離dna分子的大小，決定凝膠中瓊脂糖的百分含量；一般情

況下，可參考下表：

瓊脂糖的含量(2)分離線狀dna分子的有效范圍(kb)

0.360-5

0.620-1

0.710-0.8

0.97-0.5

1.26-0.4

1.54-0.2

2.03-0.1

1.制備瓊脂糖凝膠：稱取瓊脂糖，加入1x電泳緩沖液，待水合數(shù)分鐘后，置微波爐中將

瓊脂糖融化均勻。在加熱過(guò)程中要不時(shí)搖動(dòng)，使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進(jìn)入溶液；加熱時(shí)應(yīng)

蓋上封口膜，以減少水份蒸發(fā)。

2.膠板的制備：將膠槽置于制膠板上，插上樣品梳子，注意觀測(cè)梳子齒下緣應(yīng)與膠槽底

面保持11nm左右的間隙，待膠溶液冷卻至50°讓右時(shí)，加入最終濃度為0.5微克/毫升的e

b（也可不把eb加入凝膠中，而是電泳后再用0.5pg/ml的eb溶液浸泡染色15分鐘），搖

勻，輕輕倒入電泳制膠板上，除掉氣泡；待凝膠冷卻凝固后，垂直輕拔梳子；將凝膠放入電泳槽

內(nèi)，加入1x電泳緩沖液，使電泳緩沖液液面剛高出瓊脂糖凝膠面；

3.加樣：點(diǎn)樣板或薄膜上混合dna樣品和上樣緩沖液，上樣緩沖液的最終稀釋倍數(shù)應(yīng)不

小于lx。用101H微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品小槽內(nèi)，每加完一個(gè)樣品，應(yīng)更換

一個(gè)加樣頭，以防污染，加樣時(shí)勿碰壞樣品孔周邊的凝膠面。（注意：加樣前要先記下加樣的

順序和點(diǎn)樣量）。

4.電泳：加樣后的凝膠板立即通電進(jìn)行電泳，dna的遷移速度與電壓成正比，最高電壓

不超

過(guò)5v/cm。當(dāng)瓊脂糖濃度低于0.5%,電泳溫度不能太高。樣品由負(fù)極（黑色）向正極

（紅色）方向移動(dòng)。電壓升高，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍減少。當(dāng)澳酚藍(lán)移動(dòng)到距離膠板下

沿約1cm處時(shí)，停止電泳。

5.觀測(cè)和拍照：電泳完畢，取出凝膠。在波長(zhǎng)為254nm的紫外燈下觀測(cè)染色后

之。

（二）在具有甲醛的凝膠上進(jìn)行的rna電泳（選做）

配制23ml甲醛電泳膠：0.336g瓊脂糖溶于20mldepc水中，冷卻至60?c,加

入5ml的5x甲醛變性膠電泳緩沖液和5.5ml的甲醛，在通風(fēng)櫥內(nèi)倒膠，冷卻30分鐘后使

用。

甲醛變性膠rna樣品的制備：”1rna,5?甲醛變性膠電泳緩沖液0.5口1,甲醛0.

7口1,甲酰胺21_11,65。0力口熱151^11,迅速冰浴，力口1]_11上樣緩沖液和0.2口1的eb。

環(huán)節(jié)：

1.用3%過(guò)氧化氫浸泡電泳槽、膠板、梳子30分鐘以上。

2.膠板的制備：按常規(guī)瓊脂糖電泳法。

3.預(yù)電泳：1、甲醛變性膠電泳緩沖液，預(yù)電泳10min。電壓為5v/cm。

4.小心地進(jìn)行點(diǎn)樣，記錄樣品順序與點(diǎn)樣量；然后開(kāi)始電泳，電壓為3-4v/cm。

5.觀測(cè)和拍照：在波長(zhǎng)為254nm的紫外燈下觀測(cè)電泳膠板并拍照保存圖片。

【注意事項(xiàng)與提醒】

（1）eb是強(qiáng)誘變劑并有中檔毒性，易揮發(fā)，配制和使用時(shí)都應(yīng)戴手套，并且不要把eb

灑到桌面或地面上。凡是沾污了eb的容器或物品必須經(jīng)專門解決后才干清洗或丟棄。簡(jiǎn)樸解

決方法為：加入大量的水進(jìn)行稀釋（達(dá)成0.5mg/m1以下），然后加入0.2倍體積新鮮配

制的5%次磷酸（由50%次磷酸配制而成）和0.12倍體積新鮮配制的0.5mol/1的亞硝

酸鈉，混勻，放置1天后，加入過(guò)量的lmol/1碳酸氫鈉。如此解決后的eb的誘變活性可降

至本來(lái)的1/200左右。

（2）由于eb會(huì)嵌入到堆積的堿基對(duì)之間并拉長(zhǎng)線狀和帶缺口的環(huán)狀dna,使dna遷移

率減少。因此，假如要準(zhǔn)確地測(cè)定dna的分子量，應(yīng)當(dāng)采用跑完電泳后再用0.5pg/m1的e

b溶液浸泡染色的方法。

（3）總rna的分析：哺乳動(dòng)物的rna由28srrna、18srrna和mrna以及其它

小分子rna組成，28s和18srrna處為明顯的亮帶（相稱于4.5kb和1.9k

b）,28s/l8s應(yīng)為1.5-2.5/1；植物、昆蟲(chóng)、酵母和兩棲動(dòng)物的rna帶分布較小，約為

0.5-3.Okb左右；假如28s/18s小于1/I,或者出現(xiàn)拖帶，說(shuō)明rna已有部分降解，

假如28s和18srrna大部分已降解，則需重新制備。

【實(shí)驗(yàn)安排】

只需一天：上午配試劑倒膠，下午跑電泳并觀測(cè)拍照。

【實(shí)驗(yàn)報(bào)告規(guī)定與思考題】

1、附上電泳結(jié)果的圖片并進(jìn)行對(duì)的的標(biāo)注（如下圖）（2）的或已加有eb的電泳膠板。

dna存在處顯示出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶。于凝膠成像系統(tǒng)中拍照并保存

m：1kbdnaladder；1:質(zhì)粒dna

2、瓊脂糖凝膠電泳中dna分子遷移率受哪些因素的影響？

3、假如樣品電泳后很久都沒(méi)有跑出點(diǎn)樣孔，你認(rèn)為有哪幾方面的因素？

電泳流程圖：

凝膠加樣緩沖液

使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以保證dna均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi)；

使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，具有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽(yáng)極泳動(dòng)的染

料。溟酚藍(lán)在瓊脂糖中移動(dòng)的速率約為二甲苯青ff的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無(wú)關(guān)。以

0.5xtbf作電泳液時(shí)，澳酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率約與長(zhǎng)3OObp的雙鏈線狀dna相

同，而二甲苯青ff的泳動(dòng)則與長(zhǎng)4kb的雙鏈線狀dna相同。在瓊脂糖濃度為0.5%?1.43

的范圍內(nèi)，這些相應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。

選用哪一種加樣染料純屬個(gè)人喜惡。但是，對(duì)于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用嗅甲酚綠作為示蹤染

料，由于在堿性ph條件下其顯色較澳酚更藍(lán)為鮮明。篇五：dna的提取和電泳實(shí)驗(yàn)報(bào)告

基因組dna的提取和電泳(實(shí)驗(yàn)五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解dna提取的方法，以及瓊脂糖凝膠電泳分析dna技術(shù)。

二、器材和試劑

1.器材

水平瓊脂糖電泳儀，離心機(jī)，水浴鍋，研缽，離心管、移液槍、水稻幼苗等

2.試劑

1.1mo1/1tris.cl(Ph8.0)的配制：稱取12.11g的tris,置于

80ml的ddh20,