病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座

病毒感染及其試驗(yàn)診療華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院從屬協(xié)和醫(yī)院盧銀平1病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第1頁(yè)2病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第2頁(yè)3病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第3頁(yè)據(jù)衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)，中國(guó)自1985年出現(xiàn)第一例艾滋病病人以來(lái)，截至年10月底，累計(jì)匯報(bào)艾滋病病毒感染者和病人319877例，其中艾滋病病人102323例；匯報(bào)死亡49845例。

4病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第4頁(yè)5病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第5頁(yè)6病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第6頁(yè)病毒基本性狀和分類(lèi)7病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第7頁(yè)病毒大小與形態(tài)

一、病毒大小與測(cè)量單位

極其微小，測(cè)量單位為納米（nanometer，nm），20nm-300nm觀察及測(cè)量：電鏡、濾過(guò)、超速離心、X線衍射二、病毒形態(tài)

球形，磚形，桿形，彈形，長(zhǎng)絲狀，蝌蚪形8病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第8頁(yè)9病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第9頁(yè)狂犬病毒(100-300x75nm)乳頭瘤病毒(70-90nm)10病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第10頁(yè)輪狀病毒(60-80nm)11病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第11頁(yè)乙型肝炎病毒(42nm)流感病毒(80-120nm)12病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第12頁(yè)病毒結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成

一、病毒結(jié)構(gòu)核酸，衣殼，包膜

二、病毒化學(xué)組成

核酸，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和糖類(lèi)

13病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第13頁(yè)核酸（DNA/RNA)蛋白質(zhì)保護(hù)核酸結(jié)構(gòu)蛋白：參加感染含有抗原性非結(jié)構(gòu)蛋白：病毒酶類(lèi)（病毒復(fù)制，抑制宿主對(duì)應(yīng)功效）脂類(lèi)和糖：主要存在于包膜中維護(hù)病毒體結(jié)構(gòu)完整性與宿主細(xì)胞有親和及融合性能表現(xiàn)病毒種、型抗原性與病毒引發(fā)機(jī)體中毒癥狀相關(guān)14病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第14頁(yè)病毒增殖吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝成熟釋放

一、病毒復(fù)制周期15病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第15頁(yè)16病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第16頁(yè)17病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第17頁(yè)病毒受體(viralreceptor,VP)是指存在于細(xì)胞表面，能被病毒特異識(shí)別并與之結(jié)合，促進(jìn)病毒感染一組分子復(fù)合物。受體是病毒侵入門(mén)戶，它決定了病毒宿主范圍，組織及細(xì)胞嗜性。

18病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第18頁(yè)二、病毒異常增殖

缺點(diǎn)病毒:是指因病毒基因組不完整或者因基因某一點(diǎn)改變而不能進(jìn)行正常增殖病毒。缺點(diǎn)病毒不能復(fù)制，但卻能干擾同種成熟病毒體進(jìn)入易感細(xì)胞，故又稱(chēng)為缺點(diǎn)干擾顆粒(defectiveinterferingparticles）

頓挫感染:病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞，若細(xì)胞缺乏病毒復(fù)制所需酶、能量和原料等，則病毒不能合成本身成份；或雖合成部分或全部成份，不能裝配和釋放，稱(chēng)為頓挫感染。組成頓挫感染細(xì)胞被稱(chēng)為非容納性細(xì)(non-permissivecells)。19病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第19頁(yè)病毒遺傳與變異

一、病毒性狀變異

毒力變異抗原性變異空斑變異

對(duì)理化原因抵抗力或依賴性變異二、病毒變異機(jī)制基因突變基因重組20病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第20頁(yè)遺傳物質(zhì)變異類(lèi)型1.基因突變突變株—指病毒基因堿基序列改變，造成表型性狀改變毒株條件致死性突變株（conditional-lethalmutant）

溫度敏感突變株（temperaturesensitivemutant,ts株）為條件致死性突變株中應(yīng)用最廣泛缺點(diǎn)型干擾突變株（defectiveinhibitionmutant，DIM）宿主范圍突變株（hostrangemutant,hr突變株）耐藥突變株（drug-resistantmutant）21病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第21頁(yè)2.基因重組與重配兩種不一樣病毒感染同一細(xì)胞時(shí)，可發(fā)生基因交換而形成新性狀重組體。

基因重組（recombination）——不分節(jié)段基因組病毒基因重配（reassortment）——分節(jié)段基因組病毒類(lèi)型：活病毒之間：N0H0+

N1H1——N0H1活病毒與滅活病毒之間（交叉復(fù)活）滅活病毒之間（多重復(fù)活）22病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第22頁(yè)3.基因整合（geneintegration）病毒基因組（DNA病毒與逆轉(zhuǎn)錄病毒）與細(xì)胞細(xì)胞基因組重組過(guò)程。整合可引發(fā)宿主細(xì)胞基因改變→細(xì)胞遺傳性改變→細(xì)胞轉(zhuǎn)化→個(gè)別可發(fā)生細(xì)胞惡化→腫瘤23病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第23頁(yè)24病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第24頁(yè)病毒對(duì)理化原因抵抗力

一、物理原因溫度，電離輻射，紫外線二、化學(xué)原因氧化劑，脂溶劑，酚，甲醛，甘油,

酸堿等25病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第25頁(yè)病毒分類(lèi)與命名標(biāo)準(zhǔn)1.病毒體特征

顆粒大小，顆粒形狀，有沒(méi)有包膜，衣殼對(duì)稱(chēng)性和結(jié)構(gòu)2.基因組特征

核酸類(lèi)型（DNA或RNA），核酸鏈數(shù)（單鏈/雙鏈），核酸極性（正鏈/負(fù)鏈），核酸片段數(shù)3.蛋白質(zhì)特征

蛋白質(zhì)數(shù)目，大小，蛋白質(zhì)功效（轉(zhuǎn)錄酶，血凝素，蛋白融合）4.復(fù)制特征

核酸復(fù)制類(lèi)型，轉(zhuǎn)錄特征5.理化特征

pH穩(wěn)定性，離子強(qiáng)度，抵抗力

6.生物學(xué)特征

血清學(xué)關(guān)系，宿主范圍，致病性，組織嗜性，傳輸路徑，媒介關(guān)系，地理分布26病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第26頁(yè)病毒感染與免疫

27病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第27頁(yè)1.殺細(xì)胞性感染：病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制完成，短時(shí)間內(nèi)釋放大量子代病毒即造成細(xì)胞死亡，多見(jiàn)于無(wú)包膜殺傷性強(qiáng)病毒。

抑制宿主細(xì)胞代謝（阻斷細(xì)胞核酸和蛋白質(zhì)合成）一些衣殼蛋白含有直接殺傷宿主細(xì)胞作用細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）對(duì)細(xì)胞影響28病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第28頁(yè)ABL929cells+EMCV29病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第29頁(yè)

2.

穩(wěn)定狀態(tài)感染：

一些病毒進(jìn)入細(xì)胞后能夠復(fù)制，卻不引發(fā)細(xì)胞裂解、死亡，在相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)細(xì)胞和病毒并存，同時(shí)增殖，細(xì)胞病變遲緩且輕。多見(jiàn)于有包膜病毒，出芽方式釋放子代。有些病毒蛋白有融膜特征，細(xì)胞膜融合使病毒擴(kuò)散，結(jié)果形成多核巨細(xì)胞。細(xì)胞膜成份改變，嵌合有病毒特異性抗原，被機(jī)體抗體或CTL所識(shí)別并去除。對(duì)細(xì)胞影響30病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第30頁(yè)細(xì)胞融合31病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第31頁(yè)

3.包涵體形成概念：一些受病毒感染細(xì)胞內(nèi)，用普通光學(xué)顯微鏡可看到與正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)和著色不一樣圓形或橢圓形斑塊。位置意義胞質(zhì)內(nèi)（痘病毒）胞核內(nèi)（皰疹病毒）二者都有（麻疹病毒）含有診療意義，如內(nèi)基小體32病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第32頁(yè)麻疹病毒包涵體33病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第33頁(yè)4.細(xì)胞凋亡：病毒感染細(xì)胞后，直接由病毒本身作用或間接地作為誘導(dǎo)因子引發(fā)細(xì)胞凋亡。34病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第34頁(yè)細(xì)胞凋亡后基因組DNA梯狀電泳條帶35病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第35頁(yè)5.基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化：少數(shù)病毒感染細(xì)胞后病毒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，促進(jìn)細(xì)胞DNA合成，促進(jìn)細(xì)胞增生或細(xì)胞轉(zhuǎn)化——即細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變，增殖加緊，失去細(xì)胞間接觸抑制等。是病毒致腫瘤原因之一36病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第36頁(yè)病毒致腫瘤原因?qū)m頸癌肝癌鼻咽癌惡性淋巴瘤白血病37病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第37頁(yè)（二）病毒感染免疫病理作用抗體介導(dǎo)免疫病理作用：Ⅱ、Ⅲ型超敏反應(yīng)細(xì)胞介導(dǎo)免疫病理作用：CTL、本身抗原免疫抑制作用：HIV、CMV38病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第38頁(yè)二、病毒感染傳輸方式39病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第39頁(yè)㈠傳輸方式水平傳輸病毒在人群不一樣個(gè)體間傳輸，也包含從動(dòng)物到動(dòng)物再到人傳輸垂直傳輸

經(jīng)過(guò)胎盤(pán)或產(chǎn)道，病毒由宿主親代傳給宿主子代方式——HBV、CMV、HIV、風(fēng)疹病毒（其它微生物種少見(jiàn)）。40病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第40頁(yè)㈡?zhèn)鬏斅窂胶粑老绖?chuàng)傷感染接觸感染血液傳輸性傳輸節(jié)肢動(dòng)物媒介…41病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第41頁(yè)三、臨床感染類(lèi)型

隱性感染顯性感染急性感染連續(xù)性感染慢性感染潛伏性感染慢發(fā)病毒感染急性感染遲發(fā)并發(fā)癥42病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第42頁(yè)隱性感染

病毒感染后不引發(fā)臨床癥狀顯性感染病毒感染后引發(fā)臨床癥狀43病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第43頁(yè)病毒在體內(nèi)連續(xù)數(shù)月至多年，甚至數(shù)十年，且經(jīng)常重復(fù)間斷地向外排毒，可出現(xiàn)癥狀，引發(fā)慢性進(jìn)行性疾病，也可不出現(xiàn)癥狀而長(zhǎng)久帶病毒。攜帶者為主要傳染源連續(xù)性感染44病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第44頁(yè)病毒感染后有很長(zhǎng)潛伏期，經(jīng)多年，數(shù)十年后，可發(fā)生一些進(jìn)行性疾病，最終死亡。（HIV）

病程長(zhǎng)，病毒可檢出（HBV）潛伏感染：病毒基因存在于一定組織或細(xì)胞中并不產(chǎn)生感染性病毒體，但在一定條件下，病毒被激活而進(jìn)入復(fù)制狀態(tài)，引發(fā)臨床癥狀（皰疹病毒）慢發(fā)病毒感染

持續(xù)性感染

慢性感染

潛伏感染急性病毒感染遲發(fā)并發(fā)癥急性感染后1年或多年，發(fā)生致死性病毒病，如亞急性硬化性全腦炎（SSPE）。45病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第45頁(yè)病毒感染試驗(yàn)診療

46病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第46頁(yè)兒童腮腺炎病毒感染47病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第47頁(yè)HSV-I感染引發(fā)唇皰疹48病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第48頁(yè)乳頭瘤病毒感染引發(fā)各種癥狀49病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第49頁(yè)病毒感染診療意義病毒診療是治療前提用于判斷預(yù)后用于疾病預(yù)防用于疾病監(jiān)測(cè)指導(dǎo)用藥50病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第50頁(yè)病毒學(xué)試驗(yàn)室診療四個(gè)方面

檢測(cè)病毒體極其所致宿主細(xì)胞病理改變（直接檢測(cè)和分離判定）

檢測(cè)病毒蛋白抗原和核酸

檢測(cè)抗體

其它非特異性物質(zhì)51病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第51頁(yè)一、標(biāo)本采集與送檢標(biāo)本采集時(shí)間選擇發(fā)病早期

標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸

低溫、含抗生素培養(yǎng)基標(biāo)本采集部位及種類(lèi)選擇血液、腦脊液、宮腔拭子、糞便、含漱液、咽喉拭子、尿液或尿道拭子、尸檢標(biāo)本52病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第52頁(yè)53病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第53頁(yè)甲型肝炎標(biāo)本采集及時(shí)間選擇54病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第54頁(yè)常規(guī)分離與判定動(dòng)物接種雞胚接種組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)移植培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培養(yǎng)方法55病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第55頁(yè)56病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第56頁(yè)病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖指標(biāo)1、CPE2、紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞病變細(xì)胞57病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第57頁(yè)內(nèi)基氏小體58病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第58頁(yè)病毒數(shù)量和感染性測(cè)定1、蝕斑試驗(yàn)2、ID50

或TCID50

病毒感染雞胚動(dòng)物或細(xì)胞后，引發(fā)50%發(fā)生死亡或病變最小量

病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生不足病灶，稱(chēng)蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制使局部單層細(xì)胞脫落形成，稱(chēng)蝕斑形成單位，病毒懸液中感染性病毒量以每毫升蝕斑形成單位（PFU）來(lái)表示。59病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第59頁(yè)病毒判定形態(tài)學(xué)判定：細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、包含體血吸附和血凝作用干擾作用病毒成份直接檢測(cè)60病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第60頁(yè)電鏡技術(shù)標(biāo)本制備：超薄切片法（正染法）和負(fù)染法病毒識(shí)別：有包膜和無(wú)包膜病毒電鏡技術(shù)應(yīng)用：分類(lèi)及診療61病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第61頁(yè)病毒免疫學(xué)診療方法標(biāo)識(shí)法不標(biāo)識(shí)法免疫酶法、免疫熒光法血凝法、乳膠凝集法免疫轉(zhuǎn)印法SPA法、凝集抑制法放射免疫法補(bǔ)體結(jié)正當(dāng)、中和試驗(yàn)法化學(xué)發(fā)光法沉淀反應(yīng)、免疫電鏡測(cè)熱及其它其它顆粒凝集法免疫PCR法62病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第62頁(yè)

病毒血清學(xué)診療中和試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)免疫擴(kuò)散等免疫熒光免疫酶技術(shù)63病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第63頁(yè)血凝抑制試驗(yàn)64病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第64頁(yè)雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)65病毒感染和實(shí)驗(yàn)診療專(zhuān)家講座第65頁(yè)病毒快速診療光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交South