目的基因的獲得

序言基因工程技術又稱為重組DNA技術，指將一些特定基因或DNA片斷，經(jīng)過載體或其它伎倆送入受體細胞，使它們在受體細胞中增殖并表示一個遺傳學操作。所以目標DNA片段取得是進行DNA重組前提。目的基因的獲得第1頁方法一：直接從細胞中提取、酶切目的基因的獲得第2頁特點：（1）、假如從基因組DNA獲取目標基因

相對于目標基因長度，基因組DNA長度太大。（2）、從染色體以外遺傳物質(zhì)中取得目標基因是慣用做法目的基因的獲得第3頁方法二、化學合成法人工合成寡聚核苷酸技術：<60bp1.2元/bp在60bp與120bp之間6.8元/bp提供DNA合成服務企業(yè)：上海生工生物工程有限企業(yè)上海英俊生物科技有限企業(yè)上海華諾生物科技有限企業(yè)北京奧科生物技術有限責任企業(yè)等目的基因的獲得第4頁

特點：1、合成產(chǎn)物是單鏈DNA2、5’、3’末端均為羥基3、應用場所：真核生物基因在原核中表示；難以得到模板情況；目的基因的獲得第5頁取得雙鏈方法：（1）、3’末端部分反向互補，混合后在DNA聚合酶作用下互為模板形成雙鏈目的基因的獲得第6頁

（2）分段合成法OH，先用激酶處理，使磷酸化連接酶OH，先用激酶處理，使磷酸化目的基因的獲得第7頁

（3）、分段合成，結(jié)合PCR技術PCR目的基因的獲得第8頁目的基因的獲得第9頁

方法三、PCR技術（1）、直接從原核微生物細胞或質(zhì)粒中擴增目標片段（2）、引入突變a、引物5’端引入b、定點突變，SOE技術c、易錯PCR目的基因的獲得第10頁方法四、RT-PCR技術

針對真核生物基因不連續(xù)特點，利用mRNA為核苷酸信息資源，用逆轉(zhuǎn)錄---PCR法取得目標基因AAA…AAA3’5’T

T

T…T

T

TComplimentaryDNART：ReverseTranscriptase目的基因的獲得第11頁

Summary:1、細胞中提??；2、化學合成；3、PCR技術；4、RT-PCR目的基因的獲得第12頁

目的基因的獲得第13頁序言基因工程技術又稱為重組DNA技術，指將一些特定基因或DNA片斷，經(jīng)過載體或其它伎倆送入受體細胞，使它們在受體細胞中增殖并表示一個遺傳學操作。所以目標DNA片段取得是進行DNA重組前提。目的基因的獲得第14頁（一）DNA片段取得1、從基因所在生物體直接取得限制性內(nèi)切酶（restrictionenzymes）2、人工合成DNA片段（DNA合成儀）3、PCR反應合成DNA4、mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA5、用機械方法超聲波、目的基因的獲得第15頁目的基因的獲得第16頁粘性末端、平整末端200各種限制性內(nèi)切酶，切點各不相同目的基因的獲得第17頁（二）DNA片段和載體連接

——重組體DNA載體：細菌中質(zhì)粒、溫和噬菌體重組體DNA：載體DNA+引入DNA粘性末端平整末端連接酶目的基因的獲得第18頁目的基因的獲得第19頁目的基因的獲得第20頁目標基因表示目標基因在插入載體后，在其編