微生物檢查技術

微生物檢驗技術墨汁染色:陽性微生物檢查技術1/35曲霉菌檢驗

形態(tài)學觀察和直接涂片為主快速早期檢驗方法少G試驗和GM試驗微生物檢查技術2/35曲霉菌檢驗技術—基礎煙曲霉?菌落特征：生長快，絨毛狀或絮狀，表面深綠色或煙綠色后面蒼白色或淡黃色48℃生長良好?鏡下特征：分生孢子頭短柱狀，分生孢子梗壁光滑，呈淡綠色頂囊呈燒瓶狀小梗單層、分布在頂囊上半部分分生孢子球形、綠色、有小刺微生物檢查技術3/35曲霉形態(tài)煙曲霉菌落微生物檢查技術4/35曲霉形態(tài)煙曲霉棉蘭染色微生物檢查技術5/35黃曲霉黃曲霉形態(tài)微生物檢查技術6/35黃曲霉形態(tài)黃曲霉?菌落特征：生長快，羊毛狀或棉毛狀，表面黃綠色或棕綠色后面無色或淡黃色?鏡下特征：分生孢子頭放射狀或疏松狀，分生孢子梗壁厚粗糙頂囊呈球形或近球形小梗單層、雙層或同時存在、充滿頂囊表面分生孢子球形、近球形微生物檢查技術7/35黃曲霉黃曲霉分生孢子棉蘭染色微生物檢查技術8/35黑曲霉?菌落特征：生長快，羊毛狀或絨毛狀，表面白色→黃色→黑色后面無色或淡黃色?鏡下特征：分生孢子頭放射狀，或列柱狀分生孢子梗壁光滑，較厚頂囊呈球形或近球形，小梗雙層、密生于頂囊全部表面分生孢子球形、有褐色色素沉積在細胞壁，粗糙有刺微生物檢查技術9/35黑曲霉黑曲霉菌落微生物檢查技術10/35土曲霉形態(tài)?菌落特征：生長快，絨毛狀，有淺放射狀溝紋表面肉桂色或黃褐色；培養(yǎng)基可呈污褐色，后面淡黃色到棕色?鏡下特征：分生孢子頭致密圓柱狀分生孢子梗無色光滑頂囊呈半球形，上1/2~1/3處有雙層小梗分生孢子球形或近球形，壁光滑，棕色微生物檢查技術11/35土曲霉土曲霉形態(tài)微生物檢查技術12/35土曲霉土曲霉分生孢子頭棉藍染色微生物檢查技術13/35構巢曲霉?菌落特征：中等速度生長，絨毛狀→粉末狀表面：綠色或黃褐色后面：紫色或橄欖色?鏡下特征：分生孢子頭呈密短圓柱形分生孢子梗短，彎曲，光滑無色頂囊呈半球形或燒瓶形，雙層小梗分生孢子球形，粗糙，有小刺或小皺褶殼細胞較多（球形、膜厚較大），可見閉囊殼（灰白紫紅色）微生物檢查技術14/35構巢曲霉菌落形態(tài)微生物檢查技術15/35構巢曲霉分生孢子頭微生物檢查技術16/35曲霉菌檢驗技術進展在曲霉感染免疫學診療中倍受青睞?標本可取血清、尿液、腦脊液及BAL液等?被檢測抗原成份主要是半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)脂多糖GM在感染后24h即可檢測出，與病情嚴重程度一致?慣用是ELISA、RIA和乳膠凝集試驗等?敏感性和特異性因方法而異微生物檢查技術17/35曲霉半乳甘露聚糖抗原測定曲霉抗原乳膠凝集試驗:特異性：90-100%；敏感性：26-76%(15ng/ml)曲霉抗原EIA試驗:特異性：>90%；敏感性：80-100%(1ng/ml)動態(tài)檢測,每七天二次GM試驗參考值：I＞1.5陽性；1.0～1.5可疑；I＜1.0陰性微生物檢查技術18/35微生物檢驗技術和進展美國和歐洲判斷標準不一樣(1.0,0.6)我國學者發(fā)覺單次測定大于1.0，或連續(xù)兩次大于0.8為陽性標準，敏感度和特異度均較高，分別為81.8%和93.3%紀宇等中華血液學雜志，28:83-86微生物檢查技術19/35曲霉感染抗原檢測優(yōu)點結果穩(wěn)定：檢測不受患者免疫功效情況影響?敏感性強：在臨床癥狀出現(xiàn)同時或之前,便可在體液中檢測出特異性抗原,故適合用于早期診療?可判斷預后及療效：抗原濃度可隨病情活動而改變,有利于療效判定微生物檢查技術20/35微生物檢驗技術和進展假陽性情況:使用哌拉西林/他唑巴坦，一些葡萄糖酸鹽制劑，與其它真菌抗原成份交叉正在申請“三證”微生物檢查技術21/35微生物檢驗技術進展血漿?－1，3－D葡聚糖檢測（G試驗）目標：經(jīng)過測定血漿、體液及支氣管肺泡灌洗液中細胞壁成份（血漿?－1，3－D葡聚糖），診療深部真菌感染原理：利用鱟G凝血因子被?葡聚糖激活后形成凝固蛋白，以濁度定量標本中真菌?葡聚糖濃度微生物檢查技術22/35微生物檢驗技術和進展參考臨界值：13.7pg/ml真菌定植：13.7～20pg/ml深部真菌感染：＞20pg/ml意義：早期診療除結合菌、隱球菌外深部真菌感染，如念珠菌、曲霉等。敏感性與特異性為60～90％微生物檢查技術23/35微生物檢驗技術和進展假陽性:利用纖維素膜進行血液透析患者、一些紗布或其它醫(yī)療用具中含有葡聚糖、一些靜脈制劑含葡聚糖、一些細菌敗血癥患者(鏈球菌)、使用安美汀者動態(tài)監(jiān)測可防止假陽性已經(jīng)有“三證”微生物檢查技術24/35微生物培養(yǎng)技術和進展現(xiàn)在國內已經(jīng)有生產(chǎn)廠家且北京、上海、天津、廣東已經(jīng)有定價收費項目兩種試驗比較:國外研究表明：兩種試驗敏感性、特異性相當，其出現(xiàn)陽性時間稍早于半乳甘露聚糖抗原，二者均早于影像學出現(xiàn)改變，聯(lián)合檢測可提升特異性JClinMic，，43:299-305微生物檢查技術25/35定量測定1-3-β-D-葡聚糖意義早期診療：深部真菌感染增多且復雜，早期癥狀無特異性，往往被原發(fā)病掩蓋，病程長，發(fā)覺較晚，死亡率高。所以對深部真菌感染治療成敗關鍵在于早期診療?？焖僭\療：真菌感染就醫(yī)患者，往往病情嚴重，傳統(tǒng)微生物分離、培養(yǎng)與判定需要時間較長，患者在等候期間有可能病情加重，甚至死亡。指導用藥：快速確定真菌感染后，主動使用抗真菌藥品。為臨床選取副作用小，療效高，價格昂貴藥品提供準確依據(jù)。評價用藥：應用抗真菌藥品后，檢測葡聚糖改變，評價選取藥品正確性。監(jiān)護病程：監(jiān)護深部真菌感染易感人群病發(fā)狀態(tài)。動態(tài)觀察：易感人群，臨床療效微生物檢查技術26/35定量測定1-3-β-D-葡聚糖設備MB-80微生物快速動態(tài)測定系統(tǒng)：主機反應器，數(shù)據(jù)處理分析軟件，計算機，打印機，電子恒溫加熱儀等。微生物檢查技術27/35定量測定1-3-β-D-葡聚糖設備T01智能恒溫儀真菌檢測專用真空采血管，采尿杯無熱原平底專用試管微生物檢查技術28/35測定葡聚糖能夠很快得到結果，在實踐中無須等候真菌培養(yǎng)結果，對臨床醫(yī)生采取主動治療提供依據(jù)。動態(tài)快速檢測，不受血中抗生素和酶等影響。全部真菌細胞膜上都含有1-3-β-D葡聚糖，而其它微生物、動物及人細胞成份和細胞外液都不含這種成份，所以在機體體液中檢測到1-3-β-D葡聚糖是診療深部真菌感染有效依據(jù)。不能確定菌種，但能必定是否有真菌感染。指導臨床科學合理使用抗真菌藥品。當檢測到標本中葡聚糖含量較高時，即刻給予系統(tǒng)治療，無須等判定出種屬。定量測定1-3-β-D-葡聚糖特點樣品起源：血漿，血清，腹水，尿液，腦脊液微生物檢查技術29/35定量測定1-3-β-D-葡聚糖原理凝固蛋白原凝固蛋白動態(tài)濁度法凝固酶凝固酶原活化因子G因子G1-3-β-D-葡聚糖全過程2小時內完成，可及時提供結果，指導臨床微生物檢查技術30/35定量測定1-3-β-D-葡聚糖原理不一樣濃度反應體系引發(fā)不一樣濁度改變，當透光率到達法線時，該時間對數(shù)（LgTg），與葡聚糖濃度（LgC），呈直線關系定量依據(jù)微生物檢查技術31/35定量測定1-3-β-D-葡聚糖設備國內外現(xiàn)實狀況國外現(xiàn)實狀況國內現(xiàn)實狀況美國、日本等國均已出現(xiàn)專用1-3-β-D葡聚糖檢測儀器及配套檢測試劑盒，而且取得FDA及厚生省同意文號，作為一個日常檢測項目。MB-80微生物動態(tài)快速測定系統(tǒng)（金山川企業(yè)）首家取得SDA認證普及面廣,影響大.國內獨創(chuàng)專利產(chǎn)品計算機軟件著作權微生物檢查技術32/35使用MB-80臨床評價關于真菌葡聚糖試劑比對試驗--------------------------------------------------------病人細菌培養(yǎng)結果金山川試劑和光試劑--------------------------------------------------------65/M白色念珠菌86.284.676/M熱帶念珠菌36.233.522/F毛霉菌480.9476.675/M煙曲霉菌265.1235.481/M熱帶念珠菌31.536.278/F光滑念珠菌54.255.761/M白色念珠菌22.420.268/F近平滑念珠菌8.65.6--------------------------------------------------------微生物檢查技術33/35使用MB-80臨床評價正常對照組血漿1-3-β-D葡聚糖含量為2.83±2.57pg/ml；深部真菌感染組為54.06±36.13pg/ml。經(jīng)t-檢驗分析，對照組與深部真菌感染組1-3-β-D葡聚糖平均值差異非常顯著（t=7.741,P＜0.001）。血漿葡聚糖檢測可在擬診早期為臨床醫(yī)生提供是否感染真菌可靠信息，是一個實用真菌感染早期診療方法。第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院檢驗科MB-80微生物快速動態(tài)檢測儀研究深部真菌感染患者血漿1-3-β-D葡聚糖檢測與臨床意義時發(fā)覺：---------中華醫(yī)院感染學雜志,,15(3):354-355微生物檢查技術34/35深部真菌感染病例分析患者，男,41歲,因雙下肢關節(jié)疼痛1月余,發(fā)燒、咳嗽、痰血10余天于9月12日入院.入院前曾給予青霉素抗感染治療,無好轉,隨即出現(xiàn),體溫在39度左右波動,并有咳痰,痰中血絲癥狀.胸部CT檢驗,發(fā)覺左肺陰影。入院后9月18日進行支氣管鏡檢驗及作病理活檢,顯示肺左上方葉管口真菌感染.診療為侵襲性肺曲菌病.試驗室檢驗:入院當日化驗血常規(guī)顯示白細胞10.1*109/L(中性粒細胞71%,