左氧氟沙星片中右氧氟沙星異構(gòu)體分析研究

左氧氟沙星片中右氧氟沙星異構(gòu)體分析研究

Summary：左氧氟沙星作為第3代氟喹諾酮類的抗生素藥物具有抗菌譜廣、抗菌作用強[1]，且易被人體吸收等優(yōu)點廣泛應(yīng)用于臨床。研究中和發(fā)現(xiàn)左氧氟沙星的藥理作用好，但左氧氟沙星存在異構(gòu)體，其無藥效活性并具有較強的毒副作用，為了控制生產(chǎn)中右氧氟沙星的量，為工藝生產(chǎn)提供了重要基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)，保證藥品的安全性。本法采用HPLC法，用C18（250mm*4.6mm，5μm）色譜柱，以五水硫酸銅D-苯丙氨酸-甲醇（84：16）為流動相；流速為1.0ml/min、進樣量為10μl、檢測波長294nm、柱溫30℃、洗脫方式：等度洗脫；檢測多批左氧氟沙星片，按外標(biāo)法計算右氧氟沙星的含量均小于1.0%。本法能夠檢測出左氧氟沙星片中的右氧氟沙星，可用于異構(gòu)體的檢查。Keys：左氧氟沙星、右氧氟沙星、異構(gòu)體、高效液相色譜法左氧氟沙星的介紹1.1.1左氧氟沙星的結(jié)構(gòu)及物理性質(zhì)左旋氧氟沙星(levofloxacin,圖1-1)化學(xué)名為(S)-(-)-9-氟-2,3-二氫-3-甲基-10-[4-甲基-1-哌嗪基]-7-氧代-7-氫吡啶并[1,2,3-de][1,4]苯并惡嗪-6-羧酸，它是由日本第一制藥株式會社開發(fā)成功的新一代氟喹諾酮類抗菌藥物，是氧氟沙星的左旋光學(xué)異構(gòu)體，熔點為229℃-235℃(分解)化學(xué)結(jié)構(gòu)式（如圖1）：圖11.1.2左氧氟沙星的應(yīng)用左氧氟沙星作用于細菌DNA旋轉(zhuǎn)酶，通過抑制細菌干擾DNA鏈的重新封接，抑制細菌DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，達到抗菌的作用。作為第3代氟喹諾酮類藥物，屬于臨床上常用的抗菌藥物，抗菌譜廣、作用強。本品屬于基本藥物，適用于治療敏感菌引起的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、化系統(tǒng)和皮膚軟組織感染。左氧氟沙星的藥效是右旋氧氟沙星的8至128倍，右氧氟沙星毒性大于左氧氟沙星。實驗部分2.1儀器與試劑高效液相色譜儀系統(tǒng)（島津）、左氧氟沙星片（自制）、左氧氟沙星對照品（中檢院，含量97.3％）；氧氟沙星對照品（中檢院，含量99.5％）。甲醇為色譜純；其余試劑為分析純。2.2方法及樣品溶液制備2.2.1樣品溶液制備流動相A：稱取D-苯丙氨酸5g與硫酸銅2g，加水4L溶解后，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值3.5；稀釋劑：甲醇；取適量氧氟沙星對照品，精密稱定，配成1ml含有氧氟沙星0.1mg，作為氧氟沙星對照品儲備液；取左氧氟沙星對照品適量用稀釋劑溶解，加入氧氟沙星對照品儲備液適量，配制成1ml含左氧氟沙星1mg、氧氟沙星20μg作為系統(tǒng)適用性溶液；左氧氟沙星片20片研磨成細粉，稱取適量，制成1ml中含有左氧氟沙星1mg的供試品溶液，量取供試品溶液適量，制成1ml中含左氧氟沙星0.01mg的自身對照溶液[3]。2.2.2方法2.2.2.1方法1流動相A-甲醇（80：20）作為流動相，色譜柱C18（150mm*4.6mm，5μm）；檢測波長294nm、柱溫30℃；流速1.0ml/min，量取系統(tǒng)適用性溶液、左氧氟沙星對照品溶液、氧氟沙星對照品溶液10μl進樣。2.2.2.2方法2流動相A-甲醇（84：16）作為流動相，色譜柱C18（150mm*4.6mm，5μm）；其他同2.2.2.1方法1條件。2.2.2.3方法3流動相A-甲醇（84：16）作為流動相，色譜柱C18（250mm*4.6mm，5μm）；其他同2.2.2.1方法1條件。兩個主組分的出峰順序依次為右氧氟沙星、左氧氟沙星,分離度不小于1.5。2.2.3結(jié)果與分析2.2.3.1結(jié)果方法一，系統(tǒng)適用性溶液中右氧氟沙星RT8.183、左氧氟沙星RT9.371；左氧氟沙星與右氧氟沙星峰分離度進為1.21。圖2方法二，系統(tǒng)適用性溶液中右氧氟沙星RT10.177、左氧氟沙星RT10.848；左氧氟沙星與右氧氟沙星峰分離度進為0.63。圖3方法三，系統(tǒng)適用性溶液中右氧氟沙星RT10.291、左氧氟沙星RT12.299；左氧氟沙星與右氧氟沙星峰分離度進為4.71。圖4注：系統(tǒng)適用性中A右氧氟沙星，B左氧氟沙星2.2.3.2分析綜合分析方法三色譜條件參數(shù)最優(yōu)，該方法能夠完全將右氧氟沙星與左氧氟沙星分離并準(zhǔn)確的檢測出兩個主成分。2.3精密度試驗以2.2.2.3項下色譜條件，取2.2.1項下系統(tǒng)適用性溶液連續(xù)進樣6次，以右氧氟沙星峰面積計算出，其RSD為0.65%，表明該方法能準(zhǔn)確可靠檢測出右氧氟沙星的含量，本方法精密度良好。2.4樣品檢測按2.2.1項下配制方法，配制三批供試品溶液；以2.2.2.3項下色譜條件進樣，按外標(biāo)法以峰面積計算左氧氟沙星中右氧氟沙星的含量。檢測數(shù)據(jù)為供試品溶液1至3中右氧氟沙星峰面積分別為258510、258412、266730自身對照溶液中左氧氟沙星峰面積分別為1235222、1244412、1244412.結(jié)果分別為0.21%、0.21%、0.22%，結(jié)果表明本方法能準(zhǔn)確可靠的檢測出右氧氟沙星的含量。討論手性碳原子中心是由三維結(jié)構(gòu)引起的，一個分子存在一個C分別和四個不同的原子或其他基團相連。因空間排列方式的不同，形成不對稱的三維結(jié)構(gòu)分子。如一個分子不能與它的鏡像重合，那么該分子與它的鏡像互稱為對映異構(gòu)體[2]手性藥物指藥物的分子結(jié)構(gòu)中存在手性碳，且該藥物是由單一對映體組成；在機體調(diào)控與代謝過程中，酶和受體等都具有超強的手性識別能力，它們對對映體藥物親和能力不一樣，受體分子與手性藥物幾何構(gòu)型匹配才能起到應(yīng)有的藥效，從而使得含手性因素的藥物對映體在人體內(nèi)的代謝過程、藥理活性以及毒性等方面存在著顯著差異。左氧氟沙星與右氧氟沙星就是如此，左氧氟沙星在機體中的藥物活性高，毒理性較低，反觀右氧氟沙星無藥理活性，且毒副作用強于左氧氟沙星，故在生產(chǎn)中要嚴格控制右氧氟沙星的含量，減少其在成品中的占比。本方法能夠采用高效液相色譜法準(zhǔn)確，定量，可靠的檢測出右氧氟沙星的含量。Reference[1]楊學(xué)智.左氧氟沙星溶解度測