體外診療試劑培訓(xùn)

體外診療產(chǎn)品生產(chǎn)監(jiān)管北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)所體外診療試劑培訓(xùn)1/34

主要內(nèi)容體外診療產(chǎn)品種類體外診療產(chǎn)品生產(chǎn)基本原理生化類產(chǎn)品免疫類產(chǎn)品分子類和血液類溯源性問題體外診療試劑培訓(xùn)2/34

體外診療作用“醫(yī)生眼睛”預(yù)測和診療功效，如：血細(xì)胞抗體（肝炎、艾滋、IGE）基因（唐氏、小兒耳聾、遺傳缺點(diǎn)基因BRCA1）。療效和健康監(jiān)測，如：代謝物（血糖）標(biāo)志物（AFP、PSA、HPV）蛋白、微量元素（白蛋白、Ca);體外診療試劑培訓(xùn)3/34

體外診療產(chǎn)品類別體外診療依據(jù)風(fēng)險(xiǎn)分3類：III類：致病性病原體抗原、抗體以及核酸、人類基因檢測、腫瘤標(biāo)志物、血型、組織配型、變態(tài)反應(yīng)（過敏原）等；II類：除III、I類，如：蛋白質(zhì)、糖類、酯類、酶類、維生素、無機(jī)離子、激素等；I類：微生物培養(yǎng)基（不用于微生物判別和藥敏試驗(yàn)）、樣本處理用產(chǎn)品，如溶血?jiǎng)?、稀釋液、染色液等。體外診療試劑培訓(xùn)4/34

體外診療產(chǎn)品類別體外診療專業(yè)分類:生化、免疫、分子生物學(xué)、微生物、體液等,臨床使用超出千種。生化：生物化學(xué)反應(yīng)或免疫反應(yīng)(生化儀項(xiàng)目），酶類、糖類、脂類、蛋白、無機(jī)元素、肝功效、腎功等指標(biāo)。免疫：抗原與抗體相結(jié)合特異性反應(yīng)，傳染性疾病、內(nèi)分泌、腫瘤、藥品檢測、血型判定等。分子診療：分子生物學(xué)方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)或表示水平改變，主要用于肝炎、性病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等檢測。體外診療試劑培訓(xùn)5/34

體外診療產(chǎn)品類別微生物：經(jīng)過培養(yǎng)判別細(xì)菌等微生物方法。血液學(xué)：經(jīng)過電阻抗、激光和高能電磁波等技術(shù)檢測血液中血細(xì)胞數(shù)量和分類方法。體外診療試劑培訓(xùn)6/34

生化類產(chǎn)品基本方法生化分析儀反應(yīng)普通稱為生化試劑兩點(diǎn)法、終點(diǎn)法、速率法、比濁法兩點(diǎn)法：測定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度總改變量以求取酶反應(yīng)初速度方法。終點(diǎn)法：經(jīng)過測定酶反應(yīng)開始到反應(yīng)到達(dá)平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總改變量，以求出酶活力方法，亦稱平衡法。

速率法：是指連續(xù)測定(每15秒~1分鐘監(jiān)測一次)酶反應(yīng)過程中某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間改變來求出酶反應(yīng)初速度方法，即連續(xù)監(jiān)測法。透射比濁法透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)項(xiàng)目。體外診療試劑培訓(xùn)7/34

生化類產(chǎn)品基本方法

終點(diǎn)法慣用有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）。兩點(diǎn)法：

苦味酸法測定肌酐采取此法速率法對于酶活性測定，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定項(xiàng)目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法。（7個(gè)酶加葡萄糖、尿素）免疫比濁法載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”、類風(fēng)濕因子，以及血清中其它蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。(蛋白）體外診療試劑培訓(xùn)8/34

生化類產(chǎn)品說明書

生化分析儀說明書除法規(guī)相關(guān)要求外，還最少包含：適用機(jī)型反應(yīng)溫度（37度）主波長、次波長

孵育時(shí)間（終點(diǎn)法或兩點(diǎn)法）延遲時(shí)間（連續(xù)監(jiān)測法）、連續(xù)監(jiān)測時(shí)間在延遲時(shí)間之后即開始，普通為60～120s不少于4個(gè)吸光度檢測點(diǎn)（3個(gè)吸光度改變值）；加樣量校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)（非線性必須兩個(gè)以上）等。體外診療試劑培訓(xùn)9/34

標(biāo)準(zhǔn)液個(gè)數(shù)原因校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)濃度校準(zhǔn)曲線線性好并經(jīng)過坐標(biāo)零點(diǎn)，可采取一個(gè)校準(zhǔn)液；線性好但不經(jīng)過坐標(biāo)零點(diǎn)，應(yīng)使用兩個(gè)校準(zhǔn)液；對于校準(zhǔn)曲線呈非線性者，必須使用兩個(gè)以上校準(zhǔn)液。每一個(gè)校準(zhǔn)液都要有一個(gè)適當(dāng)濃度。吸光度濃度105600030008體外診療試劑培訓(xùn)10/34生化類產(chǎn)品基本原理氧化反應(yīng):還原反應(yīng)：體外診療試劑培訓(xùn)11/34

生化類產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)分析原材料(輔酶I)（進(jìn)貨檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)或生產(chǎn)統(tǒng)計(jì)中，應(yīng)包含輔酶空白吸光度檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，且不一樣類別符合下述特點(diǎn)）還原性輔酶I主要用于下降反應(yīng)，當(dāng)還原性輔酶I質(zhì)量出現(xiàn)問題時(shí)，試劑空白吸光度降低，造成試劑測量結(jié)果不確定度變大，測量靈敏度也隨之降低，測量線性范圍變小。氧化性輔酶I主要用于上升反應(yīng)，當(dāng)氧化性輔酶I質(zhì)量出現(xiàn)問題時(shí)，試劑空白吸光度升高，造成試劑測量結(jié)果不確定度變大，測量靈敏度也隨之降低，測量線性范圍變小。體外診療試劑培訓(xùn)12/34

生化類產(chǎn)品質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)分析生產(chǎn)統(tǒng)計(jì)中應(yīng)包含試劑用水電導(dǎo)率、PH值及微生物檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)酶反應(yīng)水（PH）離子電導(dǎo)率微生物培養(yǎng)基溫度溫控系統(tǒng)體外診療試劑培訓(xùn)13/34生化類產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)分析留樣每批是否留樣留樣檢驗(yàn)記錄，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)留樣檢驗(yàn)真實(shí)性，檢查企業(yè)文件規(guī)定檢驗(yàn)周期原料輔酶空白吸光度水同上純物質(zhì)（底物）檢查純度標(biāo)識(shí)，或色譜的檢測結(jié)果記錄設(shè)備生化儀定期測試記錄分光光度計(jì)定期計(jì)量電導(dǎo)率儀定期計(jì)量分裝設(shè)備清洗記錄儲(chǔ)存環(huán)境檢查冷柜或冷庫的溫度記錄，酶類試劑2-8度，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)-20度體外診療試劑培訓(xùn)14/34

免疫類產(chǎn)品基本原理Elisa反應(yīng)基本原理（酶標(biāo)儀、發(fā)光儀等）將含有已知抗體抗血清吸附在微量滴定板上小孔里，洗滌一次；②加待測抗原，如二者是特異，則發(fā)生結(jié)合，然后把多出抗體洗除；③加入與待測抗原呈特異反應(yīng)酶聯(lián)抗體（二抗），使形成“夾心”；④加入該酶底物，若看到有色酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在對應(yīng)抗原。體外診療試劑培訓(xùn)15/34

免疫類產(chǎn)品質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)分析辣根過氧化物酶過氧化物酶（HRP）廣泛分布于植物中，辣根中含量最高，從辣根中提取稱辣根過氧化物酶（HRP），酶蛋白和輔基最大吸收光譜分別為275nm和403nm。酶純度以RZ表示：RZ=OD403/OD275純酶RZ多在3.0以上，最高為3.4。RZ在0.6以下酶制品為粗酶，非酶蛋白約占75%，不能用于標(biāo)識(shí)。RZ在2.5以上者方可用于標(biāo)識(shí)。（檢驗(yàn)進(jìn)貨檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)或生產(chǎn)過程統(tǒng)計(jì)）體外診療試劑培訓(xùn)16/34

免疫產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)分析酶與抗體活性慣用瓊脂擴(kuò)散或免疫電泳法，使抗原與抗體形成沉淀線，經(jīng)PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時(shí)，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，假如出現(xiàn)應(yīng)有顏色反應(yīng)，再用生理鹽水浸泡，顏色依然不褪，表示結(jié)合物現(xiàn)有酶活性，也有抗體活性。良好結(jié)合物在顯色后，瓊擴(kuò)滴度應(yīng)在1:16以上。另一個(gè)測定方法是用系列稀釋酶標(biāo)抗體直接以ELISA方法進(jìn)行方陣滴定，此法不但能夠測定標(biāo)識(shí)效果，還能夠確定酶標(biāo)抗體使用濃度。體外診療試劑培訓(xùn)17/34

免疫類產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)分析在產(chǎn)品進(jìn)貨檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)或生產(chǎn)統(tǒng)計(jì)中檢驗(yàn)以下內(nèi)容：1、酶標(biāo)識(shí)二抗活性；2、用于ELISA結(jié)合物酶量為400(g/ml時(shí)效果普通，為500(g/ml時(shí)效果很好，達(dá)1000(g/ml時(shí)效果最好；3、酶結(jié)合率為7%時(shí)效果普通，為9%－10%很好，達(dá)30%以上最好；4、一抗進(jìn)貨檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，單抗還是多抗，也可小樣測試活性；5、一抗包被工藝統(tǒng)計(jì)與質(zhì)量體系文件中要求是否一致；5、儲(chǔ)存環(huán)境同生化產(chǎn)品；體外診療試劑培訓(xùn)18/34

分子類產(chǎn)品基本原理

PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配正確標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')方向合成互補(bǔ)鏈。基于聚合酶制造PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。體外診療試劑培訓(xùn)19/34

分子類產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)

1、引物質(zhì)量，多為購置，可做小樣，采購統(tǒng)計(jì)中查小樣測試統(tǒng)計(jì)；2、聚合酶質(zhì)量，多為購置，可測定，可做小樣，采購統(tǒng)計(jì)中查小樣測試統(tǒng)計(jì)；3、內(nèi)標(biāo)：已知帶有引物片段樣本，與被測樣本同時(shí)擴(kuò)增，應(yīng)顯示陽性，檢驗(yàn)測試統(tǒng)計(jì)；4、PCR生產(chǎn)企業(yè)控溫精度（95度、55度和75度）和改變率統(tǒng)計(jì)。5、實(shí)地檢驗(yàn)PCR試劑質(zhì)控（內(nèi)標(biāo)）和生產(chǎn)是否在各自獨(dú)立建筑中進(jìn)行。而且試驗(yàn)室分為試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。而且考慮房間正負(fù)壓保護(hù)樣本不被污染、人員不被感染。95度(高溫）55度低溫75度（反應(yīng)溫度）95度體外診療試劑培訓(xùn)20/34

血液類產(chǎn)品基本原理懸浮在電解液中顆粒/細(xì)胞，隨電解液經(jīng)過小孔管時(shí)，因取代了相同體積電解液，在恒電流設(shè)計(jì)電路中造成小孔管內(nèi)外兩電極間電阻發(fā)生瞬時(shí)改變，而產(chǎn)生了電位脈沖。脈沖信號(hào)大小和次數(shù)與顆粒大小和數(shù)目成正比。體外診療試劑培訓(xùn)21/34

血液類產(chǎn)品質(zhì)量控制點(diǎn)1、生產(chǎn)統(tǒng)計(jì)中檢驗(yàn)溶血?jiǎng)?、稀釋液顆粒物、微生物檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)；2、血細(xì)胞分析儀稀釋液生產(chǎn)車間需控制潔凈度和菌落數(shù)；3、檢驗(yàn)室血液分析儀是否采取定值血定時(shí)校準(zhǔn)；4、檢驗(yàn)室血液分析儀內(nèi)部質(zhì)控結(jié)果，紅白偏差是否符合要求（尤其是血小板）。體外診療試劑培訓(xùn)22/34

體外診療試劑溯源校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)濃度校準(zhǔn)曲線線性好并經(jīng)過坐標(biāo)零點(diǎn)，可采取一個(gè)校準(zhǔn)液；線性好但不經(jīng)過坐標(biāo)零點(diǎn)，應(yīng)使用兩個(gè)校準(zhǔn)液；對于校準(zhǔn)曲線呈非線性者，必須使用兩個(gè)以上校準(zhǔn)液。每一個(gè)校準(zhǔn)液都要有一個(gè)適當(dāng)濃度。吸光度濃度105600030008體外診療試劑培訓(xùn)23/34年國家食品藥品監(jiān)督管理局

體外診療試劑監(jiān)督抽驗(yàn)—61個(gè)國產(chǎn)TG試劑新鮮混合血清最大正偏倚為22.1％，最大負(fù)偏倚為-18.9％，39%bias＜±5％體外診療試劑培訓(xùn)24/34

體外診療試劑溯源校準(zhǔn)品與質(zhì)控品區(qū)分校準(zhǔn)品目標(biāo)是為了產(chǎn)品準(zhǔn)確性，溯源性是必須；質(zhì)控品目標(biāo)是為了產(chǎn)品精密度，穩(wěn)定性是必須，可不具備溯源性。體外診療試劑培訓(xùn)25/34溯源性有多主要？臨床檢驗(yàn)：對搜集患者標(biāo)本只做一次檢驗(yàn)，就發(fā)出匯報(bào)準(zhǔn)確性不足是主要臨床檢驗(yàn)質(zhì)量問題影響檢驗(yàn)結(jié)果“臨床準(zhǔn)確性”原因是多方面－樣品采集與處理，病人準(zhǔn)備，(生物變異)，人為錯(cuò)誤－方法：正確度（校準(zhǔn)）、精密度、特異性、線性、檢測限等溯源理論上處理是正確度問題(校準(zhǔn)問題)體外診療試劑培訓(xùn)26/34

體外診療試劑溯源體外診療試劑培訓(xùn)27/34

體外診療試劑溯源標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制造商選定方法主校準(zhǔn)品制造商常設(shè)方法產(chǎn)品校準(zhǔn)品常規(guī)方法血樣體外診療試劑培訓(xùn)28/34體外診療試劑培訓(xùn)29/34

體外診療試劑溯源1、有溯源性才能判斷準(zhǔn)確性；2、檢驗(yàn)結(jié)果才能互認(rèn)；當(dāng)前問題1、CRM缺乏；2、反應(yīng)原理差異，造成結(jié)果有差異，但Cutoff值也不一樣，不影響臨床判斷，結(jié)果無法互認(rèn)；3、各自溯源路徑不一樣，結(jié)果存在差異。體外診療試劑培訓(xùn)30/34

體外診療試劑溯源當(dāng)前采取準(zhǔn)確性評價(jià)方法1.國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（有溯源性）（查驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證實(shí)材料，普通為證書）2.回收試驗(yàn)（有一定溯源性）（添加物質(zhì)純度，試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)）3.與大企業(yè)比對（無溯源性）（樣本數(shù)，相關(guān)