蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗

蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第1頁

1.加深了解所學(xué)相關(guān)蛋白質(zhì)性質(zhì)理論知識

2.掌握氨基酸和蛋白質(zhì)常見定性、定量分析方法及原理

【試驗?zāi)繕?biāo)】蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第2頁一、蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)是指蛋白質(zhì)所含一些氨基酸及其特殊結(jié)構(gòu)，在一定條件下可與一些試劑發(fā)生了生成有色物質(zhì)反應(yīng)。不一樣蛋白質(zhì)分子所含氨基酸殘基不完全相同，所以所發(fā)生成色反應(yīng)也不完全一樣。呈色反應(yīng)并不是蛋白質(zhì)專一反應(yīng)。所以，不能僅僅依據(jù)呈色反應(yīng)結(jié)果為陽性就來判斷被測物質(zhì)一定是蛋白質(zhì)，最少要用2種以上方法來判別。蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第3頁（一）雙縮脲反應(yīng)【試驗原理】當(dāng)尿素經(jīng)加熱至180℃左右時，兩分子尿素脫去一分子氨，進而縮合成一分子雙縮脲。其在堿性條件下雙縮脲與銅離子結(jié)合成紅紫色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。其反應(yīng)過程以下：蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第4頁多肽及蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中均含有許多肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮脲分子中亞酰胺鍵相同。所以，在堿性條件下與銅離子也能展現(xiàn)出類似于雙縮脲呈色反應(yīng)。其反應(yīng)過程以下：蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第5頁【試劑】蛋白質(zhì)溶液（雞蛋清用蒸餾水稀釋10倍，經(jīng)過2-3層紗布濾去不溶物）2.0.1%甘氨酸溶液3.0.01%精氨酸溶液4.10%NaOH溶液5.1%CuSO4溶液6.尿素結(jié)晶蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第6頁【試驗流程】雙縮脲制備少許尿素結(jié)晶于干燥試管中微火加熱尿素熔解至硬化停頓加熱看到有白色氣體冷卻加10%氫氧化鈉溶液約1ml震蕩加入1%硫酸銅溶液2滴震蕩觀察顏色改變?nèi)鐖D所表示蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第7頁注意：(1)尿素結(jié)晶不要取多，約火柴頭大小。(2)在操作過程中試管不能沖向他人以預(yù)防燙傷。(3)控制加熱時間既不能過長也不能過短。(4)加熱時火不能太大，預(yù)防碳化。(5)銅離子不能多加，不然與氫氧化鈉形成藍色氫氧化銅，干擾試驗結(jié)果。蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第8頁（二）茚三酮反應(yīng)【試驗原理】

在弱酸條件下（pH5-7），蛋白質(zhì)或氨基酸與茚三酮共熱，可生成藍紫色縮合物。此反應(yīng)為一切蛋白質(zhì)和α—氨基酸所共有(亞氨基酸如脯氨酸和羥脯氨酸產(chǎn)生黃色化合物)，含有氨基其它化合物亦可發(fā)生此反應(yīng)。蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第9頁【試劑】1.蛋白質(zhì)樣液（與雙縮脲反應(yīng)相同）2.0.1%甘氨酸溶液3.0.2%茚三酮溶液蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第10頁【試驗流程】取試管2支，分別加入蛋白質(zhì)樣液及0．1％甘氨酸溶液1ml，然后各加入茚三酮溶液0.5ml，混勻后于沸水浴中加熱數(shù)分鐘，觀察顏色改變?nèi)鐖D所表示：蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第11頁（三）黃色反應(yīng)【試驗原理】

在蛋白質(zhì)分子中，含有芳香環(huán)氨基酸(如酪氨酸，色氨酸等)殘基上苯環(huán)經(jīng)硝酸作用可生成黃色硝基化合物，在堿性條件下生成物可轉(zhuǎn)變?yōu)榻埸S色硝醌衍生物,反應(yīng)為:蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第12頁

多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)氨基酸，所以都會發(fā)生黃色反應(yīng)。苯丙氨酸不易硝化，需加少許濃硫酸后才能夠發(fā)生黃色反應(yīng)。蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第13頁【試劑】1.蛋白質(zhì)樣液（與雙縮脲反應(yīng)相同）2.濃硝酸3.20%NaOH4.0.1%石炭酸溶液蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第14頁【試驗流程】1.取0.1%石炭酸溶液約1ml放在試管內(nèi)，加濃硝酸5滴（注意不要弄到手上），水浴加熱，觀察結(jié)果如右圖所表示：2.取潔凈試管1支，加蛋白質(zhì)樣液1ml和濃硝酸5滴，出現(xiàn)沉淀，加熱，無須至沸騰，沸騰比較危險，則沉淀變成黃色，待試管冷卻后，向兩管各加20％NaOH溶液使成堿性，觀察顏色改變?nèi)鐖D所表示：蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第15頁（四）考馬斯亮藍反應(yīng)【試驗原理】

考馬斯亮藍含有紅色和藍色兩種色調(diào)。在酸性溶液中，其以游離態(tài)存在呈棕紅色；當(dāng)它與蛋白質(zhì)經(jīng)過疏水作用結(jié)合后變成為藍色。它染色靈敏度高，比氨基黑高3倍。反應(yīng)速度快，約在2分鐘左右時間到達平衡，在室一小時內(nèi)穩(wěn)定。在0.01~1.0mg蛋白質(zhì)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與A595nm值成正比。所以常見來測定蛋白質(zhì)含量。蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第16頁【試劑】1.蛋白質(zhì)溶液（雞蛋清：水=1：20）2.考馬斯亮藍染液蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗第17頁【試驗流程】取2支試管，